还原型谷胱甘肽对4种血糖检测方法结果的影响

江 凡, 邹建话, 张修发

(广东省深圳市宝安区妇幼保健院 检验科, 广东 深圳, 518133)

血糖是临床上诊断和治疗糖代谢异常和糖尿病重要的监测指标之一，准确测定血糖水平对临床判断病情和治疗非常重要。目前检测血糖的方法有很多种，常见的有葡萄糖己糖激酶(HK)法、葡萄糖氧化酶(GOD)法、葡萄糖脱氢酶电极(GDH-NAD+-PQ)法和葡萄糖氧化酶电极(GOD-electrode)法，以及微芯片电泳法[1]等，不同的检测方法各有优缺点[2]，灵敏度、稳定性和抗干扰能力也各不相同，一些因素可干扰血糖检测结果，这些因素包括血清标本、检测试剂、设备和一些药物使用等，所以研究血糖测定的干扰因素对于减少误诊率有重要意义[3]。还原型谷胱甘肽(GSH)是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，参与体内三羧酸循环及糖代谢，是临床上常用的肝损害和放化疗的辅助药物，由于GSH能激活多种酶，比如巯基酶等，会干扰血糖检测结果，影响病情和疗效的判断，甚至造成误诊。本研究通过体外添加GSH实验体系对4种血糖检测方法结果进行分析，研究GSH对血糖检测方法的干扰作用，寻找最佳检测方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院体检中心40例健康体检者血清，其中男24名，女16名，年龄28～37岁，平均(30.6±4.5)岁。排除糖代谢异常、糖尿病、肝脏疾病及内分泌等相关疾病，在上午8～9点空腹抽静脉血，血清标本无溶血，无脂血等。所有对象均在知情同意原则下参与本项目研究。

1.2 方法

1.2.1 血糖检测方法：方法A采用HK法，仪器为罗氏公司P800全自动生化分析仪，配套罗氏公司葡萄糖试剂和室内质控品；方法B采用GOD法，仪器为罗氏公司P800全自动生化分析仪，配套罗氏公司葡萄糖试剂和室内质控品；方法C采用采用葡萄糖脱氢酶电极法，血糖仪为美国Q公司生产，配套美国Q公司试剂及室内质控品；方法D采用葡萄糖氧化酶电极法，检测血糖仪为德国S公司，配套德国S公司试剂及室内质控品。四种方法的试验步骤均严格按照试剂的要求进行操作和质控。

1.2.2 GSH干扰试验：根据临床上GSH注射液的常用使用浓度，将试验浓度定为6 mg/mL。还原型谷胱甘肽注射剂(1.2 g/瓶),由上海复旦复华药业有限公司生产。试验步骤：将1.2 g GSH用24 mL生理盐水溶解配成50 mg/mL的贮存液，取检测血清1.0 mL，平分为2管各0.5 mL, 试验管加60 μL 50 mg/mL GSH贮存液，对照管加60 μL生理盐水，分别采用A、B、C、D四种方法同时检测试验管和对照管的血糖浓度，2次检测结果取均值为该标本的最终血糖浓度。

1.2.3 GSH剂量响应试验：试验步骤：取1份血糖浓度为6.1 mmol/L(医学决定水平浓度)的血清，平均分为2管，试验管加60 μL 50 mg/mL还原型谷胱甘肽贮存液(标本5)，对照管加60 μL生理盐水(标本1)，分别取标本1和标本5各200 μL混合(标本3)，分别取标本1和标本3各100 μL混合(标本2)，分别取标本3和标本5各100 μL混合(标本4)，参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP7-A2文件[4]操作。标本1～5中还原型谷胱甘肽浓度见表2，分别采用A、B、C、D四种方法同时检测标本1～5，每管测3次(测试顺序：先升序→降序→升序)，结果取均值。

2 结 果

2.1 GSH对4种血糖检测方法结果的影响

采用4种方法检测试验管和对照管的血糖浓度分别为: A法: (5.3±1.1)、(5.3±1.1); B法：(3.3±1.6)、(5.2±1.2); C法：(5.9±1.8)、(5.8±1.7); D法：(8.2±2.1)、(6.4±1.8)，采用方法A和C检测的试验管和对照管的血糖浓度经比较差异无统计学意义(P>0.05)。B法检测的试验管血糖结果显著低于对照管(P<0.01), D法检测是试验管血糖结果显著高于对照管(P<0.01)。见表1。

