PRINS技术在产前诊断21、18、13号染色体数目异常的研究及与FISH技术、羊水细胞培养技术的比较

吴忠琴 李广萍 杨雪 王碧

PRINS技术在产前诊断21、18、13号染色体数目异常的研究及与FISH技术、羊水细胞培养技术的比较

吴忠琴 李广萍 杨雪 王碧

目的 探讨引物原位标记(PRINS)技术在产前诊断21、18、13号染色体数目异常中的价值,并与FISH技术、羊水细胞培养技术进行比较。方法 选择本院2008年1月~2010年12月期间收治的263例唐氏筛查高危和高龄孕妇为研究对象, 所有孕妇均行PRINS技术、FISH技术检测和羊水细胞培养染色体核型分析。统计并比较两种技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率及检出时间。结果 PRINS技术检测产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率为100%, 与FISH技术检测和羊水细胞培养染色体核型分析相符合率100%, 两组比较, 且PRINS技术的平均检出时间均短于FISH技术(P＜0.05)。结论 PRINS技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率较高, 且检出时间短, 具有良好的应用价值。

染色体数目异常；PRINS技术；FISH技术

染色体数目异常是引发唐氏综合征、18-三体综合征、13-三体综合征、TURNER综合征和克氏综合征等疾病的重要原因［1］。如何加强高危孕妇产前21、18、13号染色体数目异常的诊断, 减少出生缺陷患儿具有重要的意义。引物原位标记技术(PRINS技术)是近年发展起来的一项新的遗传物质原位标记技术, 本文以本院2008年1月~2010年12月期间收治的263例唐氏筛查高危和高龄孕妇为研究对象, 探讨PRINS技术在产前诊断21、18、13号染色体数目异常中的应用价值, 并与FISH技术、羊水细胞培养技术进行比较,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2008年1月~2010年12月期间收治的263例高危孕妇为研究对象, 其中高龄孕妇73例, 唐氏筛查高危、18-三体高危190例, 年龄22~38岁, 平均年龄(28.4±3.4)岁。孕周17~23周, 平均孕周(20.3±2.2)周。

1.2 方法 所有孕妇均行PRINS技术和FISH技术诊断、羊水细胞培养染色体核型分析。

1.2.1 PRINS技术检测 B超监护下经腹行羊膜穿刺抽取采集羊水5 ml。PRINS反应：①反应液(杂交体系), 总体积为25 μl。设计第21、18、13号染色体较小分子的寡核苷酸引物(18-30bp), 选择不同标记物标记的dUTP(生物素-16-dUTP, 地高辛-11-dUTP, 荧光素-12-dUTP等)分别设计并进行三次PRINS反应的步骤。②反应过程。37℃条件下进15 min的蛋白酶K消化, 退火, 延伸, 洗脱, 复染。③荧光显微镜监测。50个中期细胞进行记数, 对染色体总数及杂交位点进行观察, 分别统计含1、2、3、≥4个杂交信号的细胞核数。信号间距应大于信号直径［2］。

1.2.2 FISH技术检测 B 超引导下行产妇羊膜腔穿刺, 抽取5 ml羊水。FISH检测采用金菩嘉FISH非整倍体试剂盒,根据试剂盒说明书进行检测步骤的操作。每例羊水均有不同的两个杂交区域, 使用荧光显微镜和图像分析软件共进行21、18、13三条染色体的数目分析。并根据存档保存的染色体数目异常的阳性标本进行双盲方法对照组, 以判断染色体数目异常。

1.2.3 经典羊水细胞培养染色体核型分析 采用经典细胞遗传性学分析技术对本组孕妇进行染色体G带分析。

1.3 观察指标 统计记录两种检测技术的染色体数目异常检出率与检出时间。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件, 计量检测数据以均数±标准差( x-±s)表示, 计数检测数据以率(%)的形式表示, 组间两均数比较用t检验, 计数资料比较用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PRINS技术和FISH技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率。详见表1。

从表1可以看出, PRINS技术检测下, 本组263例高危孕妇产前共筛选出8例18-三体, 7例21-三体和2例13-三体, 与染色体G带分析一致。因此, PRINS技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率为100%。FISH技术检测下, 本组263例高危孕妇产前共筛选出8例18-三体, 7例21-三体和2例13-三体, 与染色体G带分析结果比较,检出率为100%。PRINS技术和FISH技术的检出率比较, 差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 PRINS技术和FISH技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出时间。详见表2。

表1 PRINS技术和FISH技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率对比分析 ［n(%)］

表2 PRINS技术和FISH技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出时间对比分析( x-±s)

从表2可以看出, PRINS技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的平均检出时间均短于FISH技术(P＜0.05)。

3 讨论

临床研究表明,染色体数目异常发生率较高的为13、18、21、X和Y号染色体, 其异常发生率占染色体数目异常的80%~95%［3］。相较于FISH技术和羊水细胞培养技术, PRINS技术结合FISH和PCR的特点, 最先用于DNA重复序列的分析, 具有操作快速简便、高度易控的特异性和成本经济等优势, 已经广泛应用于染色体数目异常的检测。本研究中, 所有孕妇均行PRINS技术和FISH技术诊断。PRINS技术检测产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率为100%, 与FISH技术检测结果和染色体核型分析结果相符合。且PRINS技术的平均检出时间均短于FISH技术。与FISH技术相比, PRINS技术无须使用价格高昂的FISH探针, 实验成本较FISH低廉。因此, PRINS技术在产前21、18、13号染色体数目异常中的检出率较高, 且检出时间短, 成本低廉,具有良好的应用价值。

［1］ 黄元河,冯治,潘乔丹.引物原位标记技术在人类染色体非整倍体嵌合体诊断中的应用.中国妇幼保健, 2013, 28(004): 714-716.

［2］ 赵欣荣,吴怡,韩旭,等.荧光原位杂交产前诊断染色体异常的临床应用.中国优生与遗传杂志, 2012, 20(5): 46-47.

［3］ 魏霞, 代红莹 ,高加良,等.引物原位标记联合核型分析快速检测克氏综合征.中国优生与遗传杂志, 2012,15(02):162-168.

2014-03-11］

550002 贵阳市妇幼保健院优生遗传科