石榴叶提取物的抑菌杀虫活性

王东方等

摘要：以75%乙醇为溶剂，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）叶的有效成分，并对该提取物的抑菌作用进行了测定。结果表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

关键词：石榴叶；提取物；生物活性

中图分类号：S482.1 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴叶是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的叶，具有收敛止泻、解毒杀虫等功效。石榴叶中含有20多种化合物，其中鞣质能凝固微生物的原生质及多种酶，因而对各种细菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮对淋球菌有明显的抑制作用[2]。关于石榴叶提取物的抑菌杀虫活性目前尚未见报道。笔者采用75%乙醇提取石榴叶的有效成分，并对其生物活性进行研究，旨在为开发利用石榴资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

石榴叶与槐蚜采自潍坊学院校园内。大肠杆菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自潍坊学院生物与农业工程学院微生物学实验室。

1.2 仪器

仪器：800A型中药粉碎机（山东省青州市精诚医药装备制造有限公司），re-5299旋转蒸发仪、SHZ-ⅢA型循环水真空泵（上海一凯仪器设备有限公司），CJ-1680型超净工作台等。乙醇（上海凌峰化学试剂有限公司）、二甲基亚砜（DMSO）（国药集团化学试剂有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴叶提取物的制备 清洗并晾干石榴叶，将石榴叶置于烘箱中65 ℃烘干，用中药粉碎机粉碎15～30 s。称取100 g粉末置于烧瓶中，加入75%乙醇500 mL，在电磁恒温搅拌器上搅拌煮沸，回流萃取2 h。将萃取液真空抽滤后用旋转蒸发仪40 ℃浓缩至干并称重，用10%DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度为60 mg/mL的溶液备用[3]。

1.3.2 石榴叶提取物的抑菌活性测定 用无菌生理盐水把菌种稀释成密度为106～107个/L的悬液，吸取0.2 mL菌悬液均匀涂布于灭菌平板上[4]。用10% DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度分别为10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。将直径约0.4 cm的滤纸圆片置于各浓度溶液中，风干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培养24 h，测定抑菌圈直径大小，直径大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴叶提取物对果蝇的毒理活性 采用棉球饲喂法研究石榴叶提取物对果蝇的影响[6]。将黑腹果蝇成虫用乙醚麻醉，果蝇饥饿5～6 h后饲以不同浓度的供试溶液，每指形管中放1个0.2 g的脱脂棉球，棉球上蘸有约 2.5 mL 的饲养液，将指形管置于25 ℃、相对湿度为50%～60%、光照周期为12 h/d的培养箱中饲养4 d，每12～13 h记录1次各处理的死亡果蝇数，4 d后统计各处理的死亡果蝇数[7]。

1.3.4 石榴叶提取物对槐蚜的杀虫活性 采用室内叶片法测定石榴叶提取物的杀蚜活性[8]。以大小适中的健康无翅成蚜为试虫，将带虫的叶片修剪成约25头虫/每片叶，将叶片置于铺有滤纸的培养皿中。用10%DMSO溶液梯度稀释石榴叶提取物储存液，并喷洒于各个试验皿中，以10% DMSO溶液作为对照，置于温度为25 ℃、湿度为80%的培养箱内培养24 h后统计蚜虫死亡率。死亡率及校正死亡率计算方法分别见公式（1）与公式（2）。

3 结论与讨论

本研究表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%，与目前使用的化学农药吡虫啉的防治效果差异不显著[9]。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

参考文献：

[1]周建华，胡建平. 石榴生物活性物质的研究进展[J]. 中国酿造，2008（14）：20-22.

[2]赵彦超，师宝君，胡兆农. 杠柳毒素NW的杀虫活性[J]. 昆虫知识，2008，45（6）：950-952.

[3]张羽飞，于春丽，张春枝. 乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件[J]. 大连轻工业学院学报，2004，23（3）：190-193.

[4]周德庆. 微生物学实验手册[M]. 上海：上海科学技术出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭礼，李玉群. 柳树中农用抑菌活性物的初步研究[J]. 当代生态农业，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊凤，李鹄鸣. 蛹虫草多糖对果蝇寿命影响的研究[J]. 中国野生植物资源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]杨冬梅，陈 玲，龙 灿，等. 北冬虫夏草提取液对果蝇繁殖力及寿命的影响[J]. 湖南农业科学，2012（11）：87-89.

[8]刘 月，霍 清，张盛宇，等. 臭椿叶提取液对蚜虫防治效果的研究[J]. 北方园艺，2009（9）：94-95.

