五鹤续断多糖对大鼠糖尿病肾病的防治作用

王振富 钟 灵 杨付明

(湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000)

糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的并发症之一，也是糖尿病死亡的主要因素。目前尚无疗效确切的西药可延缓其病程的发展，因此，用中药防治DN的研究备受人们关注。研究表明黄芪等中药有防治DN的作用〔1〕。五鹤续断因其生长于湖北省五峰及鹤峰两县境内而得名，属于川续断科植物，并且是川续断中的优质品，药用部位为其干燥根，具有补肝益肾、续接筋骨、抗骨质疏松、止血安胎等功效，临床上主要用于治疗腰膝酸软，跌打损伤，骨折，腰椎骨质增生，先兆性流产和习惯性流产等症状〔2〕。现代药理学研究显示五鹤续断具有增强免疫力、抗氧化和延缓衰老的作用〔3〕，但在防治DN方面的实验研究未见报道。五鹤续断多糖是五鹤续断的主要高效活性成分之一，本实验旨在探讨五鹤续断多糖对大鼠DN的作用及机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂和仪器 链脲佐菌素(STZ)购于Sigma公司；氢化可的松注射液购于山西晋新双鹤药液有限公司；苯那普利(洛汀新)购于北京诺华制药有限公司。Beckman全自动生化分析仪(湖北民族学院附属民大医院)，TGL-16G 高速台式离心机(上海安亭仪器厂)，DL-50型超级恒温器，F-160型药物粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂)，RE52-3旋转蒸发器(上海沪西分析仪器厂)。

1.2五鹤续断多糖提取物的制备 五鹤续断由恩施自治州中药材生产GAP 示范基地提供。取五鹤续断干燥根1 kg，用粉碎机打成粉末，过60目筛。提取工艺流程参照武芸等〔4〕：石油醚脱脂-热水浸提-水提液过滤-冷冻浓缩-乙醇沉淀多糖-sevage试剂去蛋白-冷冻干燥-测定含量。

1.3实验动物分组、造模及处理〔5〕纯种SD大鼠，体重220～250 g，由湖北民族学院实验动物中心提供。将40只SD大鼠随机分为4组，每组10只(雌雄各5只)：对照组、模型组、苯那普利组和五鹤续断多糖组。参照文献〔5〕，采用STZ(60 mg/kg 1次腹腔注射)和氢化可的松制作DN大鼠模型,造模完成后每天定时灌胃：对照组和模型组给予蒸馏1 ml·kg-1·d-1灌胃;苯那普利组给予苯那普利溶液1.5 mg·kg-1·d-1灌胃；五鹤续断多糖组给予五鹤续断多糖溶液1 ml ·kg-1·d-1灌胃。实验第8周统一处死大鼠。处死前将大鼠置洗净的金属代谢笼收集24 h尿，留尿期间禁食，不禁水，记录尿量后取5 ml，5 000 r/min离心5 min,将上清液保存于-70℃冰箱待测。称量大鼠体重后,用戊巴比妥溶液40 mg/kg 腹腔内注射麻醉,经腹主动脉采血6 ml， 常温下5 000 r/ min 离心10 min 分离血清，置于-70℃冰箱保存待测。取出双肾,以4℃0.85%氯化钠洗净，小心剥去肾包膜，以4℃0.85%氯化钠冲洗肾血管3次以上。微量电子天平称量双肾重。

1.4血、尿生化指标测定 血糖(PG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)采用Beckman 全自动生化分析仪测定,并计算内生肌酐排泄率(Ccr),Ccr(ml/min)= 尿肌酐浓度×每分钟尿量/血浆肌酐浓度；β2-微球蛋白(β2-MG)水平采用放射免疫法测定；24 h尿微量清蛋白排泄率(UAER)= 尿清蛋白水平(mg/ml)×24 h 尿量(ml)。

1.5统计学方法 采用SPSS15.0软件进行配对t检验。

2 结 果

2.1五鹤续断多糖对DN大鼠肾重/体重、PG及血脂的影响 与对照组比较，模型组大鼠肾重/体重明显增加，PG、血脂增高(P<0.01)；与模型组比较，五鹤续断多糖能明显降低模型大鼠肾重/体重、PG及血脂(P<0.01)，见表1。

2.2五鹤续断多糖对DN大鼠肾功能的影响 与对照组比较，模型组大鼠出现明显肾衰竭(P<0.01)，与模型组比较，五鹤续断多糖能明显改善肾功能(P<0.01)，见表2。

表1 五鹤续断多糖对DN大鼠肾重/体重、及血脂的影响

表2 五鹤续断多糖对DN大鼠肾功能的影响

3 讨 论

DN早期病理特点为肾小球肥大、肾小球和肾小管基底膜增厚以及系膜外基质进行性积聚；其后期为肾小球和肾小管纤维化，并最终导致蛋白尿和肾衰竭。DN的发病机制较为复杂，目前尚不完全明了。大多数学者人为：肾血流动力学改变、糖代谢紊乱及由此所致的非酶糖基化、多元醇通路激活、血管活性物质及细胞因子激活、氧化应激、蛋白激酶C激活、肾病蛋白、脂代谢紊乱、遗传等因素有关〔6〕。DN的治疗采用一体化治疗原则：严格控制高血糖、高血压、纠正脂代谢紊乱、逆转胰岛素抵抗、减少蛋白尿、保护肾功能和积极治疗并发症。虽然这些措施可以减缓蛋白尿的增加和肾功能减退,降低病死率,但DN的治疗仍然是一个巨大的难题,更有效的治疗措施和新药的研发迫在眉睫〔7〕。研究表明：黄芪、冬虫夏草等中药具有防止DN的作用〔8〕。本实验结果表明：五鹤续断多糖具有增加肾重/体重、降低血糖和血脂及减缓肾衰竭的作用。可能机制为：双向调节血糖、抑制一氧化氮(NO)合成、扩张血管、改善微循环、降低血浆渗透压和血液黏度、调节脂代谢的作用,能增加肾血流量,减轻脂质在肾小球和肾间质的沉积和微血栓的形成,还能改善肾功能、防止肾小球硬化，但其具体机制还有待于进一步研究。

4 参考文献

1闫凌云，杨叔禹，李学军.黄芪多糖对糖尿病肾病防治机制的研究进展〔J〕.医学综述,2012；18(11)：1727-9.

2全国中草药汇编写组.全国中草药汇编(下册)〔M〕.北京：人民卫生出版社，2000：135.

3艾明仙.五鹤续断注射液对大鼠学习记忆及抗氧化酶的影响〔J〕.中国老年学杂志，2007；6(11):1044-6.

4武 芸，丁 莉.五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究〔J〕.时珍国医国药，2009；20(6):1325-6.

5陈小野.实用中医征候动物模型〔M〕.北京：北京医科大学·中国协和医科大学联合出版社,1993：100-5.

6廖 钰,夏 宁.糖尿病肾病发病机制研究进展〔J〕.医学综述,2011；17(22)：3453-5.

7方岐莹，邵凤民.糖尿病肾病的发病机制及治疗新进展〔J〕.实用诊断与治疗杂志，2008；22(3)：201-3.

8张 颖，苗明三.糖尿病肾病动物模型及中医药治疗特点〔J〕.中医学报，2011；26(3)：329-32.