HPLC法测定碧玉珠中人参皂苷Rg1的含量

李 华 刘潇潇

广东省药品检验所，广东 广州 510180

碧玉珠是由人参、冬虫草、枸杞子等10味中药制成的中药复方制剂，具有益气养血，补肾填精之功效。用于皮肤斑印，头晕目眩，崩漏带下，月经不调，腰酸背痛，久不受孕等症。为更好地控制本品的质量。本文采用了HPLC法测定人参所含成分人参皂苷Rg1的含量，该方法简便、准确、可靠，可用于碧玉珠的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪 (UV检测器)。色谱柱:Merck C18(5μm，150×4.6mm)。Millipore纯水器;Sartorius电子天平;KQ-300DA超声仪 (功率300W，频率40kHz)。

1.2 试药 余试剂huan bec Xiao Jun人参皂苷Rg1对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号:110703-200425;碧玉珠，由香港峨眉药厂有限公司生产，批号:260902;碧玉珠人参阴性对照，由香港峨眉药厂有限公司制备;乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Merck C18(5μm，150×4.6mm);流动相:乙腈-水 (19∶81);流速:1.0 ml/min;检测波长:203 nm;柱温:20℃;进样量:对照品和供试品溶液各 10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成①每1ml含人参皂苷Rg1 0.1842mg②每1ml含人参皂苷Rg1 0.3684 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，混匀，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取入70%甲醇25ml，称定重量，超声处理 (功率300w，频率45kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺，配制不含人参的阴性对照样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 0线性关系考察 取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成①每1ml含人参皂苷Rg1 0.1842mg②每1ml含人参皂苷Rg1 0.3684 mg的溶液。取溶液 ②进样10μl，取溶液①分别进样 1μl、2μl、5μl、10μl，注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以对照品进样量 (μg)为横坐标 (X)，峰面积为纵坐标 (Y)绘图标准曲线，得回归方程为 Y=250.24X+6.0787，r=0.9998。结果表明，人参皂苷Rg1在0.1842μg～3.6840μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2 专属性考察 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，按“2.1”项下色谱条件进样，结果:供试品与人参皂苷Rg1对照品在相应的位置上出现色谱峰，供试品色谱中分离度良好;阴性对照在该位置上未出现色谱峰，表明阴性对照溶液不干扰样品测定，见图1。

2.3.3 精密度试验 精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，每次 10μl，测定人参皂苷Rg1峰面积。结果RSD为0.19%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液，分别在0、4、8、12、18h依次进样，测定人参皂苷Rg1峰面积。结果RSD为1.4%，表明供试品溶液在18h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品6份，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定。测得平均值为2.12 mg/g，RSD为0.89%，表明本方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取人参皂苷Rg1对照品0.01535g，置25 ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，作为回收用人参皂苷Rg1对照品溶液 (每1ml含人参皂苷Rg1 0.614mg)。取已知含量的同一批样品 (含量:2.1175mg/g)6份，每份取样量约1g，分别置100ml锥形瓶中，精密加入上述供试品溶液3ml，按“2.2.2”项下方法操作，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。本方法回收率均在95%～105%以内，符合要求。

表1 加样回收试验结果 (n=6)

2.4 样品含量测定 取样品，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定样品中人参皂苷Rg1的含量。碧玉珠 (批号:260902)的人参皂苷的含量为:2.12mg/g。

3 讨论

在实验中考察了不同的提取方法、提取溶剂和提取时间对人参皂苷Rg1提取率的影响。 (1)选用30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和甲醇[2]作为提取溶剂进行比较，结果表明纯甲醇提取效率低，不能完全提取出人参皂苷Rg1;30%，50%，70%甲醇之间的提取效果无明显差别，均能较完全提取出人参皂苷Rg1，本实验用70%甲醇-水作为提取溶剂。(2)比较了直接超声提取、超声后通过大孔树脂处理、超声后正丁醇萃取[3]和加热回流[4]四种提取方法对人参皂苷Rg1提取率的影响。结果无明显差别，表明各提取方法均能将样品中的人参皂苷Rg1完全提出，考虑到操作的简便省时，采用直接超声提取。(3)在实验中选用超声20、30、45、60min进行比较，结果无明显差别，故选用20分钟作为提取时间。

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