不同杀菌剂对苹果炭疽叶枯病的防治效果

王 冰, 王彩霞, 史祥鹏, 张振芳, 李保华

(青岛农业大学农学与植物保护学院, 山东省植物病虫害综合防控重点实验室，青岛 266109)

不同杀菌剂对苹果炭疽叶枯病的防治效果

王 冰, 王彩霞, 史祥鹏, 张振芳, 李保华*

(青岛农业大学农学与植物保护学院, 山东省植物病虫害综合防控重点实验室，青岛 266109)

为了筛选出防治苹果炭疽叶枯病的有效杀菌剂，采用室外先接种后施药和先施药后接种的方法，测试了6种药剂的内吸治疗效果和8种药剂的保护效果。在病菌侵染后的72 h内使用吡唑醚菌酯，或在病菌侵染后的24 h内使用咪鲜胺对病斑的显症有一定的治疗效果。波尔多液在喷施后18 d，对炭疽叶枯病菌侵染的抑制效果仍达50%，肟菌·戊唑醇、烯酰·吡唑酯和唑醚·代森联3种药剂在施药后的第11天，其保护效果与对照仍有显著差异，持效期达11 d，代森锰锌、甲基硫菌灵、氢氧化铜和咪鲜胺4种保护剂的持效期只能维持6 d。炭疽叶枯病的防治应以波尔多液为主，并与吡唑醚菌酯等有机杀菌剂交替使用，有机铜制剂不能替代波尔多液。

苹果炭疽叶枯病； 保护作用； 内吸治疗； 持效期； 施药适期

苹果炭疽叶枯病(Glomerellaleaf spot, GLS)是由炭疽病菌(Glomerellacingulata)引起的一种叶部病害[1-2]，主要危害‘嘎啦’、‘金冠’、‘秦冠’和‘乔纳金’等品种[5]，造成苹果树大量落叶和果实严重腐烂，树势严重削弱，导致次年绝产[1,3-4]。苹果炭疽叶枯病最早于1988年在巴西首次报道，1999年在美国发现[1-2]，2011年在我国的江苏丰县、安徽砀山等地首次发现[5]。目前山东、陕西、辽宁、河南、河北等苹果主产省已普遍发生。苹果炭疽叶枯病在我国是一种新发生的病害，生产上尚无有效的防治措施。其病菌侵染量大，潜育期短，产生的子囊孢子能随气流传播，防治非常困难。根据对该病已有的知识，苹果炭疽叶枯病仍需依靠以化学药剂防治为主的控制策略。炭疽叶枯病菌主要在降雨期间侵染，降雨前喷施保护性杀菌剂，或者在病菌侵染后喷施内吸性治疗剂，都是控制病菌侵染与危害的可能途径。然而，在生产中，果农曾尝试过多种杀菌剂，都未能有效控制炭疽叶枯病的发生与危害。目前，尚未见关于评价各种杀菌剂对炭疽叶枯病防治效果的报道。本研究通过在‘嘎啦’苹果活体叶片上先接种后施药和先施药后接种2种方式，评价了6种杀菌剂对苹果炭疽叶枯病内吸治疗和8种药剂的保护效果，旨在筛选有效的药剂，为苹果炭疽叶枯病的化学防治提供可靠依据。

1 材料与方法

1.1 供试病菌及药剂

2011年9月中旬，自山东省莱西市南墅镇上庄村采集‘嘎啦’苹果炭疽叶枯病病叶，室内25 ℃保湿培养3 d，待病叶上产生分生孢子，挑取单孢，获得纯培养菌株，在5 ℃冰箱中保存。接种前，将保存菌种转接到PDA中，25 ℃活化，待菌落长至培养皿2/3时，用接种环刮除气生菌丝，25 ℃继续培养2～3 d。待培养菌落上长出橘黄色分生孢子角，挑取分生孢子角，放入适量纯净水，混匀，用血球计数板将孢子悬浮液浓度调至104个/mL，加入终浓度为0.1%的吐温-20，备用。孢子悬浮液现配现用，放置时间不超过1 h。

根据已有经验和报道，选择对炭疽病菌可能有效，且生产上常见的杀菌剂12种，杀菌剂的种类和生产厂家见表1，试验用量为厂家推荐用量。

表1 苹果炭疽叶枯病药效试验所测试杀菌剂种类、剂型、有效成分、使用剂量及生产厂家Table 1 Tested fungicides, formulation, effective components, dosage and manufacture on controlling of Glomerella leaf spots

