鼻咽癌中Survivin的表达与淋巴转移临床分期的关系

吴艳霞

【摘要】目的探讨Survivin在鼻咽癌患者中的表达情况及其相关性。方法选择30例经病理组织学证实为鼻咽癌的患者为研究对象, 并选择30例鼻咽黏膜慢性炎为对照组, 采用免疫组化法测定两组鼻黏膜标本中Survivin表达情况及采用RT-PCR法测定两组Survivin的表达量, 并分析彼此间的相关性。结果Survivin的相对表达量：对照组(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 两两相比差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌组织中Survivin阳性表达率显著高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论Survivin可能参与到鼻咽癌肿瘤的发生及发展过程中, 通过测定Survivin表达强度对预测鼻咽癌病情有重要的意义。

【关键词】Survivin；鼻咽癌细胞；淋巴转移鼻咽癌(NPC)是指鼻咽腔侧壁及顶部生长的恶性肿瘤, 目前普遍认为NPC发病过程复杂, 其发病过程与环境、EB病毒、饮食、遗传等因素有关［1, 2］。近年研究指出, 基因表达异常与肿瘤的发病机制具有密切的关系。对Survivin与鼻咽癌细胞增殖中的作用机制进行研究, 旨在为同类疾病的治疗提供参考指导, 现报告如下。

1资料与方法

1. 1一般资料选择本院2010年1月~2011年12月收治的鼻咽癌患者30例为研究对象, 患者经病理组织学及影像学诊断证实为鼻咽癌, 所有患者均行手术治疗且术前没接受放疗、化疗。男18例, 女12例, 年龄29~76岁, 平均年龄(49.6±3.8)岁。患者肿瘤大小0.8~5.9 cm, 平均(2.8±1.4)cm。患者病理学分级：G1级10例, G2级12例, G3级8例。患者FIGO(病理组织学)临床分期：Ⅰ期9例, Ⅱ期7例, Ⅲ期8例, Ⅳ期6例, 淋巴结转移12例。患者病理分级及临床分期均符合2000年WHO对鼻咽癌的分级标准。选择同期在行身体检查的鼻咽黏膜慢性炎30例为对照组, 男17例, 女13例, 年龄21~78岁, 平均年龄(48.8±4.2)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。

1. 2方法①免疫组化法：采用免疫组化法检测两组鼻黏膜组织中Survivin的表达。Survivin鼠抗人多克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司。Survivin鼠抗体多克隆抗为即用型。Survivi采用EDTA热修复处理20 min, 并采用PBS缓冲液对样品进行冲洗, 随后依次在试样板中加入一抗、二抗以及DAB进行显色反应。经苏木精复染后采用乙醇对样本脱水并制成中性树胶封片, 并与已知的阳性切片进行对比, 阴性对照则采用PBS缓冲液替代一抗的样本进行参照。②PCR方法：采用RT-PCR(购于日本TAKAPA公司)测定各组Survivin含量, 设计针对人Survivin的PCR的探针序列以及荧光检测引物, 选择人GAPDH(由美国BD公司提供)作为测试的内参物, 并采用Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)提取RNA, 荧光定量PCR实验严格按照试剂盒操作说明进行。Survivin相对表达量=目的基因/内参基因。

1. 3免疫组化结果的判断①Survivin阳性表达为棕黄色颗粒见于细胞核内, Survivin阳性表达为棕黄色颗粒见于细胞质及细胞核内。②在倍数为100的显微镜下观察细胞着色情况, 根据着色程度由轻至重可分别记为0、1、2、3。随机选取5个视野点, 采用倍数为400的显微镜分别对5个视野进行观察, 每个视野进行细胞计数, 并计算细胞的阳性百分比(以500个细胞作为一组计算单位), 细胞阳性百分率：1为<10%, 2为10%~50%, 3为>50%。积分计算：①与②计算所得的分值相乘。积分为0分：阴性“-”, 1~3分：弱阳性“+”, 4~6分：中度阳性“++”, 7~9分：强阳性“+++”。

1. 4统计学方法使用SPSS17.0对各项资料进行统计分析, 计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验, 计数资料采用χ2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2. 1Survivin的相对表达量对照组(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 两两相比差异有统计学意义(P<0.05), 详见表1。

表1Survivin的相对表达量( x-±s)

项目 例数 Survivin含量

对照组 30 0.07±0.04

Ⅰ期 9 1.14±0.21a

Ⅱ期 7 1.37±0.27ab

Ⅲ期 8 1.59±0.34abc

Ⅳ期 6 1.82±0.4abcd

注：与对照组相比, aP<0.05；与Ⅰ期相比, bP<0.05；与Ⅱ期相比, cP<0.05；与Ⅲ期相比, dP<0.05

2. 2Survivin在鼻咽癌中的阳性表达率分析鼻咽癌组织中Survivin阳性表达率显著高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05), 详见表2。

3讨论

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中作用最强的成员, 其与IAP家族中的其他蛋白有所不同, Survivin不仅具有参与细胞有丝分裂, 调节细胞质分裂的作用, 同时还能抑制细胞凋亡。Survivin的表达水平受细胞有丝分裂水平的影响, 其可与有丝分裂中的纺锤体微管特异性结合, 对维持细胞有丝分裂具有重要的作用。相关研究指出, 通过干预细胞有丝分裂过程中Survivin的表达可导致细胞在G2期凋亡。陈吉添等［3］研究指出, Survivin在正常生长的胚胎细胞中具有较高的表达水平, 而在成人终末分化的睾丸、胎盘中的表达水平则非常低, 甚至不表达。但在一些恶性肿瘤组织如肠癌、胃癌、子宫内膜癌中均具有较高的表达能力。本研究中对照组(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 两两相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光分析显示, 鼻咽癌组织中Survivin阳性表达率显著高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05), 无论是定性还是定量分析均显示, Survivin在鼻咽癌中均有较高的表达水平, 研究结果与舒禹先等［4］一致。Survivin在鼻咽癌中随着患者临床分期的增加, 其表达水平显著增加, 从而提示Survivin与鼻咽癌病情进展关系密切。临床可通过测定鼻咽癌患者鼻黏膜组织中Survivin表达水平判断患者病情进展的情况, 从而为临床治疗鼻咽癌提供指导。

参考文献

［1］ 蔡俊宏, 符生苗, 涂志华, 等.鼻咽癌Survivin基因表达与预后关系的研究.海南医学, 2011(18):1-3.

［2］ 伍红良, 凌月福, 黄岚珍, 等.EGCG 对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及Survivin、VEGF表达的影响.实用医学杂志, 2011, 27(7):1138-1141.

［3］ 陈吉添, 陈瑜, 吴薇紫, 等. Livin与Survivin在鼻咽癌组织中的表达及临床意义.实用癌症杂志, 2012, 27(1):21-23, 29.

［4］ 舒禹先, 邬蒙. Survivin蛋白在鼻咽癌组织中表达及其临床意义.实用癌症杂志, 2012, 27(4):362-365.

［收稿日期：2014-03-17］

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