白木通醇提取物体外抗肿瘤活性研究

广西医科大学药学院，广西 南宁 530021

白木通醇提取物体外抗肿瘤活性研究

唐燕霞孙悦文梁钢*

广西医科大学药学院，广西 南宁 530021

目的研究白木通乙醇提取物的体外抗肿瘤活性。方法采用乙醇回流提取制备白木通醇提取物，以MTT法检测白木通醇提取物对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1的生长抑制情况。结果白木通醇提取物体外对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1有抑制增殖作用。结论白木通醇提取物具有一定的体外抗肿瘤活性。

白木通醇提取物体；抗肿瘤；肝癌；鼻咽癌

白木通Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.为木通科木通属植物，其根、藤茎、叶、种子、果实皆可入药，其主要药用部位为藤茎和果实[1]。白木通的藤茎作为木通入药，其味苦，性微寒，入心、小肠、膀胱经，具清心火、利小便和通经下乳之功效[2]。国内外学者对木通属植物的化学成分进行了很多研究，并分离出了单体成分，但有关其药效学，尤其是抗肿瘤作用方面的报道却相对较少。本实验对白木通醇提取物在体外对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的作用进行研究，为白木通的进一步开发利用提供了实验依据。

1 材料

白木通(藤茎)购自广西桂林市腾龙堂药业有限责任公司同心园药店；索拉菲尼购自拜耳公司；人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1购自中国科学院细胞库，由本实验室传代培养；1640培养基，美国Gibco公司；DMSO、胰蛋白酶，美国Sigma公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；噻唑蓝(MTT)，美国AMRESCO公司。

2 实验方法

2.1 白木通醇提物的制备 将白木通干药材粉碎后，用6倍体积的75%乙醇溶液回流提取2次，每次2h，抽滤，合并滤液。减压回收溶剂，将药液浓缩至浸膏，置于60℃烘箱烘干备用。

2.2 MTT法[3]检测白木通醇提物对不同肿瘤细胞的抑制作用 选取对数生长期的人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1，用0.5%胰蛋白酶消化后，配成2×105个/ml的细胞悬液，96孔细胞培养板中每孔加入100 μl细胞悬液。置于37℃，5%CO2的培养箱中培养12 h，每孔加入100 μl不同浓度的含药培养基，每个浓度设4个平行孔，同时设立空白对照组，索拉菲尼为阳性对照组。加药后培养箱中继续培养24 h后，每孔加入20 μl 5 mg/ml的MTT溶液，继续培养4 h。吸去上清液，每孔加入150 μl DMSO，用酶标仪在490 nm波长处测OD值。计算细胞增殖抑制率和半数抑制浓度IC50。

抑制率(%)=(空白对照组OD值-加药组OD值)/空白对照组OD值×100%。

2.3 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件进行数据处理。

3 结果

白木通醇提物有抑制人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的作用，半数抑制浓度IC50分别为0.393 mg/ml、0.348 mg/ml、0.205 mg/ml。结果见表1。

4 讨论

从实验结果可以看出白木通醇提物对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404、鼻咽癌细胞CNE-1都有抑制增殖作用，并且呈一定的剂量依赖性，其对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404的作用比较接近，而对鼻咽癌细胞CNE-1的体外抑制增殖作用则相对较强。本课题组对白木通醇提物进行了初步的化学成分预试，发现其主要成分为非还原性糖、苷，可能含有少量黄酮。据国内外学者发表的大量研究表明，木通属植物富含三萜皂苷[4]。有文献报道从木通中分离的五种三萜皂苷对试验细胞A549，SK-OV-3，SK-MEL-2，XF498，HCT15均表现显著的细胞毒活性[5]。本实验中白木通醇提物对肿瘤细胞具有抑制增殖作用。综上所述，我们认为白木通醇提物中的有效成分很可能是皂苷类物质。本课题组后期将进一步分离纯化白木通，明确其药效成分，并深入研究其抗肿瘤的机制。

表1 白木通醇提物对肿瘤细胞的抑制作用

[1]江苏新医学院.中药大辞典(上)[M].上海：上海科学技术出版社，1977：19-20.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：59，278.

[3]孙延芳，梁宗锁，刘文婷，等.刺五加皂苷抗乳腺癌细胞活性研究[J].时珍国医国药，2012，23(4)：926-927.

[4]刘岩庭，侯雄军，谢月，等.木通属植物化学成分及药理作用研究进展[J].江西中医学院学报，2012，25(4)：87-93.

[5]Jung H，Lee C，Lee K，et al.Structure-activity relationship of oleanane disaccharides isolated form Akebia quinata versus cytotoxicity against cancer cells and NO inhibition[J].Biol Pharm Bul，2004，27(5)：744-750.

Anti-tumorActiveoftheEthanolExtractfromAkebiatrifoliatainVitro

TANG Yan-xia,SUN Yue-wen,LIANG Gang*

Parmaceutical College of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China

To investigate the anti-tumor active of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. in vitro.Methods：Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. was extracted by reflux in 70% alcohol .MTT assay was used to investigate inhibitory growth effect of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. on human hepatic cancer cells SMMC-7721、BEL-7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE-1 cancer .Results：The ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.inhibited the proliferation of human hepatic cancer cells SMMC-7721、BEL-7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE-1 in vitro.Conclusion：The ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.have certain anti-tumor effect in vitro.

Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.var.australis(Diels)Rehd.;Anti-tumor;Hepatic cancer;Nasopharyngeal cancer

广西自然科学基金项目(编号：2010GXNSFD013043)。

唐燕霞(1987-)，女，广西合浦人，在读硕士研究生，主要从事抗肿瘤药理学研究。

梁钢(1957-)，男，博士，教授，博士研究生导师。主要从事抗肿瘤分子药理学及其新药研究工作。

R 285.5

A

1007-8517(2014)10-0017-02

2014.03.10)