冠盖藤对骨性关节炎大鼠细胞因子的影响

秦莉花 李 晟 钟华美 陈晓阳 秦莉峰 吴艳飞 黄 宽

(湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)

骨性关节炎(OA)是一个多病因、发病机制复杂的常见病， 临床上尚缺乏有效的根治措施。常用的治疗方法为服用非甾体消炎药消炎止痛。非甾体消炎药长期服用往往引起副作用，且疗效不理想。民间用冠盖藤治疗OA，其疗效显著，课题组前期研究对冠盖藤进行鉴定，属于柔毛冠盖藤〔1〕，但其具体机制尚未明确。本课题研究冠盖藤水提液对大鼠血常规、白细胞介素(IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。

1 材料与方法

1.1动物 健康SD大鼠，雄性，SPF级，体重180～220 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(湘)2009-0004。

1.2药物 冠盖藤在怀化市沅陵采集，经湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室鉴定为柔毛冠盖藤，制备成水煎液称取冠盖藤药材1 500 g，分3次提取，最后浓缩成1 g生药/6 ml的药液，备用；雷公藤多甙片(上海复旦复华药业有限公司，批号Z31020415)。以上药物用时均由生理盐水配成所需浓度。

1.3试剂及仪器 二甲苯(天津市大茂化学试剂厂，批号：20080921)。角叉菜胶(Sigma 公司，批号：45F-0427)；冰醋酸(潍坊润洁化学有限公司)；弗氏完全佐剂F-5881(Sigma公司)；IL-1β、IL-6和TNF-α试剂盒(美国ADL公司)。其他试剂均为市售分析纯。电子天平(德国Sartorius公司产品，型号：BP211D)；电热三用水箱(北京市医疗设备厂)；TGL-16高速台式离心机(江苏大地自动化仪器厂)。

1.4OA模型的建立 取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎〔2～4〕。原发病变表现为致炎侧的关节肿胀，致敏当天后即可出现；继发病变一般于致炎后第12～18天出现，表现为非致炎侧及双前肢的关节肿胀。

1.5分组 造模成功后的50只SD大鼠随机分为5组：模型组，雷公藤组，冠盖藤高、中、低剂量组，每组10只。另外取10只健康SD大鼠作为正常组。造模后，雷公藤组给予雷公藤多甙片混悬液15.44 mg/kg；冠盖藤低、中、高剂量组分别给予冠盖藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生药/kg，正常组给予等容量蒸馏水。致炎当天，各组均采用灌胃方法给药，1次/d，给药时间28 d。

1.6血常规、细胞因子的检测 治疗28 d后用断头取血，取2份，1份置抗凝管中，由湖南中医药大学第一附属医院测定血常规。另1份静置后离心，留取血清测定IL-1β、IL-6和TNF-α水平，根据试剂盒说明书进行检测。检测大鼠的血常规，血清中IL-1β、IL-6和TNF-α。

2 结 果

2.1冠盖藤对OA大鼠模型血常规的影响 与正常组比较，模型组大鼠血液中的白细胞、粒细胞、淋巴细胞数明显升高，两者比较有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较，冠盖藤低、中、高剂量组大鼠血液中白细胞、粒细胞和淋巴细胞数明显降低，两组比较有显著性差异(P

表1 冠盖藤对OA大鼠血常规的影响

2.2冠盖藤对OA大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的影响 与正常组比较，造模后各组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著升高(P<0.01)；与模型组比较，冠盖藤低、中、高剂量组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著降低(P<0.01)，且冠盖藤高剂量组的抑制效果和雷公藤组相当，见表2。