1.2 内吸治疗效果的测定

采用先接种后喷药的方法，以清水为对照，测试了咪鲜胺等6种杀菌剂对苹果炭疽叶枯病的内吸治疗效果[6]。

8月下旬，在青岛农业大学试验园内选择7年生的盆栽‘嘎啦’苹果树6株，每株树上标记7个长梢，共标记42个梢，每个梢上标记3个健康无病，且发育成熟的叶片，用于接种。病菌接种在下午17：00左右进行，接种时用手持喷雾器将孢子悬浮液均匀地喷洒到处理叶片上，直到孢子液流下为止。接种后用塑料袋将接种枝条全部密封保湿，12 h后摘袋。

分别于病菌接种后24 h和72 h，进行药剂处理。喷药时用手持喷雾器将药液均匀地喷洒到接种叶片的正反面，直至叶片上有药液流下为止。每种药剂每次分别在不同的树上处理3个接种梢，2次共在6株树处理6个梢。

接种后第7天，当叶片上的病斑数不再增加时，检查记录每个接种叶片上的病斑数，在每个接种叶片上选取10个最大的病斑，测量其纵横径。

1.3 保护效果及持效期测定

8月下旬，在青岛农业大学胶州科技示范园，选取18株4年生长势良好、枝条繁多、叶片健康的‘嘎啦’苹果树，试验用树在进行药效试验前5个月内没有使用过任何杀菌剂。试验时，用背负式喷雾器将药液均匀地喷洒到整树上，直到所有枝条上都有药液流下为止。每种药剂处理2株树，以喷洒清水作为对照。

在喷药后的当天、第3天、第6天、第11天和第18天，分别从每种药剂处理的树上剪取3个枝条，每根枝条保留3个健康无病、且发育成熟的叶片用于接种。将处理枝条插于组培瓶中水培，用手持喷雾器将孢子悬浮液均匀地喷洒到接种叶片上，直到有水滴流下为止。将接种枝条套塑料袋，转入25 ℃光照培养箱中保湿培养，12 h后解袋。接种病菌5 d后，当对照组叶片上的病斑数不再增加时，检查记录接种每个叶片上的病斑数。

1.4 数据处理

以每个叶片上的病斑数和病斑纵横径为基本数据，采用通用线性模型(GLM)进行方差分析，假设每个叶片上的病斑数和病斑的纵横径呈正态分布，在GLM模型中选用Gaussian分布函数。用multcomp模块中的glht函数进行多重比较。全部的数据分析用R统计软件完成。在方差分析之后，用每个叶上平均病斑数或平均病斑直径计算药剂的防治效果：

药剂防效(%)=[对照组平均每叶病斑数(平均病斑直径)-处理组平均每叶病斑数(或平均病斑直径)]/对照组平均每叶病斑数(或平均病斑直径)×100。

2 结果与分析

2.1 内吸治疗效果

接种苹果炭疽叶枯病菌的‘嘎啦’叶片，于接种后48 h开始显症，初期症状为直径1～4 mm近圆形的黑色病斑，病斑边缘模糊。随后病斑逐渐扩大、枯死，形成黑色枯死斑。接种5 d后不再形成新的病斑。接种后第7天调查，所有接种叶片上的平均病斑为56.69个，单个叶片上病斑数的最大值为150个。每个叶片上10个最大病斑的纵径和横径的平均值为1.02 cm，病斑最大直径为2.2 cm。

病菌接种后第24小时和第72小时施药试验结果(表2)表明，接种后第7天,在所测试的6种内吸治疗剂中，吡唑醚菌酯和咪鲜胺两种药剂处理叶片上的病斑数与对照有显著差异(P<0.05)，表明2种药剂能有效抑制侵染病菌形成病斑，2次施药的平均抑制效果分别为67.78%和46.42%。其中，咪鲜胺在病菌接种24 h后施药，对病斑形成的抑制效果为61.65%，在接种后72 h施药，抑制效果降为31.19%。氟硅唑、甲基硫菌灵、戊唑醇和烯酰吗啉4种药剂处理叶片上的病斑数与对照都无显著差异, 表明这4种药剂对侵入叶片内的病原菌都无内吸治疗效果。

