儿茶中儿茶素对肉鸭血清抗氧化指标影响的试验研究
2014-08-10王文彪和翀翼肖培芳王艳艳张鹏宇
王文彪,和翀翼,王 爽,于 娜,肖培芳,王艳艳,张鹏宇
(1.天津艾森生物工程有限公司,天津静海县天宇科技园5号301609;2.黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161003)
儿茶(Catechu)为传统中药材,中国兽药典(2010年版二部)[1]收载的儿茶为豆科植物儿茶的去皮枝、干的干燥煎膏,冬季采收枝、干,除去外皮,砍成大块,加水煎煮,浓缩,干燥制成。具收涩止血、生肌敛疮之功效,主治溃疡不收、湿疹、口疮、跌打损伤、外伤出血,其主要成分为儿茶素及表儿茶素,总量不得少于20.1%。
大量试验表明[2~4],儿茶素具有明显的清除体内自由基,阻断N-亚硝基化合物形成、抑制脂氧化酶活性和脂质过氧化物作用,并具防突变,防癌等多种药理作用。本试验从儿茶中提取儿茶素,研究了日粮添加儿茶素对樱桃谷鸭血清抗氧化指标的影响,旨在为临床安全使用儿茶素奠定理论依据及试验基础。
1 材料与方法
1.1 试验药品与试剂 儿茶购于天津市老百姓大药房,乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺等试剂购于天津市双庆化工,儿茶素对照品及表儿茶素素对照品购于天津一方科技有限公司,谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛试剂盒购自南京建成生物工程研究所有限公司。
1.2 儿茶素的制备 儿茶经醇提、减压浓缩制成儿茶素粗品,硅胶柱层析分离、洗脱后得儿茶素单体,测定儿茶素含量后备用。
1.3 试验分组及试验方案 选取180只1日龄樱桃谷肉仔鸭,随机分为6组,每组设三个重复,每个重复10只,前14日为预饲期,正式实验从第14日龄开始进行,具体试验分组及试验方案见表1。
表1 试验分组及试验方案
第42日随机抽取每个重复组肉鸭各2只,清晨空腹翼下静脉采血5ml,编号,倾斜,静置30min后,以3000r/min离心10min制成血清,在-20℃冰箱保存备用,进行血清抗氧化指标检测。
1.4 抗氧化指标测定 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)按试剂盒方法测定。
1.5 数据分析 应用SPSS19.0进行数据统计分析。
2 试验结果
儿茶素对肉鸭血清抗氧化指标影响试验结果见表2,从表2可以看出:与试验Ⅰ组(对照组)相比,各试验组能明显提高血清GSH-PX活力及SOD活力,降低血清CAT活力及MDA含量。
试验Ⅱ组血清GSH-PX活力与其他试验组差异显著,其他各试验组组间差异不显著;试验Ⅱ组与试验Ⅵ组血清SOD活力差异不显著,试验Ⅲ组、试验Ⅳ组与其他各试验组差异显著,试验Ⅲ组与试验Ⅳ组差异不显著,试验Ⅴ组与试验Ⅵ组差异不显著;试验Ⅲ组、试验Ⅳ组血清CAT活力与其他各试验组差异显著,试验Ⅲ组与试验Ⅳ组差异不显著,试验Ⅱ组与试验Ⅴ组差异不显著,其他各试验组差异显著;试验Ⅲ组、试验Ⅳ组血清MDA含量与其他各组差异显著,试验Ⅲ组与试验Ⅳ组差异不显著,试验Ⅱ组、试验Ⅴ组与试验Ⅵ组差异不显著。
表2 儿茶素对肉鸭血清抗氧化指标影响试验结果(n=6) (单位: U/m l)
综合以上结果表明:试验Ⅲ组、试验Ⅳ组与其他各试验组相比,能明显提高血清GSH-PX活力及SOD活力及降低血清CAT活力及MDA含量,优于其他各试验组,且试验Ⅲ组、试验Ⅳ组组间差异不显著。
3 分析与讨论
GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸,其活力大小可以反映机体硒水平。硒是GSH-PX酶系的组成成分,它能催化GSH变为GSSG,使脂质中有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物,从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。本试验中各试验组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)显著性升高,表明儿茶素能够提高动物机体的抗氧化能力,且试验Ⅲ组与试验Ⅳ组优于其他各试验组。
超氧化物歧化酶(SOD)[5]是一类广泛分布于组织细胞内的金属酶,用于催化超氧阴离子自由基(O2-)发生歧化反应,它对平衡机体氧化与抗氧化系统、免除自由基损伤起着至关重要的作用,SOD具有特殊的生理活性,可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害,并及时修复受损细胞。机体抗氧化能力的强弱表明了机体的健康状态,抗氧化能力越强,机体越健康。众多试验表明,诸如黄芪等中草药中的多糖、黄酮和皂苷等活性物质能通过直接、协同维生素C两条途径发挥抗氧化作用,清除体内自由基,从而提高机体的抗氧化能力[6]。本试验中各试验组与试验Ⅰ组(对照组)差异均显著,表明添加各抗氧化剂可明显提高肉鸭血清中SOD的含量,且试验Ⅲ组与试验Ⅳ组优于其他各试验组。
过氧化氢(CAT)是一种代谢过程中产生的废物,它能够对机体造成损害。为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质。而过氧化氢酶就是常常被细胞用来催化过氧化氢分解的工具。在机体的抗氧化系统内可能存在着某种动态平衡机制,即作为抗氧化系统的SOD、GSH-PX和CAT在某种状况下并非同时增加,而是一种机制激活时,另一种可能处于被抑制状态[7]。在本试验中,各试验组与试验Ⅰ组(对照组)相比降低了血清中CAT活性,此时CAT活性的降低是有可能的,是符合动物机体生理规律的。
丙二醛(MDA)中的醛基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸,引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物。MDA水平的高低还间接地反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度。本试验中各试验组与试验Ⅰ组(对照组)差异均显著,表明添加各抗氧化剂可明显降低肉鸭血清中MDA的含量,且试验Ⅲ组与试验Ⅳ组优于其他各试验组。
综合以上试验结果表明:试验Ⅲ组、试验Ⅳ组与其他各试验组相比,能明显提高血清GSH-PX活力、SOD活力及降低血清CAT活力、MDA含量,优于其他各试验组,试验Ⅲ组与试验Ⅳ组组间差异不显著,表明中高剂量组均能提高肉鸭血清抗氧化指标,最佳添加量为试验Ⅲ组(基础日粮+800mg/kg儿茶素添加组)。
[1]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典[M].2010年版二部.北京:中国农业出版社,2011,13~14.
[2]李大祥,宛晓春,杨昌军等.茶儿茶素氧化机理[J].天然产物研究与开发,2006,18:171~181.
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