丹芍康妇丸中赤芍苷的含量测定方法研究

广东省清远市食品药品检验所,广东 清远 511500

丹芍康妇丸中赤芍苷的含量测定方法研究

曾小平熊亦禹

广东省清远市食品药品检验所,广东 清远 511500

目的建立以HPLC法测定丹芍康妇丸中赤芍含量的新方法。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；以乙腈-水(15∶85)为流动相；流速为1.0ml/min。检测波长为230nm。结果芍药苷对照品浓度在5.84～292.0μg/ml之间与其峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999。加样平均回收率为98.9%，RSD=2.50%。结论此方法简单，准确，重现性好，可为丹芍康妇丸的质量控制提供依据。

高效液相色谱法；丹芍康妇丸；赤芍；芍药苷

丹芍康妇丸是由丹参、莪术、三七、赤芍、当归等药材组成的复方制剂。紫丹参及莪术虽为方中君药，但两者并无可准确定量的成分，赤芍为方中主药，具散瘀止血的功效，因此，赤芍是丹芍康妇丸质量控制的关键。研究表明，赤芍的主成分为芍药苷，本实验在参考其他文献[1,2]的基础上，选择芍药苷的测定作为丹芍康妇丸质量控制的重要指标，并通过试验建立HPLC测定丹芍康妇丸中芍药苷含量的新方法，有望为该药品的质量控制提供依据。

1 试验材料

仪器：Dionex高效液相色谱仪，UVD340U检测器，Chromeleon工作站；Sartorius电子天平。

试剂：乙腈为色谱纯(LOT 602212，美国Tedia company inc.)；水为纯化水；其他试剂为分析纯。

对照品：芍药苷(批号110736-200527，含量测定用)，购于中国药品生物制品检定所。

供试品：丹芍康妇丸为广州博济医药生物技术有限公司提供，批号为091101，091102，091103、091104、091201、091202。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 色谱条件的选择 色谱柱：参照赤芍药材药典标准[1]含量测定方法，用十八烷其键合硅胶为填充剂的Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A(4.6mm×250mm，5μ)为色谱柱。

测定波长的选择：取芍药苷对照品的甲醇溶液(63.6μg/ml)，在紫外分光光度计200～400nm波长扫描。结果在228nm波长处有最大吸收，与文献所用的测定波长(230nm)基本一致，故选择230nm为本品的测定波长(见图10)。

流动相的选择：因《中国药典》2010年版一部中赤芍含量测定中所用流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(40∶65)中含有盐类，考虑到其对色谱系统有一定的损伤，因此不予采用；参考文献[2]将流动相调整为：乙腈-水(15∶85)。结果供试品中芍药苷峰与杂质峰可达到基线分离，峰形对称，保留时间适中(约15min)，与前后杂质分离度分别为6.09、4.26，理论板数为12175(见图11)。

根据上述试验结果，确定本品的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15∶85)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 提取方法 超声法：取丹芍康复丸(批号091101)适量，研细，混匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率120W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。

回流法：取供试品按2.2.1 法操作，将超声30分钟改为回流30分钟，其余同超声法制备。

取上述两种溶液，分别取10ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果如下(见表7)。

表7 不同提取方法的试验结果(n=2)

从表7可以看出，采用超声法测定结果高于采用回流法，这是超声萃取的效率高于传统的加热回流。

2.2.2 提取溶剂的选择 为了获得最优提取溶剂，本实验根据芍药苷的特性，分别采用水、稀乙醇(50.0%)、甲醇作为溶剂进行提取。取丹芍康复丸(批号091101)，照2.2.1法中超声法，分别用水、稀乙醇(50.0%)、甲醇进行提取制备供试品溶液，分别测定样品中芍药苷的含量。结果见表8。

表8 不同溶剂试验结果

从表8可以看出甲醇的提取效率高于稀乙醇、水。这是由于芍药苷更易溶于甲醇。

2.2.3 提取时间的选择 为了获得最优提取时间，取丹芍康复丸(批号091101)3份，以甲醇为提取溶剂，按超声法，分别超声处理15分钟，30分钟，60分钟，制成供试品溶液，分别测定芍药苷的含量。结果见表9。

表9 提取时间对芍药苷含量的影响(n=2)

从表9可以看出，随着超声时间的延长，样品溶液中的芍药苷浓度缓慢增加，到30分钟左右达到峰值，随后逐渐降低。可能原因是超声15分钟时样品中芍药苷提取不完全。在超声30min到达峰值后，继续超声提取，导致芍药苷分解。因此选择30分钟作为本品提取时间。

综上，丹芍康复丸中芍药苷的最佳提取方法为：取本品适量，研细，混匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，备用。

2.4 阴性对照品溶液的制备 取厂家提供的阴性对照，相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.5 方法学验证

2.5.1 仪器精密度 精密吸取浓度为64.8μg/ml的芍药苷对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，重复进样6次，按5项下的色谱条件测定芍药苷峰面积，结果表明，仪器精密度良好(见表10)。

2.5.2 准确度 取同一批已知含量(批号091101，含量4.569mg/g)的供试品6份，每份取样为供试品取量(0.5g)的50%，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入芍药苷对照品溶液(0.436mg/ml)5ml，按含量测定方法确定，计算芍药苷回收率。结果平均回收率为98.9%，RSD=2.50%(见表11)。

表10 仪器精密度试验结果

表11 准确度试验结果

2.5.3 精密度 取同一批供试品(批号091101)6份，按含量测定方法测定。结果重复性良好(见表12)。

表12 重复性试验结果

2.5.4 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按含量测定的方法测定。结果阴性对照品溶液在主峰位置无干扰峰出现，因此认为方法专属(见图12)。

2.5.5 线性考察 精密量取芍药苷对照品溶液(0.292mg/ml)0.2、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含5.84、29.2、58.4、87.6、146.0、292.0μg的梯度溶液。分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，按含量测定方法测定，以对照品的浓度(μg/ml)为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.216X+0.0761，r=0.9999。

结果表明，芍药苷对照品浓度在5.84～292.0μg/ml之间与其峰面积呈良好的线性关系(见表13、图13)。

2.5.6 耐用性 取同一份供试品溶液，自制备后，按含量测定方法，分别在0、2、4、6、8、24小时进样测定。结果供试品溶液自制备后24小时内测定基本稳定(见表14)。

2．5．7 供试品含量测定 取供试品六批，按含量测定方法测定，结果见表15。

表13 线性考察结果

表14 稳定性试验结果

表15 供试品含量测定

3 讨论

丹芍康妇丸具有活血化瘀，调经止痛的功效，对改善人工流产术后出血和疼痛有明显效果。本实验采用甲醇为提取剂，超声30min提取丹芍康复丸中芍药苷，采用乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长为230nm，对广州博济医药生物技术有限公司6批丹芍康复丸样品进行了测定，结果表明所建立的方法简单，可靠，重现性好，为丹芍康复丸的质量控制提供了依据。

[1]中国药赤芍药材药典标准.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：147.

[2]通心络胶囊药典标准.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1050.

R284.1

A

1007-8517(2014)12-0006-03

2014.03.25)