裂殖壶菌粉对蛋鸡生产性能、蛋品质、血清生化指标和蛋黄二十二碳六烯酸含量的影响

陈秀丽 岳洪源 李连彬 宋 丹 曹社会 武书庚*

(1.西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 712100;2.中国农业科学院饲料研究所，生物饲料开发国家工程研究中心，北京 100081)

二十二碳六烯酸(DHA，C22∶6 ω-3)是一种 ω-3系长链多不饱和脂肪酸(PUFA)，必须由食物摄入。DHA能促进脑、视网膜形成和延缓脑的衰老，具有降血脂、预防和治疗心血管疾病、抗炎等多种生理功能［1］。因此，富含DHA的食品引起了人们的广泛关注。研究表明，蛋鸡饲粮中添加 ω-3 PUFA可增加DHA在蛋黄中的沉积，如饲粮中添加3%鱼油，蛋黄中二十碳五烯酸(EPA)+DHA的含量超过 180 mg/枚［2］。常用于饲料的 ω-3 PUFA源有鱼油、亚麻籽、海洋藻类等，但因鱼油的特殊腥味可能影响畜禽产品的风味等，开发富含ω-3 PUFA的新原料作为鱼油替代品已经成为研究的热点［3］。微藻是海洋食物链中的初级生产者，富含DHA，是 ω-3 PUFA的原始生产者［4］，裂殖壶菌(Schizochytrium，SL)是微藻中较为重要的DHA生产者，SL粉中的DHA与鱼油中的DHA形式完全一致，且EPA含量较低，更易于人接受［5］。SL粉在蛋鸡中的应用较少，因此，本试验拟研究SL粉对商品蛋鸡生产性能、蛋品质、血清生化指标和蛋黄脂肪酸组成的影响，以期为生产实践提供指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

SL粉购自厦门金达威集团股份有限公司，DHA含量占总脂肪酸的41.36%(实测值)，SL粉中DHA含量为137.09 mg/g。

1.2 试验动物与试验饲粮

试验选择29周龄体况良好、体重相近的海兰褐商品蛋鸡288只，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复12只鸡。预试期1周，正试期6周。

基础饲粮参照NRC(1994)和我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)，并结合海兰褐蛋鸡饲养手册配制，设计分别添加0、1%、2%和3%SL粉的4种试验饲粮，并用能量、蛋白质含量与SL粉相近的玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)补足。试验饲粮组成及营养水平见表1，试验饲粮及SL粉脂肪酸组成见表2。

表1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) %

1.3 饲养管理

采用半开放式鸡舍3层立体笼养，自然光照加人工补光，光照时间为16 h/d。人工饲喂粉料，每日喂料2次，自由采食和饮水，每周消毒1次，常规免疫。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 样品采集与制备

正试期以重复为单位，记录每天产蛋数、蛋重，每7天清料1次，记录该周耗料量。计算平均日采食量、料蛋比、产蛋率和平均蛋重。

分别于试验的第 0、3、7、14、28 和 42 天，每个重复取5枚鸡蛋，用于测定蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位和蛋壳厚度等蛋品质指标。

表2 试验饲粮及SL粉脂肪酸组成Table 2 Fatty acids composition in experimental diets and SL powder %

试验结束后，于次日早晨空腹采血，每组随机抽取1只鸡，翅静脉采血5 mL，促凝管收集血液，3 500 r/min，离心30 min，制备血清，-20℃保存待测。

分别于正试期的第9、15、28和42天，每个重复取5枚鸡蛋，将蛋黄充分混匀，经过冻干机真空干燥后，-20℃保存，待分析脂肪酸含量。

1.4.2 测定指标与方法

蛋品质:采用SONOVA蛋品质自动分析仪(Egg AnalyzerTM，Orka Technology Ltd.)测定鸡蛋浓蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色;蛋壳强度分析仪(Egg Force Reader，Orka Technology Ltd.)测定蛋壳强度;蛋壳厚度测定仪(Egg Shell Thickness Gauge，Orka Technology Ltd.)分析蛋壳厚度。