[9]王庆忠，王东方，王汉海，等. 番茄茎叶乙醇水提取物对槐蚜的生物活性研究[J]. 北方园艺，2012（24）：147-149.endprint

摘要：以75%乙醇为溶剂，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）叶的有效成分，并对该提取物的抑菌作用进行了测定。结果表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

关键词：石榴叶；提取物；生物活性

中图分类号：S482.1 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴叶是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的叶，具有收敛止泻、解毒杀虫等功效。石榴叶中含有20多种化合物，其中鞣质能凝固微生物的原生质及多种酶，因而对各种细菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮对淋球菌有明显的抑制作用[2]。关于石榴叶提取物的抑菌杀虫活性目前尚未见报道。笔者采用75%乙醇提取石榴叶的有效成分，并对其生物活性进行研究，旨在为开发利用石榴资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

石榴叶与槐蚜采自潍坊学院校园内。大肠杆菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自潍坊学院生物与农业工程学院微生物学实验室。

1.2 仪器

仪器：800A型中药粉碎机（山东省青州市精诚医药装备制造有限公司），re-5299旋转蒸发仪、SHZ-ⅢA型循环水真空泵（上海一凯仪器设备有限公司），CJ-1680型超净工作台等。乙醇（上海凌峰化学试剂有限公司）、二甲基亚砜（DMSO）（国药集团化学试剂有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴叶提取物的制备 清洗并晾干石榴叶，将石榴叶置于烘箱中65 ℃烘干，用中药粉碎机粉碎15～30 s。称取100 g粉末置于烧瓶中，加入75%乙醇500 mL，在电磁恒温搅拌器上搅拌煮沸，回流萃取2 h。将萃取液真空抽滤后用旋转蒸发仪40 ℃浓缩至干并称重，用10%DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度为60 mg/mL的溶液备用[3]。

1.3.2 石榴叶提取物的抑菌活性测定 用无菌生理盐水把菌种稀释成密度为106～107个/L的悬液，吸取0.2 mL菌悬液均匀涂布于灭菌平板上[4]。用10% DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度分别为10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。将直径约0.4 cm的滤纸圆片置于各浓度溶液中，风干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培养24 h，测定抑菌圈直径大小，直径大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴叶提取物对果蝇的毒理活性 采用棉球饲喂法研究石榴叶提取物对果蝇的影响[6]。将黑腹果蝇成虫用乙醚麻醉，果蝇饥饿5～6 h后饲以不同浓度的供试溶液，每指形管中放1个0.2 g的脱脂棉球，棉球上蘸有约 2.5 mL 的饲养液，将指形管置于25 ℃、相对湿度为50%～60%、光照周期为12 h/d的培养箱中饲养4 d，每12～13 h记录1次各处理的死亡果蝇数，4 d后统计各处理的死亡果蝇数[7]。

1.3.4 石榴叶提取物对槐蚜的杀虫活性 采用室内叶片法测定石榴叶提取物的杀蚜活性[8]。以大小适中的健康无翅成蚜为试虫，将带虫的叶片修剪成约25头虫/每片叶，将叶片置于铺有滤纸的培养皿中。用10%DMSO溶液梯度稀释石榴叶提取物储存液，并喷洒于各个试验皿中，以10% DMSO溶液作为对照，置于温度为25 ℃、湿度为80%的培养箱内培养24 h后统计蚜虫死亡率。死亡率及校正死亡率计算方法分别见公式（1）与公式（2）。

3 结论与讨论

本研究表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%，与目前使用的化学农药吡虫啉的防治效果差异不显著[9]。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

参考文献：

[1]周建华，胡建平. 石榴生物活性物质的研究进展[J]. 中国酿造，2008（14）：20-22.

[2]赵彦超，师宝君，胡兆农. 杠柳毒素NW的杀虫活性[J]. 昆虫知识，2008，45（6）：950-952.

[3]张羽飞，于春丽，张春枝. 乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件[J]. 大连轻工业学院学报，2004，23（3）：190-193.

[4]周德庆. 微生物学实验手册[M]. 上海：上海科学技术出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭礼，李玉群. 柳树中农用抑菌活性物的初步研究[J]. 当代生态农业，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊凤，李鹄鸣. 蛹虫草多糖对果蝇寿命影响的研究[J]. 中国野生植物资源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]杨冬梅，陈 玲，龙 灿，等. 北冬虫夏草提取液对果蝇繁殖力及寿命的影响[J]. 湖南农业科学，2012（11）：87-89.

[8]刘 月，霍 清，张盛宇，等. 臭椿叶提取液对蚜虫防治效果的研究[J]. 北方园艺，2009（9）：94-95.

