紫冰霜皮肤毒性实验及体外抑菌活性的研究

杨 浩，姚鸿萍，董亚琳，马 瑛*(.西安交通大学医学院第一附属医院药学部，西安 7006；2.陕西省肿瘤医院药剂科， 西安 7006)

紫冰霜是在自制制剂烧伤油的基础上，经过正交实验优选出最佳提取和制备工艺，将剂型改造为水包油(O/W)型中药外用霜剂[1]。动物实验表明，紫冰霜具有治疗烫伤和促进创伤创面愈合的作用[2]，临床用于治疗皮脂性湿疹、局限性硬皮病、剥落性唇炎、老年性皮肤干燥、手足皲裂、Ⅰ度和Ⅱ度烧伤、烫伤、伤口感染和褥疮等，在保护创面、抗感染、止痛、抗渗出、收敛、促进组织修复等方面，临床疗效确切。为评价该药的安全性，我们按照相关技术指导原则[3-5]，研究于其动物皮肤急性毒性、刺激性和致敏性以及体外抑菌作用。

1 仪器与材料

1.1仪器 电子天平(CP313，上海奥豪斯仪器有限公司)；生化培养箱(LRH-150B，广东省医疗器械厂)。

1.2试药 紫冰霜(由紫草、大黄、地榆和冰片等中药提取物制备成的霜剂)及霜剂基质，由西安交通大学第一附属医院药学部提供，批号110702；磺胺嘧啶锌软膏，上海全宇生物科技内乡制药有限公司，批号120303；2，4-二硝基氟苯，由中国医药公司北京分公司提供，临用前用750 mL·L-1乙醇为溶剂，将其配制成10 g·L-1致敏质量浓度和1 g·L-1激发质量浓度。

1.3动物 白色健康家兔，体质量1.8～2.1 kg；白色健康豚鼠，体质量200～300 g；雌雄兼用，均由西安交通大学实验动物中心提供，合格证号分别为09-018和09-017号。本研究实验方案及实验动物的饲养与使用处置，均通过西安交通大学实验动物伦理委员会审批。

2 方法

2.1皮肤急性毒性实验[3-7]取健康家兔24只，用100 g·L-1硫化钠溶液脱去背部脊柱两侧毛，每侧面积约为70 cm2，去毛24 h后，选12只去毛家兔进行完整皮肤的急性毒性实验，其余12只去毛家兔进行破损皮肤的毒性实验。制作破损皮肤时，去毛区用乙醇消毒，用刀片将皮肤划破，均以表皮渗血为度。将以上24只家兔随机分为6组，每组4只：完整皮肤基质组、紫冰霜1 g组、紫冰霜2 g组；破损皮肤基质组、紫冰霜1 g组、紫冰霜2 g组。将药物分别轻轻涂抹在受试家兔脱毛皮肤区，使其与皮肤接触24 h，给药后连续观察7 d，每天观察记录动物的体质量、皮肤、毛发、眼和黏膜的变化及呼吸、中枢神经系统、四肢活动等中毒表现。

2.2皮肤刺激性实验[3-7]取健康家兔16只，用100 g·L-1硫化钠溶液去背部脊椎两侧毛，每侧面积约70 cm2，去毛后24 h，其中8只作完整皮肤实验，取剩余8只去毛区用乙醇消毒，用刀片将脱毛部位皮肤划破，均以表皮渗血为度。将以上16只家兔随机分为4组，每组4只：完整皮肤基质组、紫冰霜组；破损皮肤基质组、紫冰霜组。实验采用以基质为对照的同体左右侧自身对比法。分别将紫冰霜1 g涂于兔背部左侧的完整皮肤和破损皮肤上；右侧皮肤涂基质，每日1次，连续1周。家兔于末次用药后24 h，温水洗除残留药物。去除残留药物后1，24，48和72 h观察给药部位的红斑、水肿等情况，并进行评分已评价刺激强度。

2.3皮肤致敏性实验[3-7]选皮肤无受伤的白色豚鼠24只，用100 g·L-1硫化钠溶液给豚鼠背部脊柱两侧去毛，去毛区范围每侧面积约9 cm2。去毛后24 h，按体质量随机分成3组，每组8只：基质组、紫冰霜组和2，4-二硝基氟苯组。

致敏接触：基质组和紫冰霜组分别在豚鼠左侧脱毛区每只涂抹相应药物0.2 g， 2，4-二硝基氟苯组在豚鼠左侧脱毛区每只涂敷10 g·L-1的2，4-二硝基氟苯0.2 mL。第7 d和第14 d，以同样方法重复1次，于每次药物去除后观察皮肤红斑和水肿情况。

