高危型HPV结合液基细胞学技术在宫颈癌前病变诊断中的应用

2014-09-12龚旭华

实用癌症杂志 2014年5期

颜萍龚旭华

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，具有极高的发病率和死亡率，仅次于乳腺癌[1]。近年来，发病年龄日趋年轻，若及早发现并治疗，其治愈率可高达90%[2]。人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是诱发宫颈癌发病和癌前病变的重要致病因子[3-4]。本文采用液基细胞学检查(liquid-based cytology test，TCT)结合高危型HPV检测宫颈癌前病变，诊断效果显著，现将研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 纳入标准

①无宫颈手术史；②无子宫切除手术史；③无盆腔放射治疗史；④无宫颈上皮内病变史；④细胞学检查无异常。

1.2 一般资料

纳入2011年6月-2012年6月我院妇科门诊及住院部收治的女性宫颈癌患者204例，年龄18～64岁，平均(36±7)岁。受孕0～6次，平均2次。生产0～4次，平均1次。临床症状包括异常阴道出血，白带增多，性交后出血等，妇科检查显示不同程度宫颈糜烂。

1.3 方法

1.3.1 主要仪器与试剂 TCT仪(新柏氏公司，美国)，SLC-2000B型电子阴道镜(金科威实业有限公司，深圳)，HPV分型基因芯片试剂盒(凯普生物技术有限公司，深圳)，实时定量PCR仪(Bio-Rad，美国)。

1.3.2 液基细胞标本采集及处理收集宫颈颈管和外口处脱落的细胞，盛入装有细胞保存液的小瓶中。标本中的血液、黏液和炎症细胞经程序化处理后与上皮细胞分离，再经由高精密度滤器过滤后转移至经静电处理的载玻片上。制作薄层细胞涂片，固定染色后封片。

1.3.3 HPV检测标本移入1.5 ml微量离心管，14 000 r/min离心5 min，吸弃上清液。细胞块中加入裂解液，100 ℃水浴加热15 min，14 000 r/min离心5 min。吸取上清液进行PCR扩增。分别检测包括高危亚型和低危亚型在内的共21种基因型。

1.4 诊断标准

细胞学诊断标准：①正常范围内；②鳞状上皮细胞异常，包括意义不明的不典型鳞状细胞(ASCUS)、不典型鳞状细胞(ASCH)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)；③腺细胞异常，包括宫颈管原位癌(AIS)、不典型腺细胞(AGC)、倾向于肿瘤的不典型腺细胞。阳性指标：HPV DNA≥1.0 mg/L。细胞学>ASCUS者，行宫颈搔刮术，阳性结果：CINⅠ及以上病变。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，P<0.05表示显著性差异，具有统计学意义。

2 结果

2.1 TCT检测结果

138例患者显示TCT阳性合并HPV感染。LSIL显示HPV阳性40例(29.0%)，HSIL显示HPV阳性10例(7.2%)，ASCUS显示HPV阳性80例(58.0%)，SCC显示HPV阳性8例(5.8%)。

2.2 TCT阳性时HPV高危型感染情况

138例TCT阳性标本中具有42例HPV高危型，阳性率为30.4%。LSIL显示HPV高危12例(30.0%)，HSIL显示HPV高危4例(40.0%)，ASCUS显示HPV高危18例(22.5%)，SCC显示HPV高危8例(100.0%)。不同类型标本HPV高危型感染率具有显著性差异(P<0.05)。

2.3 TCT结合HPV检测

由表1可见，TCT和HPV均为(-)时，则未发生高度病变。HPV阳性和TCT异常同时存在时，≥CINⅠ的检出率为53.3%(48/90)。仅TCT异常而HPV(-)时，检出率为47.8%(11/23)，P<0.05，具有统计学差异。

表1 TCT结合HPV检测与组织病理检查结果情况比较(例，%)

3 讨论

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤，严重威胁女性的健康。通过医学干预可及早发现并治疗癌前病变，并可有效预防宫颈癌发生[5]。研究证实，HPV感染是导致宫颈癌变的重要因子[6]。高危型HPV包括多种类型，如16、33、45、56、68等。描述性诊断系统(the bethesda system，TBS)分为正常范围、ASCUS、SIL和SCC，SIL又分为LSIL和HSIL。为了细胞学和组织学相统一，LSIL即CINⅠ，较少发展为浸润癌。HSIL即CINⅡ和CINⅢ，极有可能发展为浸润癌[7]。高危型HPV病毒从感染到癌变全过程均可检测，同时还可确定细胞形态变化的原因。高危型HPV检测直接检查病因，可将已患宫颈癌变或存在潜在风险的妇女筛选出来，是筛查宫颈癌变的重要手段[8]。

传统的检测方法，如巴氏涂片，有较高的假阴性率，原因可能包括：①病变细胞未被转移至载玻片，多数细胞被丢弃；②涂片质量差，不正常细胞被过多的血液、黏液或炎细胞遮盖[9-10]。近年来，巴氏涂片法已逐步被TCT技术所代替。采用TCT技术，标本取出后可立即放入细胞保存液中，充分保留了标本，从而避免常规涂片所致的细胞过度干燥[11]。此外，TCT技术还可避免涂片背景中大量白细胞、红细胞等干扰因素，大大提高诊断率[12]。研究显示，TCT检测假阴性率仅为0.26%。TCT采用特制颈管刷收集脱落的细胞，几乎保存了所有标本[13]。经程序化处理后制成细胞涂片，固定染色后显微镜下阅片诊断。该法易于观察不正常细胞，且细胞核结构清晰，易于鉴定，大大降低了假阴性率，提高了灵敏度和特异性[14]。TCT检测可有效判断疾病是否进入临床期。将二者联合应用既可预防又可指导治疗，对宫颈癌的防治具有及其重要的作用[15]。

本研究结果显示，共138例患者显示TCT阳性合并HPV感染，其中42例HPV高危型，阳性率为30%。不同类型标本HPV高危型感染率具有显著性差异，LSIL显示HPV高危12例(30%)，HSIL显示HPV高危4例(40%)，ASCUS显示HPV高危18例(23%)，SCC显示HPV高危8例(100%)。TCT和HPV均为(-)时，则未发生高度病变。HPV阳性和TCT异常同时存在时，≥CINⅠ的检出率为53.3%，仅TCT异常而HPV(-)时，检出率为47.8%。由此可见，高危型HPV基因分型检测结合液基细胞学检查是极具价值的宫颈癌早期筛查方法，联合检测比单项检查更可靠。

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