血清生化指标:采用北京北化康泰临床试剂有限公司试剂盒测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。

蛋黄脂肪酸:1)准确称取蛋黄试样0.45～0.55 g于10 mL容量瓶中，添加正己烷并定容，振荡使其完全溶解，取1 mL溶液于20 mL试管中，加0.5 mol/L的氢氧化钾-甲醇(KOH-CH3OH)溶液3 mL，充分振荡，65℃水浴15 min，加入三氟化硼(BF3)-乙醚-甲醇溶液3 mL，振荡，65℃水浴5 min。冷却至室温，加饱和氯化钠(NaCl)溶液2 mL及正己烷1 mL，离心取上清，用于气相色谱分析。2)气相色谱测定条件:GC-2010色谱柱(60 mm ×0.25 mm ×0.25 μm)，载气为高纯度氮气(N2)，柱 流 速 3.0 mL/min，氢 气 (H2):40 mL/min，空气:400 mL/min。汽化室 250℃，检测器280℃，色谱柱初始为100℃，以25℃/min升至200℃，再以4℃/min升至 230℃，保持9 min。进样量 1 μL。

1.5 统计分析

采用SPSS 15.0软件的ANOVA程序进行统计分析，用Polynomial程序下的Quadratic进行线性和二次分析，用Duncan氏法进行差异显著性检验。P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。同时采用GLM模块分析不同添加水平下蛋黄DHA含量随时间变化的规律，结果以平均值和标准误(SEM)表示。

2 结果与分析

2.1 SL粉对蛋鸡生产性能的影响

由表3可知，蛋鸡饲粮添加SL粉对平均蛋重影响不显著(P＞0.05)，随饲粮SL粉添加水平增加，平均蛋重有降低的趋势，但降低幅度较小，试验期内，平均蛋重稳定在62 g左右，料蛋比稳定在2.3上下，均未到达显著水平(P＞0.05);随饲粮SL粉添加水平的提高，产蛋率有增高的趋势，但未到达显著水平(P＞0.05);饲粮SL粉添加水平对蛋鸡平均日采食量有显著影响(P＜0.05)，随饲粮SL添加水平的提高，平均日采食量提高趋势明显，2%和3%SL粉组分别比对照组高6.18%和6.59%(P＜0.05)。结果提示，饲粮添加SL粉对平均蛋重、料蛋比均没有影响，产蛋率有增长的趋势，提高了蛋鸡平均日采食量。

表3 SL粉对蛋鸡生产性能的影响Table 3 Effects of SL powder on performance of laying hens

2.2 SL粉对蛋鸡血清生化指标的影响

由表4可知，饲粮添加SL粉显著影响蛋鸡血清TG含量(P＜0.05)。随饲粮SL粉添加水平的增加，血清TC含量先降低后升高，1%和2%SL粉组分别比对照组降低了29.84%和31.72%(P＜0.05);3%SL粉组略有升高，与其他各组均差异不显著(P＞0.05)。1%、2%和3%SL粉组血清TG含量分别比对照组降低了46.12%、34.07%和32.16%(P＜0.05)，3组之间差异不显著(P＞0.05)。随饲粮SL粉添加水平增加，血清LDL-C含量先降低后升高，1%和2%SL粉组血清LDL-C含量分别比对照组降低了42.91%和42.5%(P＜0.05)。结果提示，饲粮添加SL粉可降低蛋鸡血清TC、TG和LDL-C含量，但SL粉添加水平为3%时，血清 TC、TG和 LDL-C含量略有升高趋势。

表4 SL粉对蛋鸡血清生化指标的影响Table 4 Effects of SL powder on serum biochemical indices of laying hens mmol/L