激发接触：于末次给药致敏后14 d，基质组和紫冰霜组按原剂量涂抹于每只豚鼠右侧脱毛区，2，4-二硝基氟苯组在每只豚鼠右侧脱毛区涂敷1 g·L-1的2，4-二硝基氟苯。6 h后用温水拭去药物。即刻观察，然后于24，48和72 h再次观察皮肤致敏反应情况，进行评分、判断与评价。

2.4体外抑菌实验[8-9]将滤纸制成直径6 mm圆形纸片，经干热灭菌后，放入无菌玻璃瓶内备用。分别称取相同量实验药紫冰霜和对照药磺胺嘧啶锌软膏，置于已消毒的小瓷杯中，然后放在水浴锅内加热。分别将纸片浸入融化液中。浸泡2～4 h后平铺在无菌培养皿中，紫外灯下自然风干，制备成含药纸片。用镊子分别镊取含实验药和对照药纸片，贴在已制备好的含有不同细菌的琼脂平皿上，放进37 ℃的培养箱中孵育20 h。平板孵育后取出，测量抑菌圈直径。

药膏纸片扩散法的药敏和抑菌圈大小判断标准：耐药≤8 mm；中敏9～11 mm；敏感≥12 mm。

3 结果

3.1皮肤急性毒性实验结果 结果显示，破损皮肤动物在开始观察的2 d内，刀痕处有红斑和轻度水肿，2 d后，红斑和水肿逐渐消退。其他指标与完整皮肤动物相一致：体质量无明显变化；毛发光滑、有光泽；眼黏膜未见充血、水肿；呼吸平稳；行为未见异常；四肢活动正常；动物无死亡。对照组和给药组各种表现无差异，结果见表1。

表1 紫冰霜对家兔皮肤的急性毒性

3.2皮肤刺激性实验结果 结果发现，家兔首次给药后1 和24 h，完整皮肤和破损皮肤的给药侧和对照侧均未见红斑和水肿。末次给药24 h后去除残留药物，于去除残留药物后1，24，48和72 h观察，结果完整皮肤和破损皮肤的给药侧和基质对照侧均未见红斑和水肿，亦未见出血点、皮肤粗糙和菲薄等情况。给药和观察期间，动物毛发光滑、有泽；眼黏膜无充血、水肿；呼吸平稳；行为未见异常；四肢活动正常。表明紫冰霜及基质对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性。

3.3皮肤致敏性实验结果 结果发现，2，4-二硝基氟苯组8只豚鼠激发后6，24，48和72 h，皮肤致敏红斑和水肿的记分值均显著高于基质对照组，致敏率为100%，为极度致敏性；而紫冰霜组与基质对照组各8只豚鼠激发后6，24，48和72 h的记分值均为0，致敏率为0%，无致敏性，见表2。表明紫冰霜及基质对豚鼠均无皮肤致敏性。

表2 紫冰霜对豚鼠皮肤致敏反应的评分结果

3.4体外抑菌实验结果 磺胺嘧啶锌是一种临床常用的烧伤创面外用药，该药具有较强的抗菌作用及良好的制痂和创面保护作用。本实验以该药为对照药，分别观察紫冰霜和磺胺嘧啶锌软膏对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、白色假丝酵母菌5种常见菌的抑菌效果，实验结果见表3。

表3 紫冰霜体外抑菌实验结果

4 讨论

紫冰霜采用O/W型基质，可吸收创面渗出物和分泌物，药物释放和穿透快，对皮肤正常功能影响小。组方中紫草主治疮疡、湿疹、水火烫伤；大黄用于痈肿疔疮，火毒疮疡；地榆解毒敛疮，痈肿疮毒；冰片清热止痛，具有抑菌防腐[10]、消肿抗炎、镇痛等作用[11]，并且能促进药物的透皮吸收[12]。

本实验结果表明，紫冰霜对家兔完整皮肤和破损皮肤无急性毒性和刺激性，对豚鼠完整皮肤无致敏作用。同时，体外实验表明，紫冰霜对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌具有一定的抑菌作用。

紫冰霜在治疗皮脂性湿疹、局限性硬皮病、剥落性唇炎、老年性皮肤干燥、手足皲裂、Ⅰ度和Ⅱ度烧伤、烫伤、伤口感染和褥疮等多种外科疾病及皮肤病方面安全可靠。本制剂为霜剂，易于涂布，易洗除，不污染衣服，携带方便，是一种安全性较好的外用药，值得临床推广应用。

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