在所测试的6种内吸治疗剂中，咪鲜胺处理叶片上病斑直径与对照存在显著差异(P<0.05)，表明咪鲜胺能有效抑制病菌在叶组织内生长扩展，2次施药的平均抑制效果为51.50%(表2)。烯酰吗啉和吡唑醚菌酯在病菌接种24 h后处理叶片上病斑的直径与对照存在显著的差异(P<0.05)，表明2种药剂在病菌侵染后24 h内施用对病斑扩展有抑制效果，其效果分别为58.86%和47.78%。在病菌接种72 h后，2种药剂都失去对病斑扩展的抑制效果。氟硅唑、甲基硫菌灵和戊唑醇3种药剂处理叶片上的病斑直径与对照都无显著差异，表明4种药剂对病斑的扩展无抑制效果。

表2 6种杀菌剂在病菌接种后24 h和72 h使用对炭疽叶枯病斑形成和扩展的抑制效果1)Table 2 Effect of 6 systemic fungicides on inhibiting GLS lesion development and expansionwhen applied at 24 hr and 72 hr after inoculation

1) 表中同列不同字母代表在0.05水平上差异显著。
Different letters in the same column indicate significant difference at 0.05 levels.

2.2 保护效果与持效期

所测试的8种杀菌剂，在施药当天保护叶片不受叶枯炭疽病菌侵染的效果都能达到97%以上(表3)；施药后第3天，除甲基硫菌灵和咪鲜胺外，其他6种药剂的保护效果都保持在80%以上；施药后第6天，8种药剂的保护效果都维持在57%～77%之间；施药后第11天，除波尔多液、烯酰·吡唑酯、肟菌·戊唑醇3种药剂的保护效果还保持在50%以上外，其他5种药剂的保护效果都降至45%以下。其中代森锰锌和氢氧化铜处理叶片上的病斑数已与对照无显著差异，表明2种药剂已完全失效。施药后第18天，只有喷施波尔多液处理叶片上的病斑数与对照叶片上存在显著差异(P<0.05)，喷施其他药剂叶片上的病斑数与对照叶片无显著差异，说明在施药后的第18天，只有波尔多液还有一定的保护效果，其他7种药剂都已完全失去保护效果。

表3 8种杀菌剂在施药后不同时间保护叶片不受炭疽叶枯菌侵染的效果1)Table 3 Protective effect of eight fungicides on controlling GLS at different time after application

1) 表中同列不同字母代表在0.05水平上差异显著。
Different letters in the same column indicate significant difference at the 0.05 level.

3 讨论

所测试的保护性杀菌剂只有在施药当天和第3天能有效地保护叶片不受炭疽叶枯病菌的侵染，施药后第6天药剂的保护效果明显下降，施药第11天只有3种药剂的保护效果还在50%以上，施药18 d后只有波尔多液还保持一定的防治效果。本次试验，在施药后没有遇到有效的降雨，药剂持效期应该为无雨条件下的持效期和防治效果。若遇降雨，药剂的持效期会更短，防效会更低。

炭疽叶枯病菌孢子的传播和侵染都离不开雨水，降雨是病原菌侵染的必要条件，而且病菌孢子以直接侵染为主，侵染量大。根据所测试药剂的持效期，防治炭疽叶枯病最有效的策略就是根据天气预报，在降雨前及时喷药保护叶片不受病原菌的侵染。

所测试的6种内吸杀菌剂中，只有吡唑醚菌酯和咪鲜胺在病菌侵染早期有一定的防治效果，其24 h和72 h的最高防治效果分别为68.47%和67.09%。炭疽叶枯病的潜育期很短，在适宜条件下接种48 h后就能发病，绝大多数病斑在第4天显症，接种病菌后第5天病斑数量不再增加。病原菌侵染后，既没有用药的时间，也没有理想的防治药剂。因此，炭疽叶枯病不适合采用在病原菌侵染后内吸治疗的防治措施。

由于内吸治疗无效，对炭疽叶枯病的防治只能采用雨前喷药保护或定期喷药保护的措施。雨前喷药需要准确的气象预报，在实际生产中难以实施，因此，定期喷药保护就成为防治炭疽叶枯病易于实施的措施。苹果炭疽叶枯病菌主要在小的枝条上越冬，次年5月中下旬(落花后20～40 d内)遇雨后开始初侵染，直到9月份仍有大量病菌侵染。为了减少用药量，提高病害的防治效果，需要选用持效期长的药剂。在所有的供试药剂中，波尔多液的持效期最长，其次是烯酰·吡唑酯和肟菌·戊唑醇。在实际的病害防治中，从苹果落花后的第20天开始用药保护，直到9月中旬气温明显下降后结束。防治药剂以波尔多液为主，采用波尔多液与吡唑醚菌酯为主要有效成分的药剂，或与肟菌·戊唑醇等药剂交替使用策略。

