不同方法提取四数九里香挥发油气质联用分析

龚志强，谈远锋，黄 敏，刘晨旭

(广西中医药大学a.赛恩斯新医药学院;b.医药会展中心，中国南宁 530001)

四数九里香Murraya tetramera Huang为芸香科九里香属植物，以干燥树叶入药，全年均可采收.主产于云南、广西、贵州、福建、台湾等亚洲热带及亚热带地区［1］.其味辛、微苦，性微温，具有祛风解表、行气、活血散痛、抗炎、解热之功效［2］.可治胃痛、风湿痹痛，外用则可治牙痛、跌扑肿痛、虫蛇咬伤等［3］.著名胃药三九胃泰的主要组成即为四数九里香［4］.对四数九里香化学成分的研究已有文献报告，陈家源等［5］用水蒸气蒸馏法提取挥发油并确认了其中37个组分，牙启康等［6］运用硅胶层析色谱分离了其中的5个化合物，张柯媛等［7］选用补骨脂素作为指标成为建立其定性定量方法.研究表明四数九里香挥发油有显著的抗炎和镇痛作用［8］，为进一步全面真实地反映四数九里香挥发油的化学成分，本文分别采用水蒸气蒸馏、超临界CO2流体萃取及超声波溶剂萃取3种方法提取四数九里香挥发油化学成分并进行了分析和比较.

1 仪器与材料

7890A/5975C气相色谱质谱联用仪(GC/MS，美国Agilent公司);HL-5+1L/50-Ⅱ AQ型超临界CO2萃取装置(杭州华黎泵业有限公司);DHG-9240A型电热鼓风恒温干燥箱(上海精密试验设备有限公司);无水乙醇(分析纯);无水硫酸钠(分析纯).四数九里香(2011年5月采于广西龙州县)经广西中医药大学刘寿养副教授鉴定为Murraya tetramera Huang.

2 方法与结果

2.1 四数九里香挥发油的提取

2.1.1 水蒸气蒸馏提取 根据2010年版《中国药典》一部附录 XD［5］，取20 g粗粉(过750 μm筛)加500 mL蒸馏水，蒸馏时间5 h，得到淡黄色薄荷香气味透明液体，收油率3.23%.馏出液用无水乙醚萃取后，用无水硫酸钠干燥备用.

2.1.2 超临界CO2流体萃取 以四数九里香干燥茎叶粉为实验材料，采用正交实验筛选超临界CO2萃取最优方案，即萃取温度40℃，压力25 MPa，萃取时间45 min，将200 g干燥茎叶粉末投入装置萃取3次，得黄色浓郁薄荷香气味透明液体，收油率约5.11%.馏出液用无水乙醚萃取后，用无水硫酸钠干燥备用.

2.1.3 超声波溶剂萃取法 取5 g干叶粗粉(过750 μm筛)，加入50 mL石油醚，超声30 min，过滤得到滤液.滤液用无水乙醚萃取后，用无水硫酸钠干燥备用.

2.2 气相色谱质谱分析条件

2.2.1 色谱条件 石英毛细管柱HP-5MS毛细管柱(30 m×25 μm×0.25 μm);载气:高纯He;进样口温度:250℃;分流比:40∶1，进样量:1 μL.程序升温:60℃ ～250℃;初始温度60℃(保留1 min)，以10℃·min－1速率升温至80℃(保留1 min);以2℃·min－1速率升温至145℃(保留1 min);以25℃·min－1速率升温250℃(保留1 min).

2.2.2 质谱条件 EI离子源，能量70 eV，离子源温度230℃，倍增电压1.933 kV，扫描质量范围m/z为33～800.

2.3 挥发性成分鉴定

按上述实验条件，用气相色谱质谱联用法对四数九里香挥发油进行分析，采用安捷伦GC-MS化学工作站数据处理系统，以峰面积归一法测得挥发性物质各组分相对含量，3种方法提取的挥发油总离子流图见图1.对总离子流图中各峰经质谱数据库(NST08)，及配合人工谱图解析，并查对有关数据文献，从基峰相对丰度等几个方面进行直观比较，鉴定3种方法提取挥发油化学组分如下表1.

图1 不同提取方法提取挥发油总离子图Fig.1 Supercritical extraction(A)，water distillation extraction(B)，and ultrasound extraction total ion flow graph

表1 不同提取方法得到的挥发油化学成分对比Tab.1 Component analysis of extracts from different extraction methods

3 讨论

超临界CO2流体萃取法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的38种成分.其中相对质量分数最高的是薄荷酮(38.17%)、异薄荷酮(12.34%)、胡椒酮(10.90%)和 β-水芹烯(9.75%).水蒸气蒸馏法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的33种成分.其中胡椒酮(17.40%)、薄荷酮(20.51%)、异薄荷酮(6.94%)、β-水芹烯(11.59%)、萜品烯(13.38%).超声波溶剂萃取法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的12种成分.其中相对质量分数最高的是薄荷酮(43.45%)、异薄荷酮(16.31%)、胡椒酮(9.97%)、侧柏烯(11.40%)、β-水芹烯(9.35%).

对比3种提取方法得到的挥发油组分及其相对质量分数差异较大，质量分数较高均为薄荷酮，可用于四数九里香质量控制指标［10.其中SFE和超声波溶剂萃取法的异薄荷酮质量分数都相比SD高.而SD中胡椒酮质量分数明显高于SFE和超声波溶剂萃取法，SD操作简便，成本低.SFE得到挥发的化学成分更加详细真实，与文献报道一致［5，因萃取温度低，对于低沸点的易挥发性化合物组分不易损失，其中脂肪族化合物种类及质量分数明显多于水蒸汽蒸馏法和超声提取法的挥发油，可能是由于SD温度高、受热时间长，对部分热敏性组分产生了破坏［11，超声波提取技术操作简便，耗时少，无需加热，可是对溶剂选择、超声功率、提取时间等未进行考察［12，对实验结果有一定的影响.采用3种不同方法提取得到的四数九里香挥发性化合物数据，为其进一步的开发和利用提供了实验依据.

［1］中国科学院中国植物志编辑部委员会.中国植物志［M］.北京:科学技术出版社，1997:145-146.

［2］中华本草编委会.中华本草［M］.上海:上海科学技术出版社，1998:947-948.

［3］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册)［M］.第2版.北京:人民卫生出版社，1996:10-11.

［4］罗 辉，麦 扬，钟天恒，等.三九胃泰方抗胃溃疡有效部位的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(12):215-218.

［5］陈家源，牙启康，卢文杰，等.GC-MS分析四数九里香的挥发油成分［J］.华西药学杂志，2009，24(6):671-672.

［6］牙启康，卢文杰，陈家源，等.四数九里香的化学成分研究［J］.广西科学，2010，17(4):347-352.

［7］张柯媛，黄 艳，刘布鸣，等.四数九里香药材中补骨脂素的定性定量分析方法研究［J］.广西科学，2012，19(4):352-354.

［8］毛长智，黄 蓓，庾志斌.四数九里香挥发油抗炎及镇痛作用研究［J］.云南中医中药杂志，2011，32(8):74-75.

［9］国家药典委员会.中国药典，I部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录63.

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［11］邓超澄，朱小勇，韦建华，等.水蒸气蒸馏法与超临界CO2萃取法提取青翘挥发油的化学成分比较［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(16):76-79.

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