2.3 SL粉对蛋鸡蛋品质的影响

由表5可知，在整个试验期内，饲粮添加SL粉对鸡蛋蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈氏单位、蛋白高度的影响均不显著(P＞0.05)。蛋黄颜色与饲粮SL粉添加水平有密切的关系，但蛋黄颜色与饲粮SL粉添加水平也不是简单的线性关系，当饲粮SL粉添加水平为1%时，蛋黄颜色显著高于其他各组(P＜0.05)，比对照组提高了9.72%，其他各组与对照组差异不显著(P＞0.05)。结果提示，蛋鸡饲粮添加1%SL粉会加深蛋黄颜色，不影响其他蛋品质指标。

2.4 SL粉对鸡蛋脂肪酸组成的影响

2.4.1 PUFA

由表6可知，蛋黄脂肪酸组成受SL粉的影响较大。与对照组相比，2%和3%SL粉组蛋黄中PUFA含量显著升高(P＜0.05)，分别比对照组提高了18.20%和12.15%;1%SL粉组也提高了9.62%，但与对照组差异不显著(P＞0.05)。

表5 SL粉对蛋鸡蛋品质的影响Table 5 Effects of SL powder on egg quality of laying hens

1%、2%和3%SL粉组ω-3 PUFA含量显著高于对照组(P＜0.05)，分别比对照组提高了39.2%、85.2%和76.7%;2%和3%SL粉组又显著高于1%SL粉组(P＜0.05);2%和3%SL粉组之间差异不显著(P＞0.05)。其中DHA含量随着饲粮SL粉添加水平的提高而升高，1%、2%和3%SL粉组显著高于对照组(P＜0.05)，分别比对照组提高了66.1%、116.5%和122.9%;2%和3%SL粉组显著高于1%SL粉组(P＜0.05)，2%和3%SL粉组之间差异不显著(P＞0.05)。蛋黄中EPA含量虽有所提高，但因原料中EPA含量有限，使其在蛋黄中所占总量有限。

1%、2%和3%SL粉组ω-6 PUFA含量分别比对照组提高了6.4%、11.1%和5.2%，2%SL粉组显著高于对照组(P＜0.05)，其余各组之间差异不显著(P＞0.05)。其中2%和3%SL粉组蛋黄中亚油酸(C18∶2 ω-6)含量显著升高(P ＜0.05)，分别比对照组高了12.64%和9.15%，但2组之间差异不显著(P＞0.05);1%SL粉组也提高了7.97%，但与其他各组均差异不显著(P＞0.05)。因原料中C18∶3 ω-6含量有限，使其在蛋黄中所占总量有限。随着饲粮SL粉添加水平的提高，花生四烯酸(C20∶4 ω-6)含量均有所降低，其中 3%SL粉组比对照组降低了23.92%(P＜0.05)。

虽然ω-3 PUFA和ω-6 PUFA含量均因饲粮SL粉添加水平升高而升高，但因SL粉中ω-3 PUFA(尤其是DHA)含量更丰富，仍显著降低了 ω-6/ω-3(P ＜0.05)。1%、2% 和 3%SL粉组ω-6/ω-3分别比对照组显著降低了23.9%、40.2%和39.8%，2%和3%SL粉组显著低于1%SL粉组(P＜0.05)，2组之间差异不显著(P＞0.05)。

2.4.2 单不饱和脂肪酸(MUFA)和饱和脂肪酸(SFA)

由表6可知，与PUFA在蛋黄中的含量相反，MUFA含量随饲粮SL粉添加水平增加明显降低，其中2%SL粉组显著低于对照组(P＜0.05)。饲粮添加SL粉对SFA含量的影响有限。计算MUFA+PUFA的含量可以得出，各组(0、1%、2%和3%SL粉组分别为64.22%、64.02%、63.67%和64.85%)基本一致，这提示我们，PUFA含量的增加是因为MUFA含量减少导致。MUFA中，因为C18∶1 ω-9含量较高，所以降低明显，尤其是2%SL粉组，显著低于对照组和3%SL粉组(P＜0.05);C16∶1 ω-7 含 量 的 变 化 没 有 规 律;C20∶1 ω-9含量比较保守，未因饲粮改变而变化。

