民族药地桃花根皮及叶总三萜含量测定
2014-07-16何可群李相兴
何可群 李相兴
摘要：以齐墩果酸为对照品，用超声辅助提取法、紫外分光光度法测定了地桃花根皮及叶的总三萜含量，结果表明：地桃花根皮、叶中总三萜的相对百分含量分别为3.682%、9.297%，精密度试验RSD分别为1.79%、2.08%；齐墩果酸对照品在0～100 μg/mL范围有良好的线性关系，回归方程为y=0.011 3x-0.017 7，相关系数r2=0.999 1。该方法操作简便、结果可靠，能为地桃花药用价值的开发及扩大资源利用提供科学的依据。
关键词：地桃花；总三萜；含量；测定
中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）03-0258-02
地桃花（Urena lobata L.）是锦葵科梵天花属多年生亚灌木状草本植物，别称肖梵天花、野桃花、野棉花、土黄芪、大迷马桩棵等[1-4]，分布于我国长江以南各省区[4]。地桃花根或全株均可入药，具有清热解毒、祛风利湿、益气补虚、活血消肿的功效，主治感冒、风湿痹痛、肾炎水肿、带下、淋病、疟疾、痢疾、乳腺炎、外伤出血等，是我国西南地区少数民族习用草药[1-5]。目前的研究表明：地桃花的化学成分主要为氨基酸和蛋白质、糖类、黄酮类、甾醇、鞣质、酚类、有机酸、皂苷等[4-7]。陈勇等的研究表明地桃花水提液在体外对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和普通变形杆菌均有一定的抑菌活性[8]。国内外还未见有关地桃花总三萜测定的研究报道，本试验对地桃花根皮及叶的总三萜含量进行研究，以便为该民族药的进一步开发和扩大资源利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 材料 地桃花样品，采自云南省云龙县，标本保存于贵州民族大学化学与环境科学学院药学教研室。
1.1.2 仪器 756PC紫外-可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），METTLERAE240电子分析天平（上海天平仪器厂），BGZ-30电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），SG3200HE超声清洗仪（上海冠特超声仪器有限公司），数显恒温水浴锅（常州博远试验分析仪器有限公司）。
1.1.3 试剂 无水乙醇、冰醋酸、高氯酸、香草醛均为分析纯，齐墩果酸对照品购自贵州迪大科技有限责任公司（纯度≥98%，批号：84650-60-2）。
1.2 试验方法
1.2.1 地桃花总三萜的提取方法 将晒干的地桃花根皮及叶在电热鼓风干燥箱中于（60±1） ℃烘干5 h，分别精确称取干燥、粉碎（过40目筛）的地桃花根皮、叶粉末各2.000 g，按 1 g ∶ 20 mL 的固液比用无水乙醇浸泡、超声提取2次。提取条件：时间60 min，超声频率40 kHz，功率150 W。提取结束后，合并提取液，过滤，冷却，用无水乙醇定容至100 mL，摇匀备用[9-11]。
1.2.2 标准溶液的制备及测定波长的选择[12-13] （1）标准溶液的制备。精确称取65 ℃干燥至恒重的齐墩果酸 20.00 mg，置100 mL容量瓶中，加无水乙醇适量使其溶解以无水乙醇定容、摇匀，每1 mL溶液含齐墩果酸200 μg。（2）测定波长的选择。分别精确吸取齐墩果酸标准溶液（200 μg/mL）、地桃花根皮、叶提取液各1.00 mL，分别置于3支10 mL比色管中，于85 ℃挥发干溶剂，冷却，分别精确加入5%香草醛-冰醋酸0.500 mL，再分别加入高氯酸1.00 mL，摇匀，于70 ℃水浴中反应20 min，取出，在冰水浴中冷却，用冰醋酸稀释至刻度，摇匀，静置5 min。以试剂空白建立基线，在400～700 nm波长范围进行波长扫描，得到齐墩果酸和地桃花根皮、叶提取液显色后的吸收光谱，以确定最大吸收波长。
1.2.3 齐墩果酸标准曲线的绘制 精确吸取质量浓度 200 μg/mL 的齐墩果酸标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL 分别置于6支10 mL比色管中，测定波长的选择操作同“1.2.2”节，以试剂空白为参比，于540 nm波长下测定吸光度D540 nm，以吸光度为纵坐标、显色液中齐墩果酸的质量浓度C（μg/mL） 为横坐标，绘制标准曲线[12-13]。
1.2.4 样品测定 精确量取“1.2.1”节操作后所得地桃花根皮、叶乙醇提取液各1.00 mL，分别置于10 mL比色管中，测定波长的选择操作同“1.2.2”节，于540 nm波长下测得地桃花根皮、叶提取液的吸光度D540 nm，代入回归方程得地桃花根皮、叶的总三萜类化合物以齐墩果酸计算的质量浓度C（μg/mL），换算为干燥药材中总三萜酸的含量[12-13]。
1.2.5 重复性试验 精确称取地桃花根皮、叶样品各5份，按含量测定方法进行测定，计算平均含量及RSD值。
