HPLC同时测定痛风定片中马钱苷酸与龙胆苦苷的含量

王东平，闫小钧

(吉林省药品检验所，吉林 长春 130033)

HPLC同时测定痛风定片中马钱苷酸与龙胆苦苷的含量

王东平*，闫小钧

(吉林省药品检验所，吉林 长春 130033)

目的：建立痛风定片中马钱苷酸、龙胆苦苷的含量测定方法。方法：采用Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(1∶4)，流速为0.7 mL·min-1，检测波长为254 nm。结果：马钱苷酸的进样量在0.095～0.855 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 7)，平均回收率为98.73%，RSD=2.01%(n=6)；龙胆苦苷的进样量在0.418～2.092 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为98.36%，RSD=0.90%(n=6)。结论：该法操作简便、准确、分离度与稳定性好、专属性强，可作为该制剂的质量控制方法。

痛风定片；HPLC；马钱苷酸；龙胆苦苷；含量测定

痛风定片是由秦艽、黄柏、延胡索、赤芍等8味中药组成，现行标准为国家药品标准YBZ12302005-2010(Z)。秦艽为痛风定片中君药，在方中所占比例为17.5%。秦艽为龙胆科植物秦艽GentianamacrophyllaPall.、麻花秦艽GentianastramineaMaxim.、粗茎秦艽GentianacrassicaulisDuthie ex Burk.或小秦艽GentianadahuricaFisch.的干燥根[1]，主要含马钱苷酸、龙胆苦苷等[2-5]。痛风定片现行质量标准只对黄柏含量测定进行了规定，为了更好控制药品质量，笔者采用高效液相色谱法同时对方中马钱苷酸、龙胆苦苷含量进行测定，并以二者为指标来控制痛风定片的质量[2]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津)；DAD二极管阵列检测器(日本岛津)。

1.2 试药

马钱苷酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111865-201102，含量：93.8%)；龙胆苦苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110770-200308)；痛风定片(长春海外制药集团有限公司，规格：0.4 g/片，批号：20110801，20110802，20110803，20110804，20110805，20111202，20111203，20111204)；甲醇、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为化学纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(1∶4)；流速为0.7 mL·min-1；检测波长为254 nm；柱温为35 ℃；进样量为10 μL；分离度大于1.5；理论板数按马钱苷酸峰和龙胆苦苷峰计算应不低于3 000。HPLC图见图1。

A.混合对照品 B.供试品 C.缺秦艽的阴性对照品1.马钱苷酸 2.龙胆苦苷图1 痛风定片及对照品HPLC图

2.2 混合对照品溶液的制备

取马钱苷酸和龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含马钱苷酸0.10 mg、含龙胆苦苷0.25 mg的混合对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备[2-3]

取重量差异项下的痛风定片，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理(功率180 W，频率60 kHz)45 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备

按处方量制备不含秦艽的阴性对照样品，按2.3方法制备缺秦艽的阴性对照品溶液，即得。

2.5 线性关系考察

精密称取马钱苷酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含马钱苷酸0.095 0 mg的溶液，即得。精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含龙胆苦苷0.418 4 mg的溶液，即得。分别精密吸取马钱苷酸对照品溶液1，3，5，7，9 μL，龙胆苦苷对照品溶液1，2，3，4，5 μL，进样测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标，分别绘制标准曲线，计算回归方程，结果马钱苷酸在0.095 0～0.855 μg、龙胆苦苷在0.418 4～2.092 μg线性关系良好，符合外标法定量测定的要求。

马钱苷酸回归方程：Y=756 197.894 74X+14 680.7(r=0.998 7)，龙胆苦苷回归方程：Y=1 421 538.957 93X-44 659.3(r=0.999 9)。

2.6 精密度试验

取同一份供试品溶液(批号：20110805)，按2.1色谱条件，精密吸取供试品溶液5 μL，连续测定6次，计算马钱苷酸峰面积的RSD=2.51%，龙胆苦苷峰面积的RSD=0.86%。结果表明，所用仪器精密性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液(批号：20110805)，分别在0，4，8，12，16，18，24，28，32 h，按2.1色谱条件测定，计算马钱苷酸峰面积的RSD=0.94%；龙胆苦苷峰面积的RSD=0.49%。结果表明，供试品溶液在32 h内基本稳定。

