高效液相色谱法测定心舒宁片中葛根素的含量

刘素文

(河北省唐山市丰南区中医医院药剂科，河北 丰南 063300)

高效液相色谱法测定心舒宁片中葛根素的含量

刘素文

(河北省唐山市丰南区中医医院药剂科，河北 丰南 063300)

色谱法，高压液相；回收率；葛根；片剂；葛根素

心舒宁片临床主要作用为活血化瘀，用于心脉瘀阻所致的胸痹、心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全、动脉硬化见上述证候者。是由葛根、银杏叶等6味中药材组成，其法定质量标准是根据卫生部颁药品标准(中药成方制剂第17册)WS3-B-3153-98标准，此标准无含量测定项，而葛根中所含葛根素是其主要有效成分。测定处方中的有效成分葛根素的含量对临床合理用药具有指导意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪：包括Series Ⅲ液相色谱泵(美国SSI公司)； Model 500检测器(美国SSI公司)；ANASTAR色谱工作站(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；色谱柱：Diamonsil C18，(5μm，4.6mm×250mm)；十万分之一分析天平(METTLER T0LED0公司)； TU-1810型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.2 药品及试剂 心舒宁片(广州白云山奇星药业有限公司，国药准字Z44022796)，葛根素对照品(含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110752-200209)，乙腈色谱纯(天津四友化学试剂厂)，磷酸为分析纯，水为二次重蒸水。

2 方法

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择 取葛根素对照品溶液，用紫外分光光度计在190～370nm波长范围内测定吸收度，绘制曲线，对照品溶液在250nm处有较大吸收，故选用250nm为其测定波长。

2.1.2 流动相的选择 流动相一：流动相为甲醇-水(25∶75)，结果：葛根素峰与其他组分峰完全分离，但峰形不好，而且出峰时间太长。流动相二：参照文献[1]，流动相为乙腈-水-磷酸(12∶88∶0.2)，结果：葛根素峰与其他组分峰不能完全分离。流动相三：调节流动相比例，最终确定流动相定为乙腈-水-磷酸(11∶89∶0.2)。

2.1.3 系统耐用性 不同高效液相色谱仪之间的耐用性，仪器：岛津，泵(LC-10ATvp)，检测器(SPD-10AVP)。结果：葛根素峰与其他峰分离良好，保留时间适宜。

流速有微小改变耐用性:把流速由1.0mL/min调到0.95mL/min，结果葛根素峰与其他峰分离良好，保留时间适宜。

色谱柱的变动：换用另一根色谱柱(Hypersil C18，5μm，4.6mm×250mm)，结果葛根素峰与其他峰分离良好，保留时间适宜。

2.1.4 结论 经试验，该系统在不同仪器、流速微小改变及不同色谱柱的情况下系统耐用性好。确定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Diamonsil C18，5μm，4.6mm×250mm)，以乙腈-水-磷酸(11∶89∶0.2)为流动相；检测波长：250nm；流速：1.0mL/min。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 提取溶剂的选择 分别以30%乙醇、乙醇作为提取溶剂，比较如下：取心舒宁片内容物适量，研细，称取2份，每份约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入30%乙醇溶液、乙醇各50mL，称质量，分别超声提取30min，放至室温，称质量，分别用30%乙醇溶液、乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。葛根素对照品溶液的浓度为0.040mg/mL，分别精密量取20μL，按拟定的色谱条件测定。结论：用30%乙醇作为提取溶剂，对本品中葛根素的提取效果较好，故选择30%乙醇作为提取溶剂。

2.2.2 提取时间的选择 分别以20min、30min、40min超声提取，比较如下：取心舒宁片适量，研细，取约0.2g，称取3份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各加入30%乙醇50mL，称质量，分别超声提取20min、30min、40min，放至室温，称质量，加30%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液即得。葛根素对照品溶液的浓度为0.040mg/mL，分别精密量取20μL，按拟定的色谱条件测定，结果表明，20min同30min与40min提取葛根素有明显差异，而30min与40min提取葛根素无明显差异，为了节能省耗，将提取时间定为30min。

