枳椇总黄酮提取工艺的正交设计研究

赵 婷，高秀璐，赵鸿昆，梁承武*

(1.吉林医药学院，吉林 吉林 132013；2.延边大学医学部，吉林 延吉 133000；3.吉化集团公司总医院，吉林 吉林 132021)

·论 著·

枳椇总黄酮提取工艺的正交设计研究

赵 婷1,2，高秀璐1，赵鸿昆3，梁承武1*

(1.吉林医药学院，吉林 吉林 132013；2.延边大学医学部，吉林 延吉 133000；3.吉化集团公司总医院，吉林 吉林 132021)

目的 优选枳椇中总黄酮的最佳提取工艺。 方法 采用紫外分光光度法测定枳椇总黄酮的含量，以乙醇浓度，提取时间，料水比例为考察因素，以总黄酮提取率为考察指标，采用L16(34) 正交设计优选最佳提取工艺条件。 结果 最佳提取工艺为12倍量60%乙醇回流提取2 h。结论 本法可为中药枳椇的开发利用提供参考。

枳椇；总黄酮；紫外分光光度法；正交设计

枳椇(Hovenia acerba)，为鼠李科枳椇属落叶乔木枳椇的果实，俗称拐枣，含糖量较高，口感柔和，颇受人们青睐。枳椇在我国分布广泛，资源丰富。黄河、长江流域南至广东，西至云贵川、西藏及日本都有分布。近年来，关于枳椇解酒的研究逐渐增多，结果表明枳椇黄酮类成分具有保肝、解酒的功效，实验表明枳椇子对肝细胞有促进生长的作用[1]，并且对实验性肝损伤具有保护作用，能够减少肝纤维化[2-3]，因此为探索枳椇总黄酮提取条件，以总黄酮为检测指标，紫外分光光度法为检测手段，利用正交实验设计，对枳椇提取工艺进行了研究，为进一步的质量控制以及药理活性等研究工作提供数据资料。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

枳椇购于山西， 60 ℃干燥备用。槲皮素标准品为国药集团化学试剂有限公司生产，无水乙醇(分析纯)，蒸馏水。日本岛津UV-2501(PC)S紫外可见分光光度计，双圈牌JH2102电子天平。

1.2 正交实验设计

采用乙醇为提取溶媒，以乙醇浓度、提取时间、提取次数为3个考察因素，分别设立4个水平，以总黄酮的提取率为实验指标，选取L16(34)正交表进行实验，如表1。

1.3 样品提取

取称30 g干燥枳椇16份，按正交试验表所列条件，采用不同浓度乙醇回流提取，合并提取液，趁热过滤，浓缩，石油醚脱脂，萃取两次后置于100 mL溶量瓶中，加水定容，摇匀即得供试品溶液。

表 1 正交实验考察因素

1.4 对照品溶液配制

调节真空干燥箱温度于110 ℃，精确称取一定槲皮素对照品，干燥至恒重，用分析天平精确称取30 mg，用体积分数为80%的乙醇溶液溶解并定容于100 mL容量瓶中，配制成0.3 mg/mL的实验对照品标准溶液[4]。

1.5 标准曲线的制备

分别精密量取上述已配制的对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，5.0 mL置于10 mL容量瓶内，用80%乙醇溶解，混匀并定容。放置20 min，在275 nm波长下，用对应试剂作空白，分别测定吸光度，以吸光度(A)为纵坐标，槲皮素浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程A=3.440 9C-0.001 2，r=0.999 9，线性范围在0.302 8～0.514 0 mg/mL，线性良好。

1.6 精密度实验

精密量取槲皮素对照品溶液2.0 mL，定容于10 mL容量瓶中，在275 nm波长处连续测定5次，测定吸光度，测得精密度RSD=0.35%。

1.7 稳定性实验

取同一浓度的供试品溶液，每隔4 h测定一次，结果6次测定的吸收值基本不变，RSD=0.12%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

1.8 重复性实验

取同批枳椇药材按照上述实验方法处理，在所得最优提取条件下提取，重复操作5组，测定吸光度，所得RSD=1.36%，说明本法重复性良好。

2 结 果

精密吸取各供试品液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按照标准曲线方法进行操作，在275 nm波长处测定吸收度A，由回归方程计算样品中总黄酮的含量。正交设计实验结果及总黄酮提取量见表2，方差分析结果见表3。从表2结果来看，最佳提取方式为A3B4C4，即12倍量60%乙醇回流提取2 h。表3表明，乙醇提取时间对其有显著性影响。通过正交实验结果直观分析和方差分析得出枳椇总黄酮提取的最佳工艺条件为：12倍量60%乙醇回流提取2 h。

表 2 乙醇提取正交实验结果

表 3 方差分析结果

3 讨 论

枳椇自古以来就是一种药食同源的传统植物，具有化解酒毒，保肝护肝的功效，对急性酒精中毒有明显的治疗作用，并对各种原因所导致的肝损伤有明确的保护作用。其中，枳椇所含有的黄酮类成分是它的主要药理活性成分，为考察枳椇总黄酮的最佳提取工艺，本研究采用正交实验等方法对其进行研究，考察结果：最佳提取工艺为12倍量60%乙醇回流提取2 h。本工艺重复性良好，在24 h内基本稳定。

[1] 嵇 扬，陆 红.枳椇子水提取液对原代培养大鼠肝细胞促生长作用的实验研究[J].中国中医药科技，2001，8(3)：162-163.

[2] 叶丽萍，张 洪，刘秀琳.枳椇子提取物对肝纤维化保护作用的形态学研究[J].武汉大学学报:医学版，2005，26(3)：293-296.

[3] 张 洪，宋 娟，詹新安，等.枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响[J].中国中药杂志,2007,32(18)：1917-1920.

[4] 陈泉生.枳椇皂甙的药理性质[J].国外医学:植物药分册，1980，1(1)：45.

The orthogonal experimental design on extraction of total flavanoid in Turnjujube

ZHAO Ting1,2,GAO Xiu-lu1,ZHAO Hong-kun3,LIANG Cheng-wu1*

(1.Jilin Medical College,Jilin City，Jilin Province,132013;2.Yanbian University Health Science Center,Yanji，Jilin Province,133000;3.The General Hospital of CNPC in Jilin,Jilin City，Jilin Province,132021，China)

Objective To optimize the extracting method of total flavone from Turnjujube. Methods UV method was applied to determine the content of total flavone from Turnjujube.We took concentration of ethanol,extraction time and material-liqud ratio as variables,considered the extraction rate of total flavone as index,and used L16(34) orthogonal test to select the optimal extraction technology. Results The optimal condition:60% ethanol;2 hours;12 times solvent. Conclusion This result provide a suitable method for research.

Turnjujube;total flavone;UV;orthogonal design

1673-2995(2014)01-0021-03

赵 婷(1988-)，女(汉族)，硕士.

梁承武(1968-)，男(朝鲜族)，教授，博士.

R285.5

A

2013-10-11)