表1 GSH对4种血糖检测方法结果的影响

2.2 4种血糖检测方法的剂量响应试验结果

随着GSH浓度升高4种方法检测血糖值差异较大, A法和C法检测血糖结果相对稳定, B方法测量血糖浓度呈现逐渐降低趋势, D方法呈现逐渐升高趋势。见表2。

表2 4种血糖检测方法的剂量响应试验结果

3 讨 论

有研究[5]指出取血前询问用药史，要高度重视某些药物对测定结果的影响。还原型谷胱甘肽(GSH)是含有巯基的三肽，具有抗氧化和整合解毒作用，广泛应用于临床，除了利用其巯基以螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素中毒外，还常用于肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白内障和视网膜等疾病治疗，以及作为放化疗的辅助药物。GSH是甘油醛磷酸脱氢酶、乙二醛酶和丙糖脱氢酶的辅酶，参与体内三羧酸循环及糖代谢，并能激活多种酶，促进糖、脂肪和蛋白质代谢，由于其半胱氨酸上的巯基为活性基团，决定了其对酶学试验可能存在的干扰作用。本研究结果显示,采用A和C法检测的试验管和对照管的血糖浓度经统计学分析差异无统计学意义(P>0.05), B法试验管血糖浓度显著低于对照管(P<0.01), D法试验管血糖浓度显著高于对照管(P<0.01), 证实血清中GSH存在可干扰血糖检测浓度，这种干扰作用导致检测结果差异较大，己糖激酶法和GDH-NAD+-PQ法对GSH抗干扰力强，适合GSH使用患者的血糖检测，GOD法易受GSH干扰出现假性高血糖和低血糖。在检测血糖前检验人员一定要关注患者使用的药物对于血糖结果的干扰，对于使用了GSH的患者时宜选择己糖激酶法检测血糖，尽量避免选择葡萄糖氧化酶法，检测报告注明血糖检测方法学对于医生判断结果也十分重要。对特别低和特别高的结果要了解患者用药情况后，才可做出判断，必要时重复测定。导致上述结果的确切机制尚不十分清楚，可能与下列因素密切相关。由于己糖激酶法的特点为对外界抗干扰能力强，轻度溶血、脂血、维生素C、EDTA等因素有较强的抗干扰能力，不会影响血糖测定结果[6], 本试验也显示己糖激酶法对GSH同样具有良好的抗干扰能力。葡萄糖氧化酶法导致血糖结果偏低的原因与Trinder反应的底物H2O2易被GSH还原物质竞争性消耗所致。由于电极法主要是通过反应过程中电子转移产生的电流大小来测定血糖，而葡萄糖脱氢酶电极法只需用较低的电压(200 mv)就可启动反应，此电压尚未使GSH激发释放出电子，所以葡萄糖脱氢酶电极法检测结果相对稳定。葡萄糖氧化酶电极法，则需用较高的电压(400 mv)启动反应，可能较高的工作电压使GSH自身激发释放出电子，产生更多的电流，使检测值偏高出现假性高血糖[7]。通过剂量响应试验可以看出随着GSH浓度升高采用A法和C法检测血糖值相对稳定，B方法测量血糖浓度呈现逐渐降低趋势，D方法呈现逐渐升高趋势，提示GSH对GOD法测定的血糖结果有显著的负干扰作用，对氧化酶电极法测定的血糖结果有显著的正干扰作用，同时存在剂量干扰效应，即浓度越高，干扰效力越大。

[1] Maeda E, Kataoka M, Hino M, et al. Determination of human blood glucose levels using microchip electrophoresis[J]. Electrophoresis, 2007, 28(16): 2927.

[2] 关文锦. 3种方法检测血糖结果比较[J]. 检验医学与临床, 2010, 7(14): 1506.

[3] 王连明, 辛晓敏, 刘晓民, 等. 血糖测定的影响因素研究[J]. 中国实验诊断学, 2006, 10(11): 1345.

[4] CLSI/NCCLS. Interference testing in clinical chemistry[M]. Approved Guideline-second Edition(EP7-A2), 2005.

[5] 李玉凤. 急诊昏迷患者快速血糖的测定[J]. 实用临床医药杂志: 护理版, 2007, 3(3): 36.

[6] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 459.

[7] 郭龙华, 黄宪章, 万泽民, 等. 盐酸多巴胺对2种微量血糖仪的干扰试验结果比较[J]. 实用医学杂志, 2010, 26(11): 2018.