基于“整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对慢性肾衰大鼠的干预作用*

先小乐 赵肖凡 牛家瑜 高 黎 肖相如

（北京中医药大学，北京 100029）

·研究报告·

基于“整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对慢性肾衰大鼠的干预作用*

先小乐 赵肖凡 牛家瑜 高 黎 肖相如△

（北京中医药大学，北京 100029）

目的 基于“整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对慢性肾衰大鼠的干预作用。方法 将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组，即模型组、空白组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组，并将给药后的香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组与模型组进行对照，观察其24 h尿蛋白定量、肾功能及肾脏病理的变化。结果 实验第8周末香砂六君丸加大黄粉组与模型组比较，2 h尿蛋白定量、血清肌酐 （Scr）、尿素氮（BUN）水平降低（P<0.05），并对受损肾脏具有一定的保护作用。结论 基于“整体功能代偿疗法”增强脾的代偿功能可明显降低腺嘌呤致慢性肾衰模型大鼠24 h尿蛋白定量及血清Scr、BUN水平，减轻腺嘌呤对肾脏组织的损害作用，有效改善肾脏功能。

“慢性肾衰整体功能代偿疗法” 慢性肾衰 脾代偿功能 腺嘌呤 大鼠

慢性肾功能衰竭（CRF）是发生在各种慢性肾脏疾病基础上缓慢出现的肾功能减退直至衰竭的临床综合征［1］。本病影响患者生活质量且预后不良，是危害人类健康的重大疾病［2］。本实验基于“整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对腺嘌呤所致慢性肾衰模型大鼠24 h尿蛋白定量（24 h UPro）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）以及肾脏病理的影响，进而基于“慢性肾衰整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对CRF模型大鼠肾脏功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠40只，体质量（200±30）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2009-0004。于北京中医药大学基础医学院普通级实验室饲养。

1.2 主要试剂及仪器 中成药香砂六君丸，中药大黄（粉）均由北京同仁堂有限责任公司提供。蒙诺（福辛普利钠片）（批号：国药准字H19980197）。腺嘌呤（分子式C5H5N5，分子量135.13）（纯度≥98%）、尿液分析试条（化学分析法）、尿微量白蛋白试剂盒及校准品、血肌酐测定试剂盒 （除蛋白法）（100T）、BUN测试盒、水合氯醛、10%中性甲醛等，均由北京百诺威生物科技有限公司提供。使用的全自动生化分析仪GLYMPUS、LD25-2低温自动平衡离心机等，均由北京中医药大学科研中心提供。

1.3 模型制备 将40只大鼠随机分为空白组、模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组，每组10只。本实验参考Yokozawa［3］提出的造模方法，将1 g腺嘌呤溶于40 mL生理盐水中制成混悬液，浓度为2.5%，按200 mg/（kg·d）剂量，每日定时给30只大鼠（模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组）灌胃。空白组大鼠灌胃等体积生理盐水。全部大鼠自由摄取普通饲料、饮水，造模周期共4周。第4周末每组随机处死2～3只大鼠进行指标对比，判断造模是否成功。

1.4 分组与给药 采用随机数字表法进行完全随机化分组。大鼠适应性饲养1周后，模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组采用临时性标记法（3%～5%苦味酸溶液涂染法），同时进行称质量、目测蛋白试纸进行尿液中蛋白质的初步检测。于实验第5周开始，参照药理学实验动物给药方法，香砂六君丸加大黄粉组给予中成药香砂六君丸加大黄粉悬浊液灌胃，福辛普利组给予福辛普利钠片悬浊液灌胃，空白组每日灌胃等剂量生理盐水，模型组不给药、不干预治疗。给药至第8周末结束。在此过程中，根据大鼠的体质量变化调整给药剂量。

1.5 标本采集与检测 于实验第4周、第8周末分别将各组大鼠单个置于清洁代谢笼中做平行对照 （限制饮食，不限饮水），每个接尿瓶中滴入甲苯0.2 mL防腐，进行蛋白质定性及24 h尿蛋白测量。于实验第8周末，水合氯醛麻醉40只大鼠后，腹主动脉取血3 mL。血液收集后立即以3000 r/min低温高速离心15 min，移液枪分离血清，全自动生分析仪测血清Scr、BUN等生化指标。并在取血后迅速剥离肾脏周围结缔组织，距肾门1 mm处摘除肾脏肾，沿矢状面剖开残肾，生理盐水冲洗，无菌纱布轻轻吸干组织表面水分，置于10%中性甲醛溶液中固定，留做肾脏病理切片备用。

