儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌耐药分析

申美静 (贵州省遵义市第一人民医院检验科，贵州 遵义 563002)

呼吸道感染是我国儿童最常见的感染性疾病，而流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)是引起儿童呼吸道感染的主要致病菌，常可引起肺炎、支气管炎、咽喉炎，它还可侵入血液引起儿童败血症、脑膜炎等严重疾病［1-2］。由于流感嗜血杆菌分离培养的条件比较高，临床医生常常采用经验用药进行治疗，忽视了培养和药物敏感试验的重要性，造成了一些抗菌素使用不合理［3-4］。

1 资料与方法

1.1 研究对象:2013年2月～2013年7月在遵义市第一人民医院儿科因呼吸道感染的住院患者。

1.2 标本采集:入院当天采用刺激咳痰或诱导咳痰方法收集的痰液或咽拭子标本于培养杯中，立即送检。

1.3 主要试剂和仪器:CM0331哥伦比亚琼脂粉(OXOID公司);新鲜无菌脱纤维绵羊血(杭州新锐公司);流感嗜血鉴定卡片(生物梅里埃公司);流感嗜血杆菌添加剂(OXOID公司);CM0337M-H琼脂粉(OXOID公司);氨苄西林、头孢呋辛、头孢曲松、左氧氟沙星、复方新诺明、氨苄西林/克拉维酸、阿奇霉素药物敏感纸片(OXOID公司);全自动细菌鉴定及药敏分析仪(VITEK2Compact60);艾本德二氧化碳培养箱。

1.4 菌株培养及鉴定:将痰液标本接种于血平皿和含万古霉素巧克力平皿上，置于5% ～10%CO2的35℃孵育箱中18～24 h后观察结果。挑取可疑菌株(在含万古霉素巧克力平皿上呈无色透明、湿润并有明显的霉气味，在血平皿上不生长［5］)进行革兰染色和卫星试验，镜下呈革兰阴性多形性，卫星试验为阳性为流感嗜血菌株。最后采用梅里埃的全自动细菌鉴定及药敏分析仪进行确证为流感嗜杆菌。

1.5 药物敏感试验:采用 K-B纸片扩散法，用VITEK2Compact配套比浊仪调节菌悬液浓度约0.5MCF，涂布于HTM培养基上，用镊子将OXOID公司7种药敏纸片(氨苄西林、头孢呋辛、头孢曲松、左氧氟沙星、复方新诺明、氨苄西林/克拉维酸、阿奇霉素)贴在涂布菌液的HTM培养基上，置于5% ～10%CO2的35℃孵育箱中18～24 h后观察结果。药物敏感的判断标准采用CLSIM100-S22［6］。

1.6 室内质量控制:每周用标准菌株ATCC49247进行室内质量控制，判断标准采用CLSIM100-S22。

2 结果

2.1 对892例儿童呼吸道感染患者进行培养，培养出流感嗜血杆菌93株，培养的阳性率为10.4%。

2.2 对93株流感嗜血杆菌菌株进行药物敏感试验，表明对对氨苄西林的耐药率为44.1%;对复方新诺明的耐药率为64.5%;头孢呋辛的耐药率为10.7%;对左氧氟沙星的耐药率为1%;头孢曲松的耐药率为16.1%;阿奇霉素的耐药率为6.5%;氨苄西林/克拉维酸的耐药率为12.9%。

3 讨论

流感嗜血杆菌是一种只侵犯人类的革兰阴性杆菌，3岁以内的儿童因抵抗力较弱，流感嗜血杆菌是儿童呼吸道感染的主要致病菌［7］。有研究表明感染流感嗜血杆菌的儿童占全部感染该菌人群的20%［8］。随着抗菌素的不断研发和使用及病原微生物不断发生变异，使得流感嗜血杆菌耐药菌株不断增加，耐药机制也多样化及多种耐药菌株出现［9］。本实验得出贵州省遵义地区3岁以内儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌的耐药情况，对氨苄西林、复方新诺明的耐药率较高;对左氧氟沙星、头孢曲松、头孢呋辛、阿奇霉素、氨苄西林/克拉维酸的耐药率较低。儿童因为抗菌素使用限制在经验治疗时应选择耐药率较低的β类抗菌素，临床治疗时可根据各地不同情况和药物敏感结果使用抗菌素，避免抗菌素的滥用。

［1］ 王运中，季 伟，陶云珍，等.儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌的生物学分型及耐药性［J］.江苏医药，2012，38(7):777.

［2］ Murphy TF，Faden H，Bakaletz LO，et al.NontypeableHae-mophilusinfluenzae as a pathogen in children［J］.The Pediatric infectious disease journal，2009，28(1):43.

［3］ 袁瑾懿，杨 帆，徐晓刚等.临床分离流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的耐药性研究［J］.中华传染病杂志，2009，27(5):262.

［4］ 李亦东.左氧氟沙星序贯治疗社区获得性肺炎［J］.吉林医学，2008，29(11):894.

［5］ 叶应妩，王 三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京:东南大学出版社，2006:235.

［6］ Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing.

［7］ Shen，XZ，Lu，Q，Deng，L et al.Resistance of Haemophilusinfluenzae isolates in children under 5 years old with acute respiratory infections in China between 2000 and 2002［J］.The Journal of International Medical Research，2007，35(4):554.

［8］ Zhanel G G，Palatnick L，Nichol K A，et al.Antimicrobial resistance in Haemophilusinfluenzae and Moraxella catarrhalis respiratory tract isolates:results of the Canadian Respiratory Organism Susceptibility Study，1997 to 2002［J］.Antimicrobial agents and chemotherapy，2003，47(6):1875.

［9］ 张 泓，吴文娟，李万华.流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因研究［J］.中国感染与化疗杂志，2006，6(12):377.