2.8 重复性试验

取同一批样品(批号：20110805)6份，按2.3方法制备，进样测定，结果马钱苷酸平均质量分数为1.855 mg·g-1，RSD=1.26%；龙胆苦苷平均质量分数为5.174 mg·g-1，RSD=0.73%。结果表明，本法重复性良好。

2.9 回收率试验

精密称取马钱苷酸和龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含马钱苷酸0.044 5 mg、含龙胆苦苷0.114 6 mg的混合对照品溶液，作为加标对照品溶液。精密称取同法测定已知含量的供试品(批号：20110805)6份，每份约0.5 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入加标对照品溶液25 mL，按2.3方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表1、2。

表1 痛风定片中马钱苷酸回收率试验

注：马钱苷酸对照品加入量均为1.042 6 mg

表2 痛风定片中龙胆苦苷回收率试验

注：龙胆苦苷对照品加入量均为2.865 mg

2.10 痛风定片样品测定

依上述方法测定8批痛风定片样品中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量，结果见表3。

表3 痛风定片中马钱苷酸、龙胆苦苷的测定 mg/片

3 讨论

3.1 色谱柱的选择及柱效的考察

比较了Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)两种色谱柱，按照《中国药典》2010版秦艽项下色谱条件进行试验，结果二者均能较好地将马钱苷酸、龙胆苦苷分离，保留时间均在15～30 min，最终选用Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，按照上述方法测定，得到马钱苷酸、龙胆苦苷对照品以及供试品的色谱图，测得理论板数按马钱苷酸峰计算为10 826。在此条件下，供试品可以得到很好的分离，且主峰前后无杂峰，考虑到实际情况，确定其理论板数应不低于3 000。

3.2 测定波长的选择

根据马钱苷酸及龙胆苦苷对照品的光谱扫描图，马钱苷酸在235 nm有最大吸收，龙胆苦苷在246 nm有最大吸收。参照《中国药典》2010版一部秦艽项下含量测定的方法，确定254 nm为测定波长。

3.3 流动相的选择

参照《中国药典》2010版的方法，采用甲醇-0.1%磷酸溶液(1∶4)系统为本法流动相，通过试验，将二者比例调至20∶80，在此条件下，供试品图谱基线平稳，供试品色谱图中马钱苷酸和龙胆苦苷能得到很好的分离，主峰前后无杂峰，保留时间比较适中。

该法操作简便、准确、分离度与稳定性好、专属性强，可作为该制剂的质量控制方法。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：253.

[2] 张明燕，金琰琰，方成武.超高效液相色谱法测定四川松潘3种秦艽中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量[J].安徽中医学院学报，2011，(6)：61-64.

[3] 曹晓燕，王政军，王喆之.4种秦艽属植物不同器官中4种环烯醚萜苷成分含量的比较分析[J].植物资源与环境学报，2012，21(1)：58-63.

[4] 杨慧玲，司庆文，侯勤正，等.HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷[J].中草药，2010，41(10)：1720-1722.

[5] 贾娜，张雅惠，王斌.麻花秦艽中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量测定及麻花秦艽药材HPLC特征图谱的研究[J].药物分析杂志，2009,29(9)：185-189.

SimultaneousDeterminationofLoganinAcidandGentiopicrosideinTongfengdingTabletsbyHPLC

WANG Dongping*，YANXiaojun

(JilinInstituteforDrugControl，Changchun130033，China)

Objective：To establish a quality control method of Loganin acid and gentiopicroside in Tongfengding tablets.Methods：The column was Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)and a mixture of methanol and 0.1% phosphoric acid solution(1∶4)as the mobile phase was adopted.The flow rate was 0.7 mL·min-1and the UV detection wavelength was 254 nm.Results：the linear range of Loganin acid was 0.095～0.855 μg(r=0.998 7).The average recovery was 98.73%，and the RSD was 2.01%(n=6).The linear range of gentiopicroside was 0.418～2.092 μg(r=0.999 9).The average recovery was 98.36%，and the RSD was 0.90%(n=6).Conclusion：The method was simple，accurate，good separation degree and stability and strong specificity，which could be used for the quality control of Tongfengding tablets.

Tongfengding tablets；HPLC；Loganic acid；Gentiopicroside；Content determination

2014-04-10)

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王东平，主管药师，研究方向：中成药质量标准；Tel：(0431)84600508，E-mail：dpp_17@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.12.014