结果提示，饲粮添加SL粉能线性增加蛋黄中PUFA含量，但SL粉添加水平超过2%时，蛋黄中PUFA含量不会继续增加;PUFA含量的增加是因为MUFA含量减少导致。

2.5 鸡蛋DHA富集规律

由表7可知，随饲粮SL粉添加水平的增加，蛋黄DHA含量有不同程度的提高。在第9、15和28天时，SL粉组蛋黄DHA含量显著高于对照组(P＜0.05)，随饲粮SL粉添加水平的提高，蛋黄DHA含量显著升高(P＜0.05)。在第42天时，1%、2%和3%SL粉组蛋黄DHA含量显著高于对照组(P＜0.05);2%和3%SL粉组蛋黄DHA含量差异不显著(P＞0.05)，显著高于1%SL粉组(P＜0.05)。第15天后蛋黄DHA含量基本达到稳定，延长试验期蛋黄DHA含量变化不大。

结果提示，DHA在鸡蛋中富集率呈线性下降，方程为y=-11.61x+58.13，1%SL粉组DHA富集率最高，为18.34%，2%SL粉组为16.44%，3%SL粉组为15.03%。

表6 SL粉对蛋黄脂肪酸组成的影响Table 6 Effects of SL powder on fatty acid composition of egg yolk %

表7 SL粉对蛋黄DHA含量的影响Table 7 Effects of SL powder on DHA content of egg yolk mg

3 讨论

3.1 SL粉对蛋鸡生产性能、蛋品质的影响

本试验结果表明，饲粮添加SL粉对料蛋比、产蛋率和平均蛋重的影响不显著。Hargis等［2］在饲粮中添加鱼油或全脂亚麻籽，结果显示鱼油或全脂亚麻籽对料蛋比、产蛋率和平均蛋重无明显影响，与本试验结果一致。但本试验中随着饲粮SL粉添加水平的增高，平均蛋重呈现下降趋势，未达到显著水平。原因是饲喂蛋鸡富含ω-3 PUFA的饲粮，可增加机体ω-3 PUFA含量，抑制ω-6 PUFA的吸收，而后者的不足可导致脂质向卵巢转运速度减慢，脂蛋白合成降低，血浆雌二醇水平降低，从而抑制卵泡发育，降低蛋重［6］。饲粮中添加25%整粒亚麻籽、1%亚麻油和1%鱼油能显著提高蛋鸡采食量［7］;饲粮中添加5%微藻粉粕肉鸡采食量也显著增加［8］，这都与本研究结果相似，原因可能是冬天气温低，蛋鸡维持需要的能量较高，导致蛋鸡提高采食量来维持自身代谢。研究表明，随着饲粮中鱼油用量提高，鸭蛋蛋黄颜色加深［9］。本试验饲粮添加SL粉同样能增加鸡蛋蛋黄颜色，与1%SL粉组相比，对照组和2%、3%SL粉组的蛋黄颜色有不同程度的降低，分析其原因可能为饲粮SL粉中PUFA氧化，而增加了机体抗氧化功能的脂溶性色素如β-胡萝卜素和叶黄素的消耗，导致蛋黄颜色的变浅。1%SL粉组蛋黄颜色最深，原因是SL粉中含有类胡萝卜素、角黄素，其中β-胡萝卜素是一种强抗氧化剂和着色剂，它可以显著增加蛋黄颜色［10］，同时也可抑制PUFA氧化。由此可见，饲粮SL粉添加水平不宜大于2%。