吡唑醚菌酯对炭疽叶枯病既具有良好的保护效果，也具有一定的内吸治疗效果，是防治苹果炭疽叶枯病较为理想的药剂。目前，还不了解该种药剂的作用机制和病原菌产生抗药性的速度，在实际生产中，应尽量避免频繁使用，以保护该种药剂的使用期。

对苹果炭疽叶枯病，包括其他果树炭疽病，药剂的防治都达不到理想的效果，在实际生产中还需深入研究其发生与流行规律，探讨其他的防治策略，研制开发更有效的防治药剂。

4 结论

在测试的6种内吸治疗剂中，吡唑醚菌酯在病菌侵染后的72 h内使用，对病斑的显症有一定内吸治疗效果，内吸治疗效果为67.09%～68.47%。咪鲜胺在病菌侵染后的24 h内使用也有一定的内吸治疗效果，防效为61.65%，但在病菌侵染后72 h使用，内吸治疗效果降为31.19%，烯酰吗啉在病菌侵染后的24 h内使用对病斑的扩展有一定的抑制效果，效果为58.86%，甲硫菌灵、氟硅唑和戊唑醇对苹果炭疽叶枯病无内吸治疗效果。

所测试8种药剂中，在施药后的6 d内都有一定的保护效果，在施药第11天，代森锰锌和氢氧化铜完全失效，在施药后的第18天，只有波尔多液有效，其他7种药剂完全失效。所测试的8种药剂中，波尔多液持效期最长，对炭疽叶枯病的防治效果最好；其次是烯酰·吡唑酯、肟菌·戊唑醇和唑醚·代森联；代森锰锌、甲基硫菌灵、氢氧化铜和咪鲜胺4种药剂的残效期短，保护效果很差。

在实际的病害防治中建议以波尔多液为主，并与以吡唑醚菌酯为主要有效成分的药剂或肟菌·戊唑醇等有机杀菌剂交替使用，此外，波尔多液不能用有机铜制剂替代。

[1]Leite Junior R P, Tsuneta M, Kishino A Y. Ocorrencia de mancha foliar deGlomerellaem macieira no estado do Parana[M]. Informe da Pesquisa-Fundacao Instituto Agronomico do Parana, 1988.

[2]González E, Sutton T B.First report ofGlomerellaleaf spot(Glomerellacingulata) of apple in the United States[J]. Plant Disease, 1999, 83(11):1074.

[3]Cimanowski J, Bielenin A, Ciecierski W. Effect of autumn urea application on ascospore production ofVenturiainaequalisand on control of apple scab [J]. IOBC-WPRS Bulletin, 1997, 20:64-68.

[4]Walgenbach J, Gorsuch C, Unrath D, et al. Integrated orchard management guide for commercial apples in the Southeast[R]. North Carolina Cooperative Extension Service, 2008.

[5]Wang C X, Zhang Z F, Li B H, et al. First report ofGlomerellaleaf spot of apple caused byGlomerellacingulatain China[J]. Plant Disease, 2012, 96(6):912-913.

[6]董向丽，李海燕，孙丽娟，等.苹果锈病防治药剂筛选及施药适期研究[J]. 植物保护，2013, 39(2):174-179.

ControleffectsofseveralfungicidesonGlomerellaleafspotcausedbyGlomerellacingulataonapple

Wang Bing, Wang Caixia, Shi Xiangpeng, Zhang Zhenfang, Li Baohua

(CollegeofCropProtectionandAgronomy,QingdaoAgriculturalUniversity;KeyLabofIntegratedCropPestManagementofShandongProvince;Qingdao266109,China)

In order to screen effective fungicides to controlGlomerellaleaf spot caused byG.cingulata, systematic effects of 6 fungicides and protective effects of 8 fungicides were tested by applying the fungicides after and before inoculation. Pyraclostrobin and prochloraz could effectively inhibit infected pathogen to develop to disease lesions when applied within 72 hr and 24 hr after conidial inoculation. The 8 protective fungicides were all revealed effective protection effects within 6 days after application. Bordeaux mixture was the most effective protection fungicide, the protective effect lasted 18 days, and could be used as the major fungicide in the control ofGlomerellaleaf spot.

Glomerellaleaf spot; protective effect; systematic effect; effective duration； appropriate spraying time

2013-12-16

：2014-04-08

国家现代农业产业技术体系(CARS -28)；山东省泰山学者建设工程

S 482.2

：BDOI：10.3969/j.issn.0529-1542.2014.06.034

* 通信作者 E-mail:baohuali@qau.edu.cn