不同胚胎类型对绵羊胚胎移植效果的影响

张 亮，韩志强

(1.黑龙江省家畜繁育指导站，哈尔滨 150069;2.黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆 163319;3.黑龙江省农垦科学院畜牧兽医研究所 150038)

家畜胚胎移植是继人工授精之后，在家畜繁殖学领域的又一项有重大影响的生物技术。胚胎移植，特别是冻胚移植对家畜的引种、改良以及良种扩繁意义重大，越来越受到人们的重视。在欧洲，冷冻胚胎的使用率己达到47.8%，玻璃化冷冻胚胎可获得接近鲜胚的移植妊娠率[1]，与慢速冷冻[2]的移植妊娠率相似。以冷冻胚胎代替活畜引种，不但可以节省人力、物力、财力，同时可一次大量引进，而且可以把引种过程中疾病传播的几率降到最低限度[3]。在国内，目前绵羊胚胎移植的移植妊娠率还不太理想，仍有许多问题亟待解决。本研究探讨了移植时采用不同胚胎类型对妊娠率的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择具有两个以上正常情期，健康无疾病，繁殖机能正常的东北半细毛羊(3～5岁)，共400只。

1.2 试验时间

2005年8月15日～10月15日。2011年7～8月。

1.3 主要试验药物与仪器

氟孕酮阴道海绵栓、腹腔内窥镜、体视显微镜、可移动手术车、常规手术器械以及抗生素等。

1.4 受体同期处理方法

在繁殖季节，给受体羊阴道内植入孕酮海绵栓，埋植13 d。在撤栓24 h后放入试情公羊试情，记录24～72 h内发情的羊只，视为同期处理有效。以发情始期记为第0天，在第6天对受体羊移植。

在原核移植实验时，以受体埋栓当天记第0天，在埋栓的第9天早对受体进行撤栓，同时肌注200～250 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)。

1.5 胚胎来源

本试验的进口冷冻胚胎来自澳大利亚公司的肉用品种萨福克羊的A级胚胎;鲜胚和自制冷冻胚胎来自本场的萨福克羊，先超数排卵，然后部分胚胎采用玻璃化冷冻，制成冷冻胚胎。以上胚胎均为囊胚。

原核胚由超数排卵获得，供体为东北细毛羊。原核胚是在转基因试验中，经过原核注射的。

1.6 胚胎解冻

从液氮罐中取出装有胚胎的细管，在空气中停留10 s，同时拔掉细管口的活塞，然后放入32℃水中20 s，剪开细管口，推出胚胎，放入I液6 min，I液为蔗糖+Holding液+乙二醇(1∶1∶1);再放入 II液6 min，II液为乙二醇+Holding液(1∶1);再在显微镜下检查其数量和级别，待用。

自制冻胚也采用上述方法解冻。

1.7 胚胎移植

采用腹腔内窥镜手术法移植。在受体羊的腹部，乳房前5 cm处的腹中线对侧各开1个1 cm的小口，利用腹腔内窥镜配合钝性宫钳，观察受体羊卵巢上的卵泡、黄体发育情况，并根据黄体情况移植。将胚胎移入卵巢上黄体发育良好的一侧子宫角的前1/3处。原核胚从输卵管伞移入。术后对创口进行缝合，注射青、链霉素各一支。

1.8 妊娠的确定

在移植母羊中，以最后产羔、可见流产、早产、死产为确定妊娠母羊数。

1.9 数据分析

采用Excel中的数据分析软件和利用《生物统计附试验设计》(第二版)进行差异显著性分析。

2 结果与分析

2.1 不同囊胚类型对妊娠率的影响

本次试验对82只同期发情的绵羊进行胚胎移植，比较了三种类型胚胎的妊娠效果。其妊娠率分别为鲜胚组59.46%、自制冻胚组21.43%、进口冻胚组35.48%，鲜胚组与两冻胚组妊娠率差异均显著(P＜0.05)，两冻胚组差异不显著(P＞0.05)(表1)。

表1 不同胚胎类型对妊娠率的影响

从胚胎类型对胚胎移植效果的试验结果可以看出，鲜胚移植明显好于冻胚移植。这个结果与王素梅等[4]的结果相似。其鲜胚妊娠率与王金文等[5]取得的54.17%鲜胚妊娠率相似的结果。虽然自制冻胚组的妊娠率低于进口冻胚组，但差异不显著，说明可以代替进口冻胚用于今后的冻胚生产，为今后生产冻胚奠定了基础。

目前，乙二醇作为防冻剂可获得接近鲜胚的移植妊娠率[6]。但本次显著低于鲜胚移植，胚胎冷冻保存方面还有待于提高。

2.2 囊胚和原核胚对妊娠率的影响

本试验比较了囊胚和原核胚移植的效果。见表2。

表2 不同胚胎对妊娠率和产羔效率的影响

从结果来看，原核胚的移植效果远远低于囊胚移植效果。其主要原因有三方面:1)在构建转基因原核胚的过程中，原核注射对胚胎产生了损伤，甚至死亡。2)在原核胚发育到囊胚的过程中，胚胎发育阻滞和早期胚胎死亡的现象。3)也有可能在辨认原核胚和未受精卵时发生误判，在移植的原核胚中有未受精卵。

在实际生产中，囊胚移植效果更易掌握。所以在常规绵羊胚胎移植中采用囊胚移植更能节省受体羊的费用，更利于生产应用。

3 结论

在绵羊胚胎移植中，鲜胚移植好于冻胚移植，自制冻胚接近进口冻胚的移植水平，为日后的胚胎生产奠定了基础。

在绵羊胚胎移植中，原核胚的移植效果远远低于囊胚移植效果，囊胚更适合用于生产。

[1] Brail G，Traldi A L，Connie Y，et al.Successful direct transfer of vitrified sheep embryos [J].Therionenolony，2001，56:299-305.

[2] Heyman Y，Vincent C，Gamier V，et al.Transfer of frozen thawed embryos in Sheep [J].Vet Rec，1987，120:83-85.

[3] 付静涛，朱士恩.绵羊同期发情与冷冻胚胎移植技术的研究[J].中国畜牧杂志，2005，41(8):32-33、57

[4] 王素梅，元美玉.非繁殖季节胚胎因素对绵羊胚胎移植影响的研究 [J].中国畜牧兽医，2005，32(7):30-31

[5] 王金文，张果平，李焕玲.杜泊绵羊超数排卵与胚胎移植试验 [J].中国草食动物，2006，26(1):14-15

[6] Brebion P，Baril G，Cognie Y，et al.Embryo transfer in sheep and goat[J].Ann Zoot，1992，41:331-339.