基因型检测对诊断乙型肝炎病毒感染程度的价值＊

吴 意，甘 霖，黎村艳，蒋 琰，李 原

（1.湖南省人民医院检验科，长沙 410005；2.重庆市卫生信息中心 400014）

乙型肝炎病毒（HBV）为一种双链DNA病毒，主要由3 200个碱基对构成，有研究表明，HBV基因型存在明显的地域差异［1－3］。为分析HBV基因型检测的临床价值，选取湖南省人民医院2011年1月至2013年8月收治的433例HBV感染者，检测HBV的基因型、DNA载量和HBV的E抗原。

1 资料与方法

1.1 一般资料 湖南省人民医院2011年1月至2013年8月收治的433例 HBV感染者，年龄18～82岁，平均（45.26±18.6）岁，其中男298例，女135例。感染者均符合2000年全国病毒性肝炎学术会议所制定的《全国病毒性肝炎防治方案》中有关乙型肝炎的诊断标准：DNA表达载量大于1.0×104copy／mL，ALT＞40U／L，AST＞40U／L。排除其他疾病，同时排除酗酒、吸毒、妊娠、哺乳的患者。轻中度乙型肝炎患者289例（临床表现为肝功能轻度异常，HBV指标为阳性），重度乙型肝炎患者144例（肝功能严重异常）。本次研究获得患者及家属知情同意，并经医院伦理委员会通过。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 仪器：PE7500型全自动荧光定量PCR仪（美国ABI公司生产），杂交炉（深圳亚能生物制品有限公司生产），全自动酶免疫分析仪（瑞士哈数顿公司）。试剂：PCR－反向点杂交法基因型检测试剂盒（达安基因股份有限公司生产）。HBV－DNA试剂盒（长沙盛湘公司生产）。HBV E抗原检测试剂盒（北京万泰生物医药有限公司）。

1.2.2 HBV－DNA表达载量测定 HBV－DNA按照试剂盒说明书操作：一步法提取DNA，反应体系，总体积40μL，包括样本5μL，50℃2s，94℃5s，94℃15s，57℃31s，25℃10s，40个循环。同时作阴阳对照各1管及标准对照4管。

1.2.3 基因分型 一步法提取DNA产物，然后进行PCR反应，93℃6s预变性；93℃30s，58℃40s，72℃45s，10个循环；93℃ 30s，56 ℃ 40s，72 ℃ 45s，10个循环；93 ℃ 30s，55℃40s，72℃45s，15个循环。72℃7min。将探针通过氨基酸结合硝酸纤维膜；产物95℃，10min；膜与DNA杂交，洗脱未杂交的PCR产物；特异性杂交产物5′端与过氧化物酶（POD）结合，显色出现蓝色斑点。

1.2.4 HBV E抗原的检测 血清50μL，同时加入阳性对照和阴性对照，加50μL酶标液，混匀37℃30min，洗板5次，加入A液、B液各50μL，混匀37℃15min，终止液50μL，空白调零比色。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0软件进行统计学处理和分析，计量资料采用表示，比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 基因分型结果 HBV感染者基因型分析结果显示，B基因型患者295例（68.13%），显著高于BC混合基因型25例（5.77%）和C基因型113例（26.10%），差异有统计学意义（P＜0.05）；C基因型患者比例，显著高于BC混合基因型，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 基因型与DNA表达载量及HBV E抗原关系 HBV感染者B基因型HBV E抗原阴性率显著高于BC混合基因型、C基因型；BC混合基因型HBV E抗原的阴性率显著高于C基因型，差异有统计学意义（P＜0.05）；DNA表达载量在3种基因型间差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 各基因型与DNA表达载量及HBV E抗原关系（n＝433）

2.3 基因型与病情严重程度关系 HBV感染者的病情严重程度与基因型关系见表2，轻中度乙型肝炎患者B基因型比例最高（87.20%），其次为C基因型（9.34%）和BC混合基因型（3.46%）。重度乙型肝炎患者C基因型比例最高（77.08%），其次为BC混合基因型（14.58%）和B基因型（8.33%），差异有统计学意义（t＝43.52，P＜0.05）。

表2 患者病情严重程度与基因型的关系［n（%）］

3 讨 论

乙型肝炎是常见的一种血液传播性疾病，该病在全球范围内具有较高的发病率，由于基因型的不同，病毒DNA复制能力和免疫逃逸的能力也有差异［4－7］，这是导致不同基因型的HBV感染率呈现出了一定的地域流行的特性［8－10］。已知的HBV基因型共分为9种，分别为：A、B、C、D、E、F、G、H、I［11－13］。在 我 国，HBV 基 因 型 主 要 为 B 基 因 型 与 C 基 因型［14－16］。

本研究表明，B基因型患者比例明显高于BC混合基因型和C基因型。BC混合基因型患者比例明显低于C基因型。说明B基因型与C基因型是湖南地区的高发基因型，其中B基因型的爆发率高于C基因型。与张韧等［5］报道的结果相似。

按照基因型不同，B基因型患者HBV E抗原阴性率明显偏高，BC混合基因型、C基因型患者HBV E抗原阴性率显著偏低（P＜0.05），此结论与有关研究相似［17］。同样，按照基因型不同，DNA表达载量差异无统计学意义（P＞0.05），说明不同基因型的HBV载量无差别［18－19］。按照基因型不同，轻中度HBV感染者B基因型比例最高（87.20%），其次为C基因型（9.34%）和BC混合基因型（3.46%）。重度HBV感染者C基因型比例最高（77.08%），其次为BC混合基因型（14.58%）和B基因型（8.33%），说明HBV基因型检测有助于分析患者病情的严重程度，轻中度乙型肝炎以B基因型为主，重度乙型肝炎以 C基因型为主［20－21］。

综上所述，HBV基因型与感染的严重程度及E抗原阴性率有关，与DNA表达载量无关。

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