表2 冠盖藤水提取物对大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α的影响

3 讨 论

OA是由Garrod在1890年首先提出的，又名退行性关节炎、老年性关节炎、变性性关节炎等，是中老人群常见的一种退行性关节疾病，而且发病率和患病率较高，随年龄的增长而升高〔5〕。OA的临床表现主要为缓慢进展的关节疼痛、压痛、僵硬、肿大伴活动受限，严重者可导致关节功能障碍甚至残疾，严重降低了患者的生活能力和劳动能力，增加了家庭医疗费用，给家庭和社会带来沉重的经济负担。1983年首先在人关节炎病变滑液中发现了IL-1，其中以IL-1β为主，而OA软骨组织中、上层软骨细胞及其基质均呈IL-1强阳性反应。IL-1主要由单核巨噬细胞分泌，亦可由软骨细胞、滑膜细胞、单核巨噬细胞等产生，IL-1有IL-1a和IL-1β两种亚型，其中IL-1β是IL-1的主要成分，是一种强力的致痛炎症因子，在急、慢性炎症时，会引发全身性症状如发热，在局部则引起组织炎症和破坏性病变。汤建平等〔6〕也研究发现OA发病与关节滑膜细胞增殖旺盛，分泌过多的IL-1并释放入血有关。骨性关节炎发病机制和疼痛与关节滑膜细胞分泌过多的IL-6并释放人血有关〔7〕。TNF是由单核巨噬细胞系统产生的一种肽类激素，是一种强有力的促炎症细胞因子，是机体炎症与免疫反应的重要调节因子，它除了抗肿瘤、致热作用外，还能促进炎细胞黏附血管壁及游出血管外，刺激内皮细胞、巨噬细胞释放IL-1、黏附分子等。TNF可协同白细胞介素等细胞因子共同构成炎症介质〔8〕。近年来研究认为，细胞因子TNF-α和IL-6是参与OA发病进程中的重要介质，是炎症反应的始动因素。临床研究表明，膝OA患者体内中TNF-α、IL-1β、IL-6高于正常人水平，炎症因子水平的升高在膝OA发病、发展扮演重要角色〔9～11〕。实验结果显示兔OA模型的血清IL-1β和TNF-α含量都升高〔12〕。课题组前期工作已研究证明冠盖藤抗镇痛作用，其机制尚未研究〔13〕。本实验通过建立OA模型，检测血常规、血清中细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的变化，研究冠盖藤水提取物对OA的治疗效果及其作用机制。本文提示冠盖藤对弗氏完全佐剂引起大鼠血常规异常有治疗作用，其抗炎镇痛机制之一可能通过降低白细胞、中性粒细胞数，血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平，改善局部周围微循环，减轻骨内压，缓解疼痛。

4 参考文献

1陈晓阳，钟华美，吴艳飞，等.冠盖藤药用部位的生药学研究〔J〕.时珍国医国药杂志，2012；23(4)：900-1.

2马玉琛，段 斐，孟 明.改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型〔J〕.现代预防医学，2008；35(10)：1989-91.

3林 红，贺永怀，黎 燕，等. Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较〔J〕.中国实验动物学报，1999；7(1)：32-5.

4徐淑云，卞如濂，陈 修．药理实验方法学〔M〕.第2版.北京：人民卫生出版社，1991:723-4.

5Meulenbeh I,Srymour AB,Nieuwland M,etal．Association of the interleukin-1 gene cluster with radiographic signs of oteoarthritis of the hip〔J〕．Arthritis Rheumatism,2004;50(4):1179-86.

6汤建平，吕 征，曹晓健，等.骨性关节炎患者三种细胞因子水平及透明质酸钠治疗对其水平的影响〔J〕.中华骨伤科杂志，1999；19(12)：726.

7廖怀章，游叶平，何乐善，等.膝骨痹康胶囊对膝骨性关节炎大鼠IL-6、IL-9影响的实验研究〔J〕.世界中西医结合杂志，2012；6(8)：658-60.

8张爱玲，于沛林，王晓宁.补肾壮骨颗粒对兔膝骨性关节炎白介素-1和肿瘤坏死因子的影响〔J〕.光明中医，2012；27(3)：424-6.

9郑建林.自拟除弊透骨汤治疗膝骨性关节炎的临床疗效及对炎性因子水平影响观察〔J〕.中医药学报，2012；40(3):180.

10周定华，周正球，吴 炅，等.骨增合剂对膝骨性关节炎患者肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β的影响〔J〕.中医杂志，2012；6(13)：1140-1.

11李 力，郑 鹏，汪少源.血清IL-6水平与骨性关节炎的临床相关性观察〔J〕.中国临床实用医学，2009；3(1)：56-8.

12符路娣.臭氧与药物治疗对兔骨性关节炎血清中IL-1β、TNF-α含量的影响〔J〕.中兽医学杂志，2012；55(3)：6-8.

13秦莉花，钟华美，陈晓阳，等.冠盖藤抗炎镇痛作用〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(3)：429-31.