KAI1及CD44V6在胃癌中的表达及意义

王 武 谢金标 杨天宝 卢辉山 张 捷

KAI1基因作为抑癌基因，CD44V6作为粘附分子，已被证明与多种恶性肿瘤的发生、发展、侵袭转移相关。本研究利用免疫组化技术检测KAI1、CD44V6蛋白的表达，旨在探讨两者与胃癌的临床病理特征的关系及其相互关系，为在分子水平更准确地判断肿瘤的进展提供新的依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

所有病例选自福建医科大学附属协和医院2006年间手术切除且资料完整、诊断明确的原发性胃癌病例，共61例，20例距离肿瘤边缘约10 cm的切缘作为正常组织对照。患者术前均未经放疗和化疗，术后病理证实为腺癌，组织学分类明确。组织块保存完好，标本经甲醛固定，石蜡包埋，行4 μm连续切片。61例胃癌患者中男性43例，女性18例，年龄25～79 岁。年龄>60岁28例，年龄≤60岁33例。高分化、中分化癌36例，低分化癌25例。无淋巴结转移21例，伴淋巴结转移40例。浸润未超过浆膜层(T1+T2)16例，浸润超过浆膜层(T3+T4)45例。TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期20例， Ⅲ～Ⅳ期41例。

1.2 试剂与方法

鼠抗人CD44V6单克隆抗体(MAB-0038)购自福州迈新生物公司，鼠抗人KAI1单克隆抗体(SC-10722)购自北京中杉生物公司，工作液浓度为1∶150，即用型免疫组化超敏S-P试剂盒均购自福州迈新生物公司。免疫组化采用标记的链霉素抗生物素蛋白-生物素免疫染色(Streptavidin-Peroxidase，SP)方法，采用PBS代替一抗作空白对照，己知阴性切片作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判断

KAI1蛋白主要定位于细胞胞膜及胞质，阳性细胞呈明显棕黄色或棕褐色； CD44V6蛋白主要定位于细胞胞膜及胞质。阴性对照为PBS代一抗。选择5个以上高倍(×400)视野，计数不少于500个细胞。根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评分，阳性细胞百分率<30%为0分， 30%～70%为1分，>70%为2分；肿瘤基本不着色为0分，色浅为1分，色深为2分。计算两者评分之和，以得分0分为阴性(-)，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为强阳性(++)。

1.4 统计学方法

采用χ2检验组间差异的显著性，指标间的相关关系用spearman相关分析，采用SPSS 13.0 软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 KAI1蛋白及CD44V6蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达

KAI1在癌旁正常胃组织中的阳性表达率(+～++)为 90.0%(18/20)。KAI1在胃癌组织中的阳性表达率(+～++)为 29.5%(18/61)，明显低于在癌旁正常胃组织中的表达，差异有统计学意义(P<0.01)。

CD44V6在癌旁正常胃组织中的阳性表达率(+～++)为 5.0%(1/20)。CD44V6在胃癌组织中的阳性表达率(+～++)为 65.6%(40/61)，明显高于在癌旁正常胃组织中的表达，差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 KAI1及CD44V6蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系

KAI1蛋白及CD44V6蛋白的表达与年龄、性别无关(P>0.05)；与浆膜是否受侵犯、分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关 (P<0.05)。见表1。

表1 KAI1及CD44V6在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系/例

2.3 KAI1与CD44V6蛋白表达的关系

KAI1阴性表达的43例病例中，CD44V6阳性表达32例(74.4%)，而18例KAI1的阳性表达中，CD44V6阳性表达8例(44.4%)。经统计学处理，两者差异具有显著性意义(χ2=5.0499，P<0.05)，提示两者间存在相关性，其负相关的密切程度为γ=-0.363。

