Ki67、CyclinD1和E-cad在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义

余 琦，杨江辉，李 宁 (解放军第309医院病理科，北京 100091)

皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)是一种发生在表皮上皮细胞的恶性肿瘤，是一种常见的皮肤科恶性肿瘤。该肿瘤的发生是由多种因素共同作用的结果，本试验通过免疫组化方法观察ki67、CyclinD1和E-cad 3种抗体在皮肤鳞状细胞癌中的表达以及3种抗体表达之间的关系，了解3种抗体在皮肤鳞状细胞癌的发生和发展过程中的作用，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本组35例皮肤鳞癌标本均经病理确诊，其中男26例，女9例，平均60.4岁。对照组为外科手术皮损边缘切除组织，为正常组织，共10例。根据WHO分级，将皮肤鳞癌分为3级，其中Ⅰ级(高分化)15例，Ⅱ级(中分化)13例，Ⅲ级(低分化)7例。

1.2 方法

采用免疫组化SP法，所有组织切片制作环境相同，每批切片均设阳性对照和阴性对照。Ki67、CyclinD1和E-cad抗体购于北京中杉金桥生物试剂公司。

1.3 结果判断

细胞核或细胞浆内出现棕黄色反应物颗粒表达为阳性。按着色细胞百分比划分积分，1% ～25%积1分:;26% ～50%积2分;51% ～75%积3分;76% ～100%积4分。按染色强弱的深浅划分积分，无染色，0分;弱阳性，1分;强阳性，2分。然后按照阳性细胞×染色强弱划分积分［1］，阴性(－)积1～2分，弱阳性(+)积3～4分，阳性(++)积5～6分，强阳性(+++)积7～8分。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件进行分析。两样本率的比较采用χ2检验，两两之间的相关性采用 Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67 表达情况

Ki67阳性表达定位于细胞核，阳性染色细胞散在分布于表皮及癌组织中。Ki67在鳞癌组织中阳性表达高于正常组织，2组差异有统计学意义(χ2=18.579，P ＜0.05)。在高、中、低分化组中阳性率分别为 73.3%、84.6%、100%(χ2=24.795，P ＜0.05)，见表1。

表1 ki67在皮肤鳞癌组织和正常皮肤组织的表达(例)

2.2 CyclinD1 表达情况

CyclinD1阳性表达定位于细胞核和细胞浆，阳性染色细胞散在分布于表皮及癌组织中。CyclinD1在鳞癌组织中阳性表达高于正常组织，2组差异有统计学意义(χ2=9.643，P＜0.05)。在高、中、低分化组中阳性率分别为 46.7%、76.9%、100%(χ2=13.456，P ＜0.05)，见表 2。

表2 CyclinD1在皮肤鳞癌组织和正常皮肤组织的表达(例)

2.3 E-cad 表达情况

E-cad阳性表达定位于细胞浆，阳性染色细胞散在分布于表皮及癌组织中。E-cad在鳞癌组织中阳性表达低于正常组织，两组差异有统计学意义(χ2=10.452，P ＜0.05)。在高、中、低分化组中阳性率分别为 86.7%、76.9%、57.1%(χ2=12.842，P ＜0.05)，见表 3。

表3 E-cad在皮肤鳞癌组织和正常皮肤组织的表达(例)

2.4 ki67、CyclinD1 和 E-cad相关性检测

Ki67、CyclinD1和E-cad三者中两两之间的关系:Ki67与CyclinD1在皮肤鳞癌中表达呈正相关(r=0.551，P ＜0.05);Ki67与E-cad在皮肤鳞癌中表达不相关(r=0.113，P＞0.05);CyclinD1与 E-cad在皮肤鳞癌中表达不相关(r=0.108，P ＞0.05)，见表4、表 5。

表4 抗体Ki67与CyclinD1、E-cad之间的表达关系(例)

表5 抗体CyclinD1和E-cad的表达关系(例)