1.2.6 加标回收试验 精确量取地桃花根皮乙醇提取液 1.00 mL 5份，再分别精确加入齐墩果酸标准溶液（浓度为 200 μg/mL）1.00mL，按样品含量测定方法进行测定，计算加标回收率及RSD值。
2 结果与分析
2.1 测定波长的选择
由“1.2.2”节的试验结果可知齐墩果酸、地桃花根皮、叶提取液显色后在540 nm处均有最大吸收，故以540 nm作为总三萜的测定波长。
2.2 标准曲线
于540 nm波长下测定齐墩果酸标准溶液系列的吸光度D540 nm，以吸光度为纵坐标、显色液中齐墩果酸的质量浓度C（μg/mL） 为横坐标，绘制标准曲线（图1），经回归处理得方程：y=0.011 3x-0.017 7，相关系数：r2=0.999 1，齐墩果酸浓度在0～100 g/mL范围内吸光度与质量浓度线性关系良好。endprint
2.3 样品总三萜含量的测定
由表1可知，地桃花根皮、叶样品中总三萜的平均含量分别为3.682%、9.297%，重复性试验RSD分别为1.79%和208%，精密度高。
2.4 加标回收率
由表2可知，加标回收率在96.29%～98.39%，RSD为0.880%，说明本试验所采用的方法适用于地桃花样品中总三萜含量的测定。
3 结论
地桃花是我国西南地区白族、纳西族、侗族等多个少数民族民间草药，目前其资源还未得到有效的开发利用。本试验首次对地桃花根皮、叶的总三萜含量进行研究，结果表明地桃花干燥根皮、叶总三萜含量分别为3.682%、9.297%，为该民族药的药用价值开发及扩大资源利用提供了一定的科学依据。
参考文献：
[1]云南省卫生厅. 云南中草药[M]. 昆明：云南人民出版社，1971：700-701.
[2]大理白族自治州人民政府. 大理中药资源志[M]. 昆明：云南民族出版社，1991：222.
[3]刘 毅，陈羲之. 云南常用中草药单验方荟萃[M]. 昆明：云南科技出版社，2010：87.
[4]左经会. 六盘水药用植物[M]. 北京：科学出版社，2013：138-139.
[5]云南药物研究所. 云南天然药物图鉴[M]. 昆明：云南科技出版社，2004：162.
[6]贾 陆，毕跃峰，敬林林，等. 地桃花化学成分研究[J]. 中国药学杂志，2010，45（14）：1054-1056.
[7]谢 臻，陈 勇，唐春丽，等. 地桃花化学成分研究进展[J]. 广西中医学院学报，2011，14（1）：70-71.
[8]陈 勇，谢 臻，韦 韬，等. 地桃花水提物的体外抗菌试验研究[J]. 亚太传统医药，2011，7（10）：29-30.
[9]刘玉明，柴逸峰，娄子洋，等. 分光光度法测定蓝桉果实总三萜酸[J]. 中国医院药学杂志，2005，25（1）：4-6.
[10]袁 媛，杨 毅，开桂青，等. 灵芝三萜提取工艺研究[J]. 安徽化工，2007，33（4）：27-29.
[11]张雁冰，王克让，刘宏民. 马桑叶中总三萜酸的含量测定[J]. 时珍国医国药，2006，17（4）：529-530.
[12]蔡亚玲，阮金兰，苏 群，等. 紫背鼠尾草中总三萜酸的含量测定[J]. 中药材，2008，31（5）：692-693.
[13]易中宏，郑一敏，胥秀英，等. 分光光度法测定茯苓中总三萜类成分的含量[J]. 时珍国医国药，2005，16（9）：847-848.endprint
2.3 样品总三萜含量的测定
由表1可知，地桃花根皮、叶样品中总三萜的平均含量分别为3.682%、9.297%，重复性试验RSD分别为1.79%和208%，精密度高。
2.4 加标回收率
由表2可知，加标回收率在96.29%～98.39%，RSD为0.880%，说明本试验所采用的方法适用于地桃花样品中总三萜含量的测定。
3 结论
地桃花是我国西南地区白族、纳西族、侗族等多个少数民族民间草药，目前其资源还未得到有效的开发利用。本试验首次对地桃花根皮、叶的总三萜含量进行研究，结果表明地桃花干燥根皮、叶总三萜含量分别为3.682%、9.297%，为该民族药的药用价值开发及扩大资源利用提供了一定的科学依据。
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2.3 样品总三萜含量的测定
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2.4 加标回收率
由表2可知，加标回收率在96.29%～98.39%，RSD为0.880%，说明本试验所采用的方法适用于地桃花样品中总三萜含量的测定。
3 结论
地桃花是我国西南地区白族、纳西族、侗族等多个少数民族民间草药，目前其资源还未得到有效的开发利用。本试验首次对地桃花根皮、叶的总三萜含量进行研究，结果表明地桃花干燥根皮、叶总三萜含量分别为3.682%、9.297%，为该民族药的药用价值开发及扩大资源利用提供了一定的科学依据。
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