3 讨论

KAI1基因是1995年由Dong等[1]采用人类特异的Alu重复顺序介导的PCR技术从人前列腺癌杂交细胞AT6.1中的11号染色体克隆出的肿瘤转移抑制基因。KAI1基因转录编码的蛋白质与已知的CD82结构相同，CD82是1种细胞膜糖蛋白，是4跨膜超家族(TM4SF)成员之一，具有4个高度保守疏水的跨膜结构域和1个大的细胞外N端糖基化结构域[1]。KAI1对肿瘤转移的抑制作用可能与其对细胞运动、转移和增生的影响、对新生血管形成的影响及调节细胞的粘附有关。TM4SF蛋白不仅能够调节异型粘附，还具有促进同型粘附的作用。研究发现KAI1/CD82和其它TM4SF分子可与整合素形成复合体，从而调节整合素的粘附功能，并影响整合素介导的细胞迁移[2]。TM4SF分子中一些成员如CD9、 CD63、 CD61、CD82之间可相互交联，还可与人类白细胞抗原DR(human leukocyte antigen-DR，HLA-DR)复合体和非常晚出现抗原1(very late antigen-1，VLA-1)组成四分子交联网，促进细胞表面的蛋白定位，在信号传导、细胞粘附及决定细胞运动方式等方面起着重要作用[3]。Liu等[4]发现转染KAI1质粒的大肠癌细胞同质性粘附能力高于对照组，异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。Jee等[5]研究发现KAI1蛋白通过Src激酶(Src kinase)介导的细胞内信号传导途径促进细胞的同质性粘附，抑制肿瘤的转移。Odintsova等[6]研究发现KAI1可与EGF受体相互作用，下调EGF与相应受体的结合，致使EGF诱导的信号传导迅速衰减，上皮细胞的板状伪足的伸展和细胞的迁移明显受抑制，从而抑制新生血管的形成，最终抑制肿瘤的转移。Zheng等[7]研究发现，KAI1在正常胃黏膜中表达显著高于胃异型增生和胃癌。KAI1表达与胃癌浸润深度、转移、Lauren分型、生长方式和组织学分型相关，而与肿块大小、Borrmann分型和TNM分期无关。推测KAI1的缺失表达在胃癌的发生、进展中起着重要作用，可以作为预测胃癌进展的客观有价值的指标。Tsutsumi等[8]研究发现KAI1蛋白在正常胃上皮细胞中高表达，在胃原发癌中低表达。KAI1蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤部位无关，而与胃癌组织学类型、肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移有关。KAI1阴性表达的患者在总体生存率方面较KAI1阳性表达的患者预后差，但是KAI1的缺失表达并不是独立性的预后因素。我们的研究与Tsutsumi等的研究结果相似，提示KAI1的表达下调可能与胃癌细胞的分化不良有关，KAI1蛋白在胃癌的发生、发展和浸润转移中起抑制作用，KAI1蛋白的表达下调导致胃癌更具有恶性侵袭性，更易于发生转移，因此， KAI1蛋白可作为判断胃癌生物学行为的指标。

CD44分子是CD44基因的表达产物，是1种细胞表面的跨膜糖蛋白，是细胞的粘附分子之一，含有变异型V6外显子的CD44变异体，其肽链位于细胞外区靠近跨膜区部位能与层粘连蛋白和IV型胶原蛋白结合。本研究结果显示，CD44V6主要定位于细胞胞膜及胞质上，在胃癌中的表达率为65.6%，显著高于其在正常胃组织中的表达(P<0.01)，这与孙喜文等[9]研究结果相近。孙喜文等[9]研究发现，胃癌原发灶CD44V6阳性表达率为62%，Ⅲ-Ⅳ期胃癌CD44V6阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期，癌组织侵及浆膜层者的CD44V6阳性率明显高于未侵及浆膜层者，淋巴结转移组CD44V6的阳性率明显高于淋巴结未转移组，认为CD44V6表达强度与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及病期进展有关，其阳性预示胃癌具有更强的侵袭、转移能力，容易向周围组织扩散。CD44V6的出现改变了肿瘤细胞表面粘附分子的构成和功能，使肿瘤细胞的侵袭与转移能力增强。CD44V6的过度表达可使肿瘤细胞牢固地锚定在宿主细胞基膜及细胞外间质中，形成稳定的侵袭或转移；而CD44V6的过度表达又使得肿瘤细胞周围的透明质酸浓度上调，细胞间质的高渗状态促使其吸收水分，造成细胞外间质的致密结构被破坏，促使肿瘤细胞向周围侵袭转移[10]。CD44V6在肿瘤细胞上的过度表达，使得肿瘤细胞模拟淋巴细胞的“归巢”过程，与远隔部位的血管及淋巴管内的受体结合，导致肿瘤细胞的淋巴结转移及远处转移[11]。因此CD44V6可作为判断胃癌生物学行为的指标。

KAI1蛋白及CD44V6在胃癌中表达具有负相关性，表明KAI1蛋白及CD44V6在胃癌的发生、发展和侵袭转移中起相互制约的作用。

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