杜仲70%乙醇提取物对镉致小鼠肾脏损伤的保护作用研究

2014-10-19汪纪仓杨国栋杨自军董发明

中国饲料 2014年9期

林霖，邱妍，汪纪仓，杨国栋，杨自军，董发明

（河南科技大学动物科技学院，河南洛阳 471003）

杜仲树为我国特有树种，杜仲皮是一种名贵中草药，具有补肝肾、益气、安胎等作用。成分分析表明，杜仲皮、叶内含有多糖、黄酮、木脂素等丰富的化学物质，具有抗氧化、增强机体免疫力、中枢镇静、利尿等作用（杜红岩，2003）。饲料中添加杜仲可促进动物生长，增强机体免疫，改善肉品质（朱丹等，2013）。近年来，研究发现多种中草药成分能拮抗重金属对动物机体的有害作用（费东亮等，2012；朱萍萍等，2007）。而有关杜仲对重金属致机体组织、器官的损伤有无保护作用尚未见报道，本试验研究了杜仲70%乙醇提取物对镉致小鼠肾脏损伤及脂质过氧化的影响，为开发拮抗镉毒性中草药添加剂提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂杜仲70%乙醇提取物：杜仲皮（购于洛阳同仁堂大药房），粉碎后经10倍量70%乙醇提取2次，过滤，浸出液进行低压蒸馏、浓缩，浸膏提取率8.8%，用蒸馏水稀释为所需浓度；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒均购于南京建成生物工程有限公司。

1.1.2 主要仪器切片机、精密电子天平、微量加样枪、台式高速离心机、分光光度计、水浴锅。

1.1.3 试验动物清洁级健康昆明小鼠40只，雌雄各半，体重16～20 g，购于郑州大学试验动物中心。小鼠常规饲养，自由取食、饮水，试验期为8 d。

1.2 方法

1.2.1 试验分组与处理小鼠经1周观察，无异常，随机分为4组，每组10只，分别为对照组、模型组、低剂量杜仲干预组和高剂量杜仲干预组。其中低、高剂量杜仲干预组分别灌胃低、高（0.17、0.68 g/kg体重杜仲浸膏）两个剂量的杜仲提取物，对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水，每天1次，连续灌胃7 d，并于第 5、6天灌胃后1 h，给模型组和杜仲干预组小鼠腹腔注射氯化镉溶液，注射剂量为4 mg/kg体重，对照组腹腔注射等体积生理盐水，于末次染镉24 h摘眼球放血处死小鼠。剖开腹腔，取出两侧肾脏，剥离脂肪及被膜，用冷生理盐水冲洗干净，一侧肾脏置入10%中性甲醛中固定，用于组织切片制作；切取另一侧部分肾脏，精确称量，用眼科剪剪碎，置于冰浴的玻璃匀浆器中匀浆，用于SOD、GSH-Px、MDA及组织蛋白含量的测定。

1.2.2 肾脏组织病理学检测常规制备小鼠肾脏石蜡组织切片，H.E.染色，光镜观察肾脏组织结构。

1.2.3 肾脏抗氧化指标检测肾皮质匀浆，蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝法；SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法；GSH-Px活性测定采用改良DTNB直接法、MDA含量采用硫代巴比妥法，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 数据处理各组试验数据均用 “平均数±标准差”表示，利用SPSS17.O统计软件中的方差分析法比较组间差异。

2 结果与分析

2.1 各组小鼠肾脏组织病理学观察结果对照组小鼠肾脏组织结构清晰，肾小球及肾小管结构正常；模型组肾脏充血，部分肾小球萎缩，近曲小管浊肿、管腔狭窄，空泡变性，可见肾小管上皮细胞刷状缘脱落，部分肾小管上皮细胞胞核浓缩、核膜崩解，肾小管管形崩解、局部发生凝固性坏死；杜仲低剂量干预组肾小球轻度萎缩，毛细血管轻度扩张，肾小管上皮细胞排列紊乱，但与模型组比较明显减轻；杜仲高剂量干预组部分肾小管上皮细胞轻度排列紊乱，轻度变性，少数肾小球萎缩，间质充血不明显。

2.2 杜仲提取物对小鼠肾脏组织抗氧化酶活性及脂质过氧化产物的影响从表1可以看出，模型组肾脏组织SOD和GSH-Px活性分别较对照组降低27.27%和42.13%（P＜0.05），MDA含量升高42.07%（P＜0.05）；与模型组比较，低剂量杜仲干预组小鼠肾脏组织SOD活性有所提高，但差异不显著（P ＞ 0.05），GSH-Px活性提高 13.03%（P ＜0.05）；高剂量杜仲干预组肾脏组织SOD和GSHPx活性分别提高 19.28%和 39.06%（P＜0.05），MDA含量降低18.47%（P＜0.05）。

表1 各组小鼠肾皮质脂质过氧化指标检测结果

3 讨论

镉（Cd）是一种主要环境污染物，我国镉污染比较严重，镉在动物及人体内代谢缓慢，对人和动物机体的损伤广泛，并且存在多种损伤机制，其中氧化应激损伤起着主要的作用（陈大伟等，2008）。肾脏是镉毒性作用的主要靶器官，镉急、慢性染毒都可对动物肾脏造成不同程度的损伤。本试验连续2 d给小鼠腹腔注射4 mg/kg体重氯化镉溶液，小鼠肾脏组织MDA含量显著升高，表明肾脏受到严重的脂质过氧化损伤，肾脏的形态结构发生明显的病理学改变，表明镉对小鼠肾脏具有较强的毒性。李清钊等（2002）研究发现，茶多酚可减轻镉对肾脏的脂质过氧化损伤。朱萍萍等（2007）研究发现，冬虫夏草提取物对镉致肾脏的毒性作用具有一定的保护。高银辉等（2011）和周程艳等（2009）通过杜仲提取物对四氯化碳及免疫肝损伤的影响研究发现，杜仲提取物能提高四氯化碳及肝组织SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，拮抗肝损伤作用。本研究结果显示，杜仲干预组小鼠肾脏SOD和GSH-Px活性提高，脂质过氧化产物MDA明显减少，组织细胞损伤明显减轻，并且存在剂量－效应关系，表明杜仲提取物中的一些活性成分能对抗镉致小鼠肾脏的损伤，其机制与杜仲提取物的抗氧化活性有关；另外，杜仲中的珊瑚甙还能够刺激副交感神经中枢，加快尿酸转移和排出，具有明显的利尿作用，对促进镉排出肾脏，减少镉在肾脏中的蓄积可能具有一定作用（罗丽芳等，2006）。程虹和宋恩峰（2009）研究发现，杜仲还可调控转换生长因子，抑制肾纤维化TGF-β1/Smad蛋白基因表达，减轻肾脏间质纤维化形成。