3.2 SL粉对蛋鸡血清生化指标的影响

胆固醇在体内有着广泛的生理作用，过量会导致高胆固醇血症，其中，低密度脂蛋白是导致心脑血管疾病的元凶，对机体产生不利影响，TG过高直接体现在动脉粥样硬化上。大量研究发现，饲粮中添加ω-3 PUFA能明显改变蛋鸡血清中脂类物质的含量。ω-3 PUFA和ω-6 PUFA都能显著降低血清TC和TG含量，同时ω-3 PUFA还能降低蛋黄TC和TG含量［7］。有研究表明，在蛋鸡饲粮中添加不同比例的鱼油和菜油，各组能显著降低血清中 TC、TG和 LDL-C的含量［11］，这与本试验结果类似。因为ω-3 PUFA抑制肝脏中编码脂肪合成酶和糖酵解酶的基因转录，从而抑制了肝脏中脂类物质的合成，提高HDL-C的含量，从而降低组织中胆固醇的沉积，加快胆固醇从体内的排泄［12］;ω-3 PUFA通过影响低密度脂蛋白的合成与分解速度，改变脂蛋白的脂肪酸组成，增加其流动性，同时抑制肝脏中脂肪酸和TG的形成，进而降低了血清TG含量［13］。本试验表明，蛋鸡饲粮中添加SL粉也可降低血清TC、TG和LDL-C含量，其中1%SL粉组血清中TC、TG和LDL-C含量最低。

3.3 SL粉对鸡蛋脂肪酸组成的影响

蛋黄中脂肪酸组成反映原料的脂肪酸组成，鸡蛋中85%或78%的DHA和EPA来自于它们在饲粮中相应的含量［14］。本试验表明，随着饲粮SL粉添加水平的提高，ω-3 PUFA含量升高，其中DHA和EPA均有不同程度提高，这与邓兴照等［7］的报道一致。用海藻饲喂蛋鸡，可显著增加蛋黄中ω-3 PUFA含量，并伴随着ω-6 PUFA含量的下降，本试验中ω-6 PUFA含量反而呈现上升趋势，原因可能是蛋鸡品种、饲喂海藻不同及饲喂方式有区别。饲粮中添加ω-3 PUFA原料能竞争抑制花生四烯酸在鸡蛋中的沉积，提高鸡蛋中ω-3 PUFA含量，降低 ω-6/ω-3［15］，本试验也得出了类似结果，随着饲粮SL粉添加水平的增加，鸡蛋中ω-6/ω-3下降，显著增加了鸡蛋的营养价值。

3.4 SL粉中DHA在鸡蛋中的富集规律

改变饲粮脂肪酸组成和含量将会改变鸡蛋中脂肪酸的组成。本试验中1%、2%和3%SL粉组中蛋黄DHA含量并不是成倍数增长。蛋鸡饲粮中添加2.4%和4.8%SL粉，鸡蛋中ω-3 PUFA含量分别为9.5和11.5 mg/g，最高沉积量在4.8%SL粉组，4.8%SL粉组 ω-3 PUFA含量并不是2.4%SL粉组的2倍［6］，这与本试验结果相似。本试验表明，蛋黄中DHA含量随着饲粮SL粉添加时间的延长均有不同程度提高，这与Milinsk等［16］的报道一致。添加SL粉第15天时，DHA可快速沉积到蛋黄中，并在蛋黄中沉积量达到稳定。2%SL粉组表现出较好的沉积效果，随着添加时间的延长，其上升幅度趋缓。第42天时，当饲粮SL粉添加水平超过2%时，继续增加饲粮SL粉添加水平蛋黄中DHA含量也不会继续增加，表明DHA并不会在蛋鸡中无限富集，DHA在蛋黄中的沉积有一定的剂量效应，添加水平过高反而会抑制其在蛋黄中的沉积，SL粉添加水平越高其沉积效率也越低。

