加味五苓散对S180腹水型小鼠腹水量及外周血中TNF-α浓度的影响

★ 石跃进 张宁苏 高宏 殷东风

(1.辽宁中医药大学 沈阳 110032；2.辽宁中医药大学附属医院 沈阳 110032)

癌性腹腔积液继发于不同恶性肿瘤的腹腔内转移，标志着肿瘤已进入晚期，此时患者免疫功能亦会下降[1]。一旦发生，患者的中位生存期大约仅为数周至数月，一年生存率低于10%[2]。临床上通常采取利尿，腹腔穿刺放水，腹腔穿刺置管引流，腹腔内注射给药等方法来治疗。中医认为脏腑功能失调影响津液运行，毒聚水停是恶性腹水发病的基本病机，由此我院肿瘤科临床中采用“加味五苓散”来治疗恶性腹水。设计本实验旨在阐明加味五苓散对恶性腹水的作用机理，为临床应用提供一定的实验室依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及细胞株

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重(20±2)g，7周左右周龄，购于辽宁中医药大学实验动物中心。S180细胞株由辽宁中医药大学生物技术实验室提供。

1.2 实验药品及制备

加味五苓散由茯苓20g、白术20g、猪苓15g、桂枝15g、泽泻15g、葶苈子15g、土茯苓15g、龙葵15g、白花蛇舌草20g、半枝莲20g、山慈菇15g、生薏苡仁30g、炙甘草10g构成，将上述药品用水煎煮，浓度浓缩为2.13g/mL，经过无菌处理后放置在冰箱中备用。

注射用顺铂(冻干型)10mg/瓶，齐鲁制药有限公司生产。以上药品均购于辽宁中医药大学附属医院。

1.3 S180腹水型小鼠模型建立

用一次性注射器抽取适量S180细胞株混悬液无菌条件下注射于10只健康昆明种小鼠腹腔内，0.2mL/只，10天后S180腹水型小鼠模型制备成功，成功率100%，腹水生成，齐性好，未见血性腹水。无菌条件下取已制备好的10只S180腹水型小鼠腹水，制备成S180腹水瘤细胞悬液(瘤细胞成活率>95%，细胞浓度(1×106/mL)，无菌条件下注射到随机抽取的32只健康小鼠腹腔，每鼠注入0.2mL，7天后32只S180腹水型小鼠全部造模成功，全鼠成活，腹水齐性好[3]。

1.4 动物分组及给药方法

1.4.1 动物分组 剩余的8只小鼠为空白组，32只S180腹水型小鼠随机分为4组，每组8只，分别为对照组、中药组、西药组、中药加西药组。共5组。

1.4.2 给药方法 空白组、对照组、西药组每日予以0.5mL生理盐水灌胃，中药组、中药加西药组每

日予以0.5mL加味五苓散灌胃；第1日和第7日，西药组、中药加西药组予以配备好的顺铂注射液(10mg顺铂溶解于17.4mL生理盐水)0.2mL腹腔内注射，空白组、对照组、中药组予以生理盐水0.2mL腹腔内注射。实验周期14天。

1.5 指标检测

1.5.1 小鼠腹水量测定 各组用药14天后，次日麻醉小鼠，无菌条件下抽取腹水，记录腹水量。

1.5.2 小鼠外周血中TNF-α的浓度测定 各组用药14天后，次日麻醉小鼠，无菌条件下取出小鼠血，采用ELISA法(详见说明书)测定血液中TNF-α浓度。

1.6 统计方法

2 结果

2.1 各腹水型小组腹水量测量结果

中药组、西药组、中药加西药组与对照组比较腹水量减少有意义(P<0.05)；中药加西药组与中药组、西药组比较腹水量减少均有意义(P<0.05)，见表1。

表1 各腹水型小组腹水量测量结果

2.2 各组小鼠外周血中TNF-α的浓度测定结果

中药组、中药在西药组与对照组比较外周血中TNF-α浓度升高有意义(P<0.05)；西药组与对照组比较外周血中TNF-α浓度升高，但无显著差异(P>0.05)；中药加西药组与单用西药组能使小鼠外周血中TNF-α浓度升高有意义(P<0.05)，见表2。

表2 各组小鼠外周血中TNF-α水平测定结果

3 讨论

五苓散首见于《伤寒杂病论》，张仲景用其治疗太阳病表邪不解，水蓄为患的病症。清代医家汪昂在其所著《医方集解·利湿之剂》曰：“经曰，淡味渗泄为阳，二苓甘淡入肺，而通膀胱为君，咸味涌泄为阴，泽泻甘咸入肾膀胱，同利水道为臣，益水所以制水，故以白术苦温健脾祛湿为佐，膀胱者津液藏焉，气化则能出矣，故以肉桂辛热为使，热因热用，引入膀胱以化其气，使湿热之邪皆从小水而出也”[4]。本实验所用加味五苓散是由五苓散加抗癌以及利水渗湿之品组成，功在化气利水育阴，解毒抗癌消积。

TNF-α可通过直接细胞毒作用、抗肿瘤血管生成以及诱导肿瘤细胞凋亡达到杀伤肿瘤细胞的作用[5]。TNF-α为可溶性细胞因子，是迄今所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的一种生物学活性因子[6]。

从本研究中可以得出加味五苓散提高S180小鼠外周血中TNF-α的浓度显著，腹水量减少明显；使用顺铂时联合使用加味五苓散比单用顺铂的S180小鼠外周血中TNF-α的浓度升高及腹水量减少显著。单独使用顺铂时TNF-α的浓度升高不显著，但是腹水量减少明显，可能与顺铂副作用免疫抑制或者样本数量不足等有关，需要进一步研究。

加味五苓散用于癌性腹水患者可以通过升高其外周血中TNF-α的浓度，抑制腹水生长，达到控制腹水，改善患者生存质量目的，在临床中值得推广使用。

[1]汤钊猷．现代肿瘤学[M].第2版．上海：上海医科大学出版社，2000：571．

[2]孙燕，石远凯．临床肿瘤内科手册[M].第5版．北京：人民卫生出版社，2007：779．

[3]陈奇．中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993．

[4]金家浚，蒋维宇等．中医百家方论荟萃[M].重庆：重庆出版社，1994：815．

[5]方风奇，朱青山，刘基巍．注射用重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性腹水的价值研究[J].西部医学，2006，18(3)：264-266．

[6]余伟明，焦丙华．肿瘤坏死因子及相关细胞毒索[M].上海：上海科学技术出版社，1991：15-20.