越桔原花青素对SHG-44脑胶质瘤细胞生长的作用

钟 越 齐 玲 杨宁江 任 旷 杨淑艳 赵东海 刘晓阳

(吉林医药学院科研学术处，吉林 吉林 132013)

越桔又称蓝莓，我国野生的笃斯越桔主要分布在吉林省长白山地区，因其富含原花青素(PC)而受到广泛关注。大量的研究表明，PC具有抗肿瘤、抗衰老及增强免疫功能等多种药理作用〔1～3〕。但关于越桔PC抗肿瘤的研究比较少，尤其是对脑胶质瘤细胞的作用尚未见相关报道。本实验研究越桔PC对胶质瘤细胞株SHG-44细胞生长的作用。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 人脑SHG-44细胞株由吉林大学基础医学院提供。越桔PC购于南京苏朗医药科技开发有限公司；RPMI-1640培养液购自Hyclone公司；0.25%胰酶和小牛血清购自美国Gibco公司；二甲基亚枫(DMSO)和噻唑蓝(MTT)均购自美国Sigma公司。

1.2SHG-44细胞的培养 自液氮罐中取出冻存的人脑SHG-44细胞，将其置于37℃水浴振荡融解，再用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液混匀后置于25 cm2培养瓶中，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下进行培养，隔日换液一次。

1.3MTT检测SHG-44细胞的生长情况 将对数生长期的SHG-44细胞制成单细胞悬液，以8 000个/孔密度接种于96孔板中，置于37℃、5% CO2及饱和湿度条件下培养过夜。次日加入越桔PC(5、10、20、40 μg/L，含5%小牛血清的RPMI-1640培养液为基础培养液)，每个浓度设5个复孔，分别作用24、48、72 h时，并设空白对照组。终止反应时，各孔再加入MTT 20 μl，继续孵育4 h，弃上清，每孔加入DMSO 150 μl，振荡后在全自动酶标仪上测定各孔490 nm 区的吸光度值。

2 结 果

5、10、20、40 μg/L越桔PC作用SHG-44细胞24、48、72 h时，均可明显抑制胶质瘤细胞的生长。10、20、40 μg/L各浓度越桔PC组在作用24、48、72 h时，细胞的生长均受到明显的抑制，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；5 μg/L浓度越桔PC组在作用72 h时，胶质瘤细胞的生长亦明显受到抑制，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 越桔原花青素对SHG-44细胞生长的影响(n=5，±s)

3 讨 论

神经胶质是脑肿瘤的最常见形式，以恶性居多〔4〕。一经发现，首先手术治疗，术后可根据患者情况进行放、化疗，结合最新的替莫唑胺疗法，患者生存期的延长也不明显〔5〕。中医上对脑肿瘤的主要分型有痰湿内阻型、气滞血淤型、热毒蕴结型、肝风内动型、肝肾阴虚型、脾肾阳虚型。一般中医治疗脑肿瘤的中成药、单方验方都为合剂且只是对症治疗，但对于合剂中哪一种药物发挥主要功效、作用机制并不清楚。有研究〔6～9〕表明，PC具有抗肿瘤作用，但对于野生的笃斯越桔的抗肿瘤作用还未见报道。综上，越桔PC可以抑制脑胶质瘤细胞的生长，但其抑制胶质瘤细胞生长的机制，有待进一步探讨。

4 参考文献

1范红艳，王艳春，任 旷，等.越桔原花青素对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化的抑制作用及机制〔J〕.中国中药杂志，2012；37(3)：344-7.

2范红艳，王艳春，任 旷，等.越桔原花青素对大鼠心肌纤维化作用的影响〔J〕.中国药理学通报,2009;25(5)：626-30.

3Zhao BX，Sun YB，Wang SQ，etal.Grape seed procyanidin reversal of p-glycoprotein associated multi-drug resistance via down-regulation of NF-κB and MAPK/ERK mediated YB-1 activity in A2780/T cells〔J〕.PLoS One，2013;8(8)：e71071.

4Qi L，Bellail AC，Rossi MR，etal.Heterogeneity of primary glioblastoma cells in the expression of caspase-8 and the response to TRAIL-induced apoptosis〔J〕.Apoptosis，2011;16(11)：1150-64.

5Stupp R，Warren P，Martin J，etal.Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma〔J〕.N Engl J Med，2005;352(10)：987-96.

6Rao IJ，Yada H,Ono H，etal.Occurrence of antioxidant and radical scavenging proanthocyanidins from the Indian minor spic enagkesar(Mammea Iongitolia planch and trlanasyn)〔J〕.Bioorg Med Chemi，2004;12(1)：31-6.

7Meeran SM,Yada H,Ono H.Proanthocyanidins inhibit mitogenic and survival-signaing in vitro and tumor growth in vivo〔J〕.Front Biosci，2008;13(6)：887-97.

8Mantena SK，Katiyar SK.Grape seed proanthocyanidins inhibit UV-radiation-induced oxidative stress and activation of MAPK and NFkappa B signaling in human epidermal keratinocytes〔J〕.Free Radic Biol Med，2006;40(9)：1603-14.

9Sharma SD，Meeran SM，Katiyar SK.Dietary grape seed proanthocyanidins inhibit UVB-induced oxidative stress and activation of mitogen-activated protein kinases and nuclear factor-Kappa Bsignaling in vivo SKH-1 hairless mice〔J〕.Mol Cancer Ther，2007;6(3)：995-1005.