1.6 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（s）表示，组间比较采用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 第4、8周末各组大鼠24 h UPro结果 见表1。实验第4周末，模型组与正常组比较，大鼠24 h尿蛋白定量明显升高（P<0.05），差异有统计学意义。表明腺嘌呤诱导的慢性肾衰大鼠造模成功。实验第8周末，香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组与模型组比较，24 h UPro差异有统计学意义（P<0.05）。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组24 h UPro水平相当。

表1 各组第4、8周末各组大鼠24 h UPro水平比较（mg/24 h，s）

表1 各组第4、8周末各组大鼠24 h UPro水平比较（mg/24 h，s）

与模型组比较，*P＜0.05；与空白组比较，△P＜0.05。下同。

组别 n 第4周末 第8周末空白组 10 0 0模型组 10 3.25±1.63△4.04±1.50△香砂六君丸加大黄粉组 10 3.32±1.53△2.06±0.61*△福辛普利组 10 3.55±1.32△1.91±0.50*△

2.2 第8周末各组大鼠血清BUN、Scr结果 见表2。实验第8周末，香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组与模型组比较，血清Scr、BUN水平降低，差异有统计学意义（P<0.05）。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组BUN、Scr水平相当。

表2 各组第8周末各组大鼠BUN、Scr水平比较（s）

表2 各组第8周末各组大鼠BUN、Scr水平比较（s）

组 别 n BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白组 10 6.30±0.53 44.04±3.29模型组 10 30.33±10.57△163.27±27.09△香砂六君丸加大黄粉组 10 13.32±3.53*△80.96±9.61*△福辛普利组 10 14.55±4.52*△82.01±21.50*△

2.3 形态学结果 第8周末模型组大鼠肾脏显著肿大，经肾脏病理HE染色光镜下可见部分肾小球萎缩消失，残余肾小球结构不清，主要表现为球囊变小；部分可见间质纤维化。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组肾小球大部分存在，结构欠清。见图1。

图1 各组肾脏病理切片（HE染色，400倍）

3 讨 论

CRF属难治病，既没有明确其病因病机，也找不到特效药物。据国际肾脏病学会统计，CRF发病率约占自然人群的50/100万～100/100万［1］。我国80年代17省市的普查资料表明，每年死于CRF者达3～5万。2010年我国维持血液透析的患者大约占终末期肾病的45%［4］。虽然肾脏移植手术和血液净化技术给CRF患者带来了生存的曙光，但由于其费用昂贵、技术复杂，难以普遍推广，严重危害国民健康与经济发展，广大的CRF患者仍将依赖于内科非透析治疗［5］。导师肖相如教授早在1989年便提出了“慢性肾功能衰竭的整体功能代偿疗法”，笔者从师于肖相如教授，耳濡目染老师平素运用“整体功能代偿疗法”治疗CRF。CRF虽是各种肾脏疾病发展至终末期的危重综合征，但因健存部分的肾脏在一定时期内可以继续代偿其受损部分，使病损部位得以修复，生命活动得以延续，故西医将保护残存肾单位、维护肾脏代偿能力、改善肾功能作为治疗CRF的重要手段和最终目标。然而，长期慢性的肾脏损害具有不可逆性，肾脏自身代偿能力终究有限。既往对CRF的中医治疗也因局限于肾脏或某一脏腑，进而忽略了脏腑之间整体的功能代偿。“慢性肾衰整体功能代偿疗法”是中医整体观念、治未病养生论、脏腑相关学说与西医代偿理论相结合的产物，其核心是将CRF时肾脏自身的功能代偿扩展成脏腑间整体的功能代偿［5］。这一治疗体系，突破了以往单方单药及被动分型论治的思维定势。