2.2.3 方法 取供试品心舒宁片20片，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入30%乙醇50mL，称质量，超声处理30min，放至室温，加30%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品12.5mg，置25mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并稀释至刻度，再精密量取2mL置25mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，即得0.040mg/mL对照品溶液。

2.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按2.1项下色谱条件注入高效液相色谱仪，测定，即得。

2.5 阴性对照溶液的制备及干扰情况 按处方比例称取除葛根以外的其余药味，做成缺葛根的阴性样品，按上述2.2方法同法制成缺葛根的阴性对照溶液，精密量取阴性对照溶液20μL，进样，观察阴性对照溶液在葛根素峰的保留时间处是否有杂质峰。

2.6 线性关系考察 取浓度为0.020、0.030、0.040、0.050、0.060mg/mL的葛根素对照品溶液，分别进样20μL，按拟定的色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，葛根素进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程。

2.7 精密度试验 取同一供试品溶液，按2.4项下重复进样测定，用测定值的相对标准偏差(RSD)反应测定结果的精密度。

2.8 稳定性试验 将同一供试品溶液于室温下放置，每间隔2h按2.4项下进样，记录葛根素峰面积，考察样品溶液的稳定性，计算RSD。

2.9 重复性试验 取同一批样品制成5份供试品溶液，依次按2.4项下进样测定，用测定值的RSD反应测定结果的重现性。

2.10 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的心舒宁片，称取约0.1 g，精密称取6份，分别精密添加已配制好的葛根素对照品溶液(0.080mg/mL)10mL，按2.2项下的方法制成供试品溶液。按2.4项下方法进行测定，计算回收率，回收率(%)=[(实测葛根素含量-样品原有葛根素含量)/添加葛根素含量]×100%。

2.11 样品含量测定 对本品10批样品中葛根素的含量进行测定。

3 结 果

3.1 线性关系考察 以峰面积积分值为纵坐标，葛根素进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=1 991 495X-7 070R2=0.9999。实验结果表明，葛根素浓度在0.02～0.06mg/mL范围内呈良好的线性关系。见表1。

表1 线性关系考察结果

3.2 阴性对照品溶液的干扰情况 在葛根素峰保留时间处无杂质峰干扰(见图1～3)。

图1 缺葛根的心舒宁片阴性样品色谱图

图2 心舒宁片供试品色谱图

图3 葛根素对照品色谱图

3.3 精密度试验 葛根素RSD=1.9%，表明仪器的精密度良好。见表2。

表2 精密度试验结果

3.4 稳定性试验 葛根素RSD=1.6%，表明供试品溶液至少在8 h内基本稳定。见表3。

表3 稳定性试验结果

3.5 重复性试验 葛根素RSD=0.8%，表明重复性良好。见表4。

表4 重复性试验结果

3.6 回收率试验 葛根素平均回收率=100.30%，RSD=0.47%，表明回收率良好。见表5。

表5 回收率试验结果

3.7 样品含量测定 通过对10批样品含量的测定可知，平均每片含量在1.8 mg以上，考虑到原料药材本身含量的变化及生产中的波动，即暂定本品每片含葛根以葛根素(C20H21O9)不得低于1.0mg。见表6。

表6 样品含量测定结果

4 讨 论

本研究为心舒宁片质量研究的一部分，通过对色谱条件、系统耐用性、阴性干扰情况、线性关系考察、精密度试验、溶液稳定性试验、重复性试验、加样回收试验及心舒宁片样品实际含量测定表明，用高效液相色谱法测定心舒宁片中葛根素的含量方法简便可行，从而为心舒宁片中葛根素的含量控制提供了理论依据和方法基础。

[1] 梁永康，熊龙花.反相高效液相色谱法测定通脉口服液中葛根素的含量[J].江西中医学院学报，2004，16(4):40-41.

(本文编辑：李珊珊)

刘素文(1963—)，女，副主任中药师。研究方向：中药制剂。

R284．1

A

1002-2619(2014)07-1068-03

2013-04-11)