[9]王庆忠，王东方，王汉海，等. 番茄茎叶乙醇水提取物对槐蚜的生物活性研究[J]. 北方园艺，2012（24）：147-149.endprint

摘要：以75%乙醇为溶剂，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）叶的有效成分，并对该提取物的抑菌作用进行了测定。结果表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

关键词：石榴叶；提取物；生物活性

中图分类号：S482.1 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴叶是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的叶，具有收敛止泻、解毒杀虫等功效。石榴叶中含有20多种化合物，其中鞣质能凝固微生物的原生质及多种酶，因而对各种细菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮对淋球菌有明显的抑制作用[2]。关于石榴叶提取物的抑菌杀虫活性目前尚未见报道。笔者采用75%乙醇提取石榴叶的有效成分，并对其生物活性进行研究，旨在为开发利用石榴资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

石榴叶与槐蚜采自潍坊学院校园内。大肠杆菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自潍坊学院生物与农业工程学院微生物学实验室。

1.2 仪器

仪器：800A型中药粉碎机（山东省青州市精诚医药装备制造有限公司），re-5299旋转蒸发仪、SHZ-ⅢA型循环水真空泵（上海一凯仪器设备有限公司），CJ-1680型超净工作台等。乙醇（上海凌峰化学试剂有限公司）、二甲基亚砜（DMSO）（国药集团化学试剂有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴叶提取物的制备 清洗并晾干石榴叶，将石榴叶置于烘箱中65 ℃烘干，用中药粉碎机粉碎15～30 s。称取100 g粉末置于烧瓶中，加入75%乙醇500 mL，在电磁恒温搅拌器上搅拌煮沸，回流萃取2 h。将萃取液真空抽滤后用旋转蒸发仪40 ℃浓缩至干并称重，用10%DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度为60 mg/mL的溶液备用[3]。

1.3.2 石榴叶提取物的抑菌活性测定 用无菌生理盐水把菌种稀释成密度为106～107个/L的悬液，吸取0.2 mL菌悬液均匀涂布于灭菌平板上[4]。用10% DMSO溶液将石榴叶提取物配制成浓度分别为10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。将直径约0.4 cm的滤纸圆片置于各浓度溶液中，风干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培养24 h，测定抑菌圈直径大小，直径大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴叶提取物对果蝇的毒理活性 采用棉球饲喂法研究石榴叶提取物对果蝇的影响[6]。将黑腹果蝇成虫用乙醚麻醉，果蝇饥饿5～6 h后饲以不同浓度的供试溶液，每指形管中放1个0.2 g的脱脂棉球，棉球上蘸有约 2.5 mL 的饲养液，将指形管置于25 ℃、相对湿度为50%～60%、光照周期为12 h/d的培养箱中饲养4 d，每12～13 h记录1次各处理的死亡果蝇数，4 d后统计各处理的死亡果蝇数[7]。

1.3.4 石榴叶提取物对槐蚜的杀虫活性 采用室内叶片法测定石榴叶提取物的杀蚜活性[8]。以大小适中的健康无翅成蚜为试虫，将带虫的叶片修剪成约25头虫/每片叶，将叶片置于铺有滤纸的培养皿中。用10%DMSO溶液梯度稀释石榴叶提取物储存液，并喷洒于各个试验皿中，以10% DMSO溶液作为对照，置于温度为25 ℃、湿度为80%的培养箱内培养24 h后统计蚜虫死亡率。死亡率及校正死亡率计算方法分别见公式（1）与公式（2）。

3 结论与讨论

本研究表明，石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显，对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显，当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时，24 h后槐蚜校正死亡率达9672%，与目前使用的化学农药吡虫啉的防治效果差异不显著[9]。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。

参考文献：

[1]周建华，胡建平. 石榴生物活性物质的研究进展[J]. 中国酿造，2008（14）：20-22.

[2]赵彦超，师宝君，胡兆农. 杠柳毒素NW的杀虫活性[J]. 昆虫知识，2008，45（6）：950-952.

[3]张羽飞，于春丽，张春枝. 乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件[J]. 大连轻工业学院学报，2004，23（3）：190-193.

[4]周德庆. 微生物学实验手册[M]. 上海：上海科学技术出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭礼，李玉群. 柳树中农用抑菌活性物的初步研究[J]. 当代生态农业，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊凤，李鹄鸣. 蛹虫草多糖对果蝇寿命影响的研究[J]. 中国野生植物资源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]杨冬梅，陈 玲，龙 灿，等. 北冬虫夏草提取液对果蝇繁殖力及寿命的影响[J]. 湖南农业科学，2012（11）：87-89.

[8]刘 月，霍 清，张盛宇，等. 臭椿叶提取液对蚜虫防治效果的研究[J]. 北方园艺，2009（9）：94-95.

[9]王庆忠，王东方，王汉海，等. 番茄茎叶乙醇水提取物对槐蚜的生物活性研究[J]. 北方园艺，2012（24）：147-149.endprint