外周血SOCS-1的表达及与慢性丙型肝炎自身免疫现象的关系

卢娟娟 杜国义 张惠琴 张丽萍 杨玉霞 李文凡

(甘肃省人民医院消化科，甘肃 兰州 730000)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后的发病机制尚不十分明确，有研究表明很多慢性丙型肝炎患者存在自身免疫现象，而这种自身免疫现象与肝细胞损害及病毒慢性持续感染有关〔1〕。在体和离体实验表明HCV感染可导致机体B细胞和T细胞功能失调，T淋巴细胞之间相互协调或(及)制约功能遭到破坏已有报道〔2〕，但作为产生抗体的B淋巴细胞功能有无改变，目前报道不多。本文通过研究HCV感染者体内外周血细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)-1与慢性丙型肝炎自身免疫现象的关系，了解B细胞的功能紊乱与病情发展的关系，进一步探讨丙型肝炎的发病机制。

1 材料与方法

1.1对象 2010年6月至2012 年12月在我院消化内科就诊的 HCV 感染者78例，均符合中华医学会肝病学分会 2004年制订的《丙型肝炎防治指南》，病程超过6个月，血清HCV RNA(RT-PCR法)和(或)抗HCV(ELISA法)阳性，排除其他病毒感染、自身免疫性肝炎、酒精性肝病和代谢性肝病等，近3个月内未使用抗病毒药物及免疫抑制剂。男48例, 女30例, 年龄25～64岁〔平均(42.3±6)〕岁,病例组又分为慢性丙肝有自身免疫现象组和慢性丙肝无自身免疫现象组，选择40 例健康人作为健康对照组, 无急慢性心、肝、肾等疾病,两组年龄、性别无统计学差异(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1检测项目 取静脉血5 ml，分别检测肝功能、HCV RNA、免疫球蛋白、肝纤维化4项及自身抗体(血清抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原、抗肝肾微粒体抗体-1和抗肝细胞胞质抗体-1)。

1.2.2外周血单个核细胞(PBMC)SOCS-1 mRNA水平测定 采集外周静脉血5 ml，进行PBMC分离。制备总RNA，所得RNA置于-70℃待用。采用RT-PCR方法，以β-actin为内参照，SOCS-1和β-actin引物序列参照文献〔3〕方法以及GenBank中查出的相应序列，根据引物设计原则用Primer Express 2.0设计软件设计引物序列:SOCS-1，正义引物：5'-ACC CCT TCT CAC CTC TTG A-3'，反义：5'-ATA AAG CCA GAG ACC CTC C-3'，扩增片段长度184 bp,β-actin正义引物：5'-GTG GAC ATC CGC AAA GAC-3'，反义：5'-AGT TGC GTT ACA CCC TTT C-3'，扩增片段长度320 bp。凝胶成像系统分析条带吸光度。表达强度=目标基因A值/β-actin A值。

2 结 果

2.1HBV感染组自身免疫紊乱情况 78例HBV感染组有自身免疫现象者32例(41%)，自身抗体阳性27例，其中抗核抗体阳性21例，抗平滑肌抗体阳性5例，抗肝细胞胞质抗体阳性2例，抗肝肾微粒体抗体阳性2例，抗线粒体抗体及抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原阳性0例。合并肝外自身免疫疾病7例，其中糖尿病4例，甲状腺功能亢进2例，类风湿关节炎1例。

2.2HCV 感染者有自身免疫现象、无自身免疫现象及健康对照组SOCS-1mRNA 表达水平的比较 三组间SOCS-1 mRNA 表达水平差异有统计学意义(F=6.500，P=0.002)。HCV 感染有自身免疫现象组SOCS-1 mRNA 表达水平(0.38±0.44)低于其他两组(LSD-t=0.209,0.203；P=0.001,0.042)，无自身免疫现象组SOCS-1 mRNA 表达水平(0.59±0.37)虽低于健康对照组(0.76±0.52)，但无显著差异(LSD-t=0.190，P=0.079)。

2.3SOCS-1 mRNA 表达水平与其他指标的相关性 SOCS-1 mRNA 表达水平与谷丙转氨酸(ALT)、HCV RNA、IgG、IgA、IgM无相关性；与透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)、层黏蛋白(LN)有相关性，见表1。

表1 SOCS-1 mRNA 表达水平与其他指标的相关性分析

3 讨 论

已有大量研究表明HCV感染患者存在自身免疫现象，包括产生自身抗体及合并肝外自身免疫性疾病，这种自身免疫现象可能与肝细胞损害及病毒的慢性持续感染有关，15%～48.8%的HCV感染患者可以检测到自身抗体；HCV感染患者还可伴有混合性冷球蛋白血症、肾小球肾炎、迟发性皮肤卟琳症、干燥综合征、自身免疫性甲状腺炎、特发性血小板减少症等自身免疫性疾病〔4，5〕。自身抗体的产生可能系HCV诱导机体自身免疫紊乱所致，特别是诱导B淋巴细胞增殖，而研究表明SOCS-1表达的抑制与B淋巴细胞增殖有关〔2〕。

SOCS-1具有抑制Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAK-STAT)信号转导通路的作用，可抑制B细胞的活化和增殖〔2〕，在缺失SOCS-1或敲除SOCS-1基因情况下大量的DC迁移到胸腺和脾脏中，并在其表面表达高水平的B淋巴细胞刺激因子Blys和分裂诱导配体(ApRIL),使体内B细胞的胞体异常增大和产生自身反应性抗体〔6〕。SOCS-1是重要的肝脏炎性抑制因子，通过调节细胞因子和Toll样受体诱发反应抑制肝脏炎性；SOCS-1对调节树突细胞的功能、抑制全身炎性反应和系统自身免疫有重要的调控作用〔6〕。本研究结果表明SOCS-1表达抑制可能是刺激机体产生自身免疫现象的原因，但是血清SOCS-1 mRNA水平与肝功能无相关性，这可能是因为病例数目偏少，也可能因为肝细胞的损害由多种因素所致，不仅与自身免疫因素有关；血清SOCS-1 mRNA水平与血清肝纤维化指标有相关性,折射出与HCV感染慢性化及预后密切相关,这可能因为SOCS-1表达抑制，可以增加组织对炎症反应的易感性，而免疫反应、炎症影响肝病的慢性化和纤维化进展速度〔11〕。

4 参考文献

1Paroli M,Iannucci G,Accapezzato D.Hepatitis C virus infection and autoimmune diseases〔J〕.Int J Gen Med,2012;5:903-7.

2Moorman J,Dong ZP,Ni L,etal.Abnormal B-cell activation associated with TALL-1 over-expression and SOCS-1 suppression during chronic hepatitis C virus infection〔J〕. Immunology,2009;128(2):227-35.

3Boursier J,Louver A.Liver fibrogenesis and genetic factors〔J〕.Clin Res Hepatol Gastroenterol,2011;35(1):S3-9.

4Imanaka K,Tamura S,Fukui K,etal.Enhanced expression of suppressor of cytokine signalling-1 in the liver of chronic hepatitis C: possible involvement in resistance to interferon therapy〔J〕.J Viral Hepat,2005;12(2):130-8.

5Aceti A,Zechini B,Griggi T,etal.Undetectable phospho-STAT 1 in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C who do not respond to interferon-alpha therapy〔J〕.Liver Int,2005;25(5):987-93.

6Fujimoto M, Naka T.SOCS1, a negative regulator of cytokine signals and TLR responses, in human liver diseases〔J〕.Gastroenterol Res Pract,2010;2(3):156-7.