3 讨论

Ki67是一种增殖细胞相关的核抗原，其功能与细胞的有丝分裂密切相关，在细胞增殖过程中是不可缺少的，但其确切机制尚不清楚，Ki67作为标记细胞增殖状态的抗原，表达阳性说明癌细胞增殖活跃［2］。Ki67也是一种与细胞分裂相关的核抗原，它的表达量随着细胞增殖周期不同而有所不同，是目前应用最广泛的细胞增殖标志之一。在很多常见的恶性肿瘤中，Ki67的表达远高于正常组织细胞，并且与肿瘤的恶性生物学行为和预后相关。对此现象有2种解释:一是Ki67本身就是原癌基因，它的过度表达使得细胞能够无限制增生而导致肿瘤的发生，另一种是肿瘤的过度增生使Ki67抗原过度表达［3］。陈松波等［4］检测皮肤鳞癌中Ki67的表达，结果显示随着肿瘤细胞分化程度的降低Ki67表达逐渐增高。沈金翠等［5］也证明Ki67在皮肤鳞癌中表达活跃，且阳性率与肿瘤的恶性程度显著正相关。本研究中Ki67在皮肤鳞状细胞癌中表达强度明显高于正常组织，且表达强度随着肿瘤分级增高而呈增高趋势。

细胞周期蛋白(CyclinD1)是细胞周期中短暂出现的基因表达产物，具有严格的周期顺序性，与特定的CDK(周期素依赖性激酶)结合构成复合体，可在G1/S交界处将信号转导途径与细胞周期调控联系起来，完成各个时期的转换，而后降解［6］。其过度表达可缩短G1期，并减少对生长因子的依赖性。故可在限制正常细胞生长的条件下越过G0/S和(或)G1/s过渡点而持续分裂增殖。研究显示CyclinD1在ATC比DTC中的表达率要高，其阳性表达率与甲状腺癌、皮肤鳞状细胞癌的恶性程度、期别成正相关。CyclinD1基因位于11q13染色体上，全长约15 kD，编码含有295个氨基酸的蛋白，该蛋白属于核内调控蛋白［7］。CyclinD1是细胞周期调节的主要因子之一，在细胞周期的G1/S期的转变中起着关键的作用。CyclinD1在肺癌、肝癌等多种恶性肿瘤细胞中都有过量表达，本研究中CyclinD1在皮肤鳞癌组织中表达明显高于正常组织，表明该抗体在皮肤鳞癌的发生过程中起某种促进细胞增殖恶化的作用。这与李灵等［8］研究CyclinD1在皮肤鳞癌组织中的表达结果一致。

E-cad是钙粘附蛋白家族中的一个重要组成成员，被广泛分布于各类上皮细胞表面，具有促进上皮细胞间相互粘附，是维持细胞形态和结构的完整性和极性的重要分子［9］。E-Cad是分布在上皮组织中的糖蛋白，是调节细胞与细胞之间和细胞与基质之间粘附反应的重要媒介［4］。E-Cad丢失或功能缺失与恶性肿瘤的发生、侵袭和转移过程密切相关，肿瘤转移过程中瘤细胞间粘附作用的下降及肿瘤细胞与基质细胞黏附的增强都有利于其脱离原发灶，发生转移［10］。本研究中E-Cad在皮肤鳞癌组织中的表达低于正常组织，且在高分化肿瘤中表达较多，低分化肿瘤中表达较少，E-Cad表达与肿瘤恶性程度相关。

本研究中Ki67和CyclinD1在皮肤鳞癌组织均高于正常组织，与肿瘤恶性程度正相关。二者均在细胞增殖周期中发挥作用，可能在肿瘤发展过程中协同。Ki67、CyclinD1和E-cad均和皮肤鳞癌组织的分化程度相关，三者中两两之间的相互关系怎样在肿瘤发生发展过程中协调作用还有待进一步研究。

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