神经肽Ghrelin与Nesfatin—1在海人酸致痫大鼠血清中的表达变化及意义

褚旭 孔庆霞

【摘 要】目的：分析神经肽Ghrelin与Nesfatin-1在海人酸致痫大鼠血清中的表达变化及意义。方法：随机将海人酸致痫后的生理盐水灌注动物胃内（观察1组），海人酸致痫后的丙戊灌注动物胃内（观察2组），规定两组分贝以3h、6h、12h、 24h及3d、7d、14d为时点亚组；同时建立空白组（对照1组）、假手术组（对照2组），然后用放射免疫法、ELISA以及免疫组化法来检测其血清变化情况。结果：Ghrelin、Nesfatin-1的阳性表达是细胞质里面有椭圆形/圆形棕黄色颗粒，和对照1组、对照2组相比，观察1组、观察2组各个时间点的Ghrelin表达都明显降低（P<0.05）；同时观察1组与观察2组相比，观察2组的Ghrelin表达水平高，特别在灌胃1天、7天后差异很明显（P<0.05），但<对照1组。观察1组、观察2组各个时间点的Nesfatin-1表达水平均提高（P<0.05），但两组各个时间点的Nesfatin-1表达水平相比，观察2组有一定程度的降低（P<0.05），但>对照1组。结论：通过检测血清酰基化Ghrelin、Nesfatin-1的水平，能够了解下丘脑中对应神经肽的变化方向，进而为临床诊治癫痫疾病、评价疗效提供有效参考指标。

【关键词】神经肽类；Ghrelin；Nesfatin-1；大鼠；血清

【文章编号】1004-7484（2014）06-3434-01

Ghrelin、Nesfatin-1是人们摄食过程中，能够调节平衡能量的两条重要神经肽。现阶段医学界的专家们通过研究发现这两条神经肽和癫痫疾病发作程度、治疗效果有紧密联系[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

用清洁级别为（6～8）周龄的雄性Sprague—Dawley大鼠作为本地实验动物，其体重为（250～280）g，用单笼饲养。随机将海人酸致痫后的生理盐水灌注动物胃内（观察1组），海人酸致痫后的丙戊灌注动物胃内（观察2组），规定两组分贝以3h、6h、12h、 1d及3d、7d、14d为时点亚组，每个时点6只。同時建立空白组（对照1组）、假手术组（对照2组），每组都是6只。

将海人酸融入无菌生理盐水中，达到1mg/ml的浓度，用65mg/kg浓度为0.5%的戊巴比妥钠麻醉大鼠，根据标准的颅骨水平位固定好大鼠头部，并参照大鼠脑立体定位图谱，再用微量注射器与杏仁核保持垂直水平，在硬膜下8.5mm位置，在15分钟之内注射1.0ul的海人酸，大约过了5分钟后拔针。林对对照2组注入1ul的生理盐水，按照Racine分级来评定癫痫发作程度，当大鼠出现>Ⅴ级且连续5次发作说明模型成功。

1.2 实验方法

①采集标本，首先采集2ml大鼠尾静脉血，端头取闹，当血液在室温条件下凝固约（10～20

）分、以300r/mim的速度离心20min之后收集起来，放置在零下20度的环境中保存。用常规石蜡包埋脑组织，实施连续冠状切片，厚度为6um，并将其放置在经防脱片剂处理后的载玻片上面。在温度为60℃的烤箱中过夜。

②用放射免疫法（RIA）检测Ghrelin、用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测Nesfatin-1，同时用免疫组华发检测下丘脑Ghrelin、Nesfatin-1。

1.3 统计学方法

2 结果

Ghrelin、Nesfatin-1的阳性表达是细胞质里面有椭圆形/圆形棕黄色颗粒，和对照1组、对照2组相比，观察1组、观察2组各个时间点的Ghrelin表达都明显降低（P<0.05）；同时观察1组与观察2组相比，观察2组的Ghrelin表达水平高，特别在灌胃1天、7天后差异很明显（P<0.05），但<对照1组。观察1组、观察2组各个时间点的Nesfatin-1表达水平均提高（P<0.05），但两组各个时间点的Nesfatin-1表达水平相比，观察2组有一定程度的降低（P<0.05），但高于对照1组。

3 讨论

癫痫作为临床常见的神经系统疾病之一，严重威胁着人类健康，当前诊断癫痫、评价治疗该疾病的效果主要借助神经影像学技术、患者临床特征等。随着对癫痫疾病和神经肽类物质之间联系研究的深入，大多数医学专家们认为，当患者癫痫发作时，其机体内神经肽水平会发生短暂、明显的变化，这可以当做评价影响脑功能代谢、神经兴奋性变化的重要方法[2]。

全部海人酸致痫大鼠都诱发了癫痫，致痫组大鼠给药以后处于麻醉未清醒期，待（82～86）分之后出现节律性咀嚼，但在其前肢抬起，发生抽搐之后又迅速跌倒，以抖动状态结束，疾病发作时间为（2.01～2.73）分。给药后（6～8）小时间断性发生点头、前肢阵挛以及面部肌肉抽搐情况，给药后（8～10）h大多数大鼠恢复正常活动，无显著性癫痫行为，（1～10）天后发生反复自发性发作，每隔7天约（1～3）次。本研究表明，海人酸致痫大鼠模型能够较好地模拟出人类颞叶癫痫疾病的发生、传播、形成过程。定量、定性检测下丘脑旁核范围内分泌的Ghrelin、Nesfatin-1，然后和对照1组、对照2组进行比较可知，致痫组的Ghrelin表达降低，Nesfatin-1表达升高，这说明了癫痫发作时神经肽表达会产生明显的变化。

总之，通过检测血清酰基化Ghrelin、Nesfatin-1的水平，能够了解下丘脑中对应神经肽的变化方向，进而为临床诊治癫痫疾病、评价疗效提供有效参考指标。

参考文献：

[1] 刘诤，王峰.海人酸致痫大鼠神经肽Ghrelin和Nesfatin-1的表达[J].中华医学杂志，2011，5（7）：102-103.