黄连炉甘石洗剂盐酸小檗碱含量测定的研究

朱锐金 陈小锐 潘玮玮

黄连炉甘石洗剂盐酸小檗碱含量测定的研究

朱锐金 陈小锐 潘玮玮

目的 建立黄连炉甘石洗剂盐酸小檗碱含量的质量控制标准。方法 采用高效液相色谱法测定处方中盐酸小檗碱的含量。结果 建立高效液相色谱法测定处方中的盐酸小檗碱含量的方法。盐酸小檗碱的进样量在10～100 µg/ml范围内呈良好的线性关系（R2=0.9996），平均回收率为102.01%，RSD为0.49%（n=6）。结论 本方法专属性强、准确、重现性好，可用于黄连炉甘石洗剂盐酸小檗碱含量的质量控制标准。

黄连炉甘石洗剂；盐酸小檗碱；高效液相色谱法

黄连炉甘石洗剂是由炉甘石、盐酸小檗碱、氧化锌、甘油、薄荷脑等制成，具有消炎、保护皮肤、止痒与轻度收敛的作用。此洗剂是清远市慢性病防治医院常用制剂[1]，为将其作为医院的注册制剂，必须制定质量标准。本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定处方中的盐酸小檗碱的含量[2]，以对该制剂中盐酸小檗碱的含量进行质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦1020高效液相色谱仪。

1.2 试药 黄连炉甘石洗剂3批（清远市慢性病防治医院，批号：20130322、20140501、20140829）。盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200911）由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18（4.6 mm× 250.0mm，粒直径5 μm）；流动相：以磷酸盐缓冲液[0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05 mol/L庚烷磺酸钠溶液（1:1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH至3.0]-乙腈（60:40）；检测波长：263 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；柱温：20 ℃；理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于2 500。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品0.01076 g（批号：110713-200911，纯度：86.8%），置100 ml容量瓶中，用沸水溶解，放冷，用水定量稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 ml，至10 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取混悬液2 g，置100 ml容量瓶中，加沸水适量水浴30 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液5 ml，置25 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例与工艺制成缺盐酸小檗碱的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 专属性试验 分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液20 μl，照上述色谱条件注入色谱仪，测定，记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品溶液中盐酸小檗碱色谱峰对应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，供试品盐酸小檗碱与相邻杂质分离度大于1.5，理论塔板数不小于2500，且阴性对照色谱图在此保留时间无干扰，表明阴性对照对试验无干扰（图1～3）。

2.5.2 线性关系考察 精密量取对照品储备液1.25、 2.50、5.00、7.50、10.00 ml，分别置10 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，按含量测定方法测定，以峰面积A与浓度C绘制标准曲线，得回归方程：y=0.0110x+2.0181，R2=0.9996，表明本品浓度在10～100 µg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系（图4）。

图1 供试品溶液色谱图

图2 对照品溶液色谱图

图3 阴性对照色谱图

图4 标准曲线

2.5.3 精密度试验 取2.2项下制备的对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μl，对峰面积进行考察，记录盐酸小檗碱面积。各为：4 078.69482、4 074.12134、4 064.35059、4 061.34790、4 061.34790、4 056.94780。计算峰面积RSD值为0.21%。

2.5.4 重复性试验 取同一批样品（批号：20130322）6份，分别按2.3项下制备的供试品溶液，按上述色谱条件分别测定含量。结果分别为9.8181、9.7792、9.8487、9.8164、9.8454、9.7689 mg/g，RSD为0.34%。表明该方法重复性较好。

2.5.5 稳定性考察 取同一供试品溶液于0、2、4、 8、10、12 h按上述色谱条件测定盐酸小檗碱峰面积。分别为8 310.43848、8 324.13574、8 299.73633、8 297.72949、8 303.95117、8 300.52539，RSD为0.12%。表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.5.6 加样回收试验 精密量取已知含量的样品混悬液1 g（批号：20130322）6份，分别精密加入已知盐酸小檗碱对照品贮备液适量，按2.3项下方法提取并进样测定。回收率RSD结果见表1。

2.5.7 样品含量测定 取样品3批（批号：20130322、201405010、20140829），按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，分别为9.583、9.630、9.504 mg/g。

表1 加样回收试验结果

3 讨论

本实验采用的薄层色谱鉴别的方法对黄连炉甘石洗剂中薄荷脑进行鉴别[3]，结果表明供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显现相同颜色的斑点，阴性对照无其他成分无干扰；专属性强、重现性好。采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行含量测定[4]，盐酸小檗碱的进样量在10～100 µg/ml范围内呈良好的线性关系（R2=0.9996），平均回收率为102.01%。因此，所建立的方法可作为黄连炉甘石洗剂的质量控制标准。

[1] 刘慧,孙志强,王徽.炉甘石临床应用研究进展[J].齐鲁药事, 2010,29(8):489-490.

[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:354,640.

[3] 胡亚非,魏元锋.消炎退热贴栀子、荆芥及薄荷脑的薄层鉴别[J].湖北中医杂志,2007,29(8):60-60.

[4] 石雪蓉,郭力.HPLC测定黄连炉甘石洗剂中小檗碱的含量[J].华西药学杂志,1998,13(3):192-195.

Study on the determination of berberine Calamine Lotion berberine hydrochloride

Zhu Ruijin Chen Xiaorui Pan Weiwei

Objective To establish the quality control standard of Rhizoma Coptidis Calamine Lotion berberine hydrochloride.Methods The contents were determined by high performance liquid chromatography in the prescription of berberine hydrochloride.Results The method to determine the content of berberine hydrochloride in the preparation by HPLC was established.Sample amount of berberine hydrochloride was linear in the range of 10～100 µg/ml(R2=0.9996),the average recovery was 102.01%,RSD was 0.49%(n=6).Conclusion This method is specific,accurate,reproducible,and can be used for quality control of Rhizoma Coptidis Calamine Lotion standard of the content of berberine hydrochloride.

Calamine Lotion Coptis;Berberine hydrochloride;HPLC

R284;R96

A

1673-5846(2014)08-0020-03

清远市食品药品检验所，广东清远 511517

朱锐金（1980-），主管药师。研究方向：药品检验、药品监督

陈小锐（1981-），主管中药师。研究方向：中药学、药品检验。Tel：13726973777/0763-3111219，E-mail：379943030@qq.com