4 结论

①饲粮添加SL粉对蛋鸡产蛋率、料蛋比和平均蛋重的影响不显著，可增加蛋鸡采食量;饲粮添加SL粉对蛋鸡蛋品质的影响不显著，可降低血清TC、TG和LDL-C含量。

②饲粮添加SL粉会增加蛋中ω-3 PUFA和DHA 含量，降低 ω-6/ω-3。

③ 饲粮SL粉添加水平超过2%时，蛋黄中DHA含量不会继续增加。DHA在鸡蛋中富集15 d即可饱和。

④综上所述，本试验条件下在蛋鸡饲粮中添加2%SL粉可有效促进DHA在蛋黄中沉积，并且对蛋鸡生产性能和蛋品质无不良影响。

［1］曹万新，孟橘，田玉霞.DHA生理功能研究进展［J］.中国油脂，2011，36(3):1-4.

［2］HARGIS P S，VAN ELSWYK M E，HARGIS B M.Dietary modification of yolk lipid with menhaden oil［J］.Poultry Science，1991，70(4):874-883.

［3］朱路英，张学成，宋晓金，等.n-3多不饱和脂肪酸DHA、EPA 研究进展［J］.海洋科学，2007，31(11):78-85.

［4］郝颖，汪之和.EPA、DHA的营养功能及其产品安全性分析［J］.现代食品科技，2006，22(3):180-183.

［5］CALDER P C.Polyunsaturated fatty acids，inflammation，and immunity［J］.Lipids，2001，36(9):1007-1024.

［6］HERBER S M，VAN ELSWYK M E.Dietary marine algae promotes efficient deposition of ω-3 fatty acids for the production of enriched shell eggs［J］.Poultry Science，1996，75(12):1501-1507.

［7］邓兴照，齐广海，刘福柱，等.日粮多不饱和脂肪酸类型对蛋鸡生产性能和蛋黄脂肪酸富集的影响［J］.中国畜牧杂志，2006，42(3):31-34.

［8］刘利晓，魏凤仙，王琳燚，等.日粮中添加亚麻油和微藻粉粕对鸡肉中脂肪酸组成的影响研究［J］.中国畜牧杂志，2009，45(17):34-38.

［9］卢元鹏，原爱平，朱志刚，等.日粮不同 ω-3多不饱和脂肪酸水平对绍鸭产蛋性能与蛋品质的影响［J］.江苏农业学报，2009，25(5):1086-1090.

［10］HERBER-MCNEILL S M，VAN ELSWYK M E.Dietary marine algae maintains egg consumer acceptability while enhancing yolk color［J］.Poultry Science，1998，77(3):493-496.

［11］麻丽坤，尹兆正，卫振，等.鱼油替代菜籽油对蛋鸡生产性能及脂质代谢的影响［J］.中国粮油学报，2006，21(5):124-128.

［12］KELLER H，DREYER C，MEDIN J，et al.Fatty acids and retinoids control lipid metabolism through activation of peroxisome proliferator-activated receptor-retinoid X receptor heterodimers［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1993，90(6):2160-2164.

［13］李志琼，陈代文，张克英，等.α-亚麻酸对产蛋鸡胆固醇、甘油三酯含量和脂肪酸组成的影响［J］.中国畜牧杂志，2007，43(23):17-19，48.

［14］BAUCELLS M D，CRESPO N，BARROETA A C，et al.Incorporation of different polyunsaturated fatty acids into eggs［J］.Poultry Science，2000，79(1):51-59.

［15］PARDÍO V T，LANDÍN L A，WALISZEWSKI K N，et al.The effect of soybean soapstock on the quality parameters and fatty acid composition of the hen egg yolk［J］.Poultry Science，2005，84(1):148-157.

［16］MILINSK M C，MURAKAMI A E，GOMES S T M，et al.Fatty acid profile of egg yolk lipids from hens fed diets rich in n-3 fatty acids［J］.Food Chemistry，2003，83(2):287-292.