人体是一个以五脏为中心的有机整体，任何生理功能的实现均要在机体各脏腑的共同调节参与下完成。根据“慢性肾衰整体功能代偿疗法”相关理论，就参与代偿的顺序而言，脾最先参与代偿，肺次之，肝再次之，心最后［5］。CRF大部分临床症状是由尿素、肌酐、胍类、草酸及多胺等毒素引起。由肾脏降解排泄的毒素在体内潴留，弥散进入肠腔后被转化为氨和碳酸铵，从而导致消化、血液等系统等异常［6-7］。而CRF总是伴随明显的消化系统症状，其中恶心、厌食、间断性呕吐、呃逆和腹泻最常见。Benzo［8］观察了47例CRF患者，32例有上消化道病变，严重影响患者的营养状态和生活质量。根据“整体功能代偿”的规律，凡是肾功能损害的患者，都应在补肾的同时积极健脾［5］，在没有脾虚证时健脾比出现脾虚证时才健脾对维护肾功能更有意义。因脾居于中焦，职司运化、升清，与人体气化功能关系密切，故CRF脾脏最早参与代偿，所受影响也最直接。当肾脏受损，气化失司，湿浊内留，除外肾脏本身残存单位继续进行代偿性气化功能外，脾脏也参与运化及升清降浊等重要的气化功能，帮助肾脏代谢废物与毒素。若CRF治疗或调护不周均可导致肾脏进行性损害且不可逆，故当体内潴留之湿浊毒邪超过脾胃代偿的气化功能极限，可致脾肾同病。因此CRF时重视调脾对维护肾脏功能有积极的意义。在临床上虚实夹杂者多见，特别是脾气虚弱挟浊邪者较多，故本实验以香砂六君子汤加大黄为主方，以益气健脾、通腑泻浊。

本实验选用香砂六君丸加大黄粉为干预手段，以观察对腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠24 h尿蛋白定量、肾功能等生化指标的影响，进而初步证实基于“整体功能代偿疗法”增强脾的代偿功能可减轻腺嘌呤对肾脏组织的损害作用，有效改善肾脏功能。因此，在今后有效运用内科非透析疗法防治CRF，延缓病程进展，增强肾衰患者肾脏保护作用，仍是临床研究的重要课题。

［1］ 王自敏，吕宏生，刘玉宁，等．中西医临床肾病学［M］．北京：中国中医药出版社，1997：479．

［2］ Coresh J，Astor BC，Greene T，et al．Prevalence of chronic kidney disease and decreased kidney function in the adult US population：Third Nation Healthand Nutrition Examination Survey［J］．Am J Kidney Dis，2003，41（1）：1-12．

［3］ Yokozaws T.Animal model of adenine-induced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44：230-234.

［4］ Zou L，Wang M.Chinese association of blood purification management of Chinese hospital association.Current burden and probable increasing incidence of ESRD in China［J］.Clin Nephrol，2010，74（suppl 1）：S20-22.

［5］ 肖相如.慢性肾功能衰竭的治疗思路研究［J］.中医杂志，1994，35（12）：746.

［6］ Gallice P，Lai E，Bruent P，et，al.In vivo accumulation of sodium pump inhibitor by normal and uremic erythrocytes［J］. Int J Artif Organs，1993，16（3）：120.

［7］ Motojima M，Nishijima F，Ikoma M，et al.Role for“mic toxin”in the progressive loss of intact nephrons in chronic renal failure［J］.Kidney Int，1991，40（3）：461.

［8］ Benzo J，Matos M，Milanes C，et al.Endoscopic findings in the upper digestive tract in patients with terminal chronic kidney failure［J］.GEN，1994，48（1）：34.

Discussion on Intervention of Enhancing Spleen′s Compensation to Rats Suffering from Chronic Renal Failure on Account of Integrated Functional Compensation Therapy for Chronic Renal Failure

XIAN Xiaole，ZHAO Xiaofan，NIU Jiayu，et al.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To discuss on intervention of enhancing spleen′s compensation to rats suffering from chronic renal failure on account of integrated functional compensation therapy for chronic renal failure.Methods：40 healthy male wistar rats were selected and randomly divided into 4 groups，model group，blank group，Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group，fosinopril sodium group.Compared with model group，24-hour urine protein，renal function and renal pathological behavior in Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group after administration will be observed.Results：Compared with model group in eighth weekend of the experience，24-hour urine protein，creatinine and usea nitrogen in serum of Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group reduced（P<0.05），which can protect disabled kidney.Conclusion：Enhancing spleen′s compensation to rats suffering from chronic renal failure on account of integrated functional compensation therapy for chronic renal failure can reduce 24-hour urine protein，creatinine and usea nitrogen in serum of rats given adenine，which can achieve the better renal function by relieving pathological proceeding.

Integrated functional compensation therapy for chronic renal failure；Chronic renal failure；Spleen′s compensation；Adenine；Rats

R285.5

A

1004-745X（2014）11-2009-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.11.018

2014-07-26）

北京中医药大学科研课题（2013-JYBZZ-XS-034）

△通信作者