松补力口服液总多酚及总多糖的测定

刘 波，卢晓丽，周晓英

（新疆医科大学1中医学院，2药学院，乌鲁木齐 830011）

松补力口服液由甘松单味药组成。该方收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》，其具有养心、安神、增强胃功能的功效，用于治疗心悸、神经衰弱、腹痛、胃病等疾病的口服液体制剂［1］。

植物多酚类化合物在自然界分布广泛，具有抗氧化、清除自由基、与金属离子发生络合、与蛋白质形成多种生理学活性物质［2］，是有效的肿瘤化学预防剂［3］，有些多酚类化合物本身也具有抗肿瘤作用［4］。

在《中国药典》［5］2010版中仅对甘松药材进行了甘松新酮的薄层鉴别，原标准中没有对松补力口服液进行总多酚及总多糖的含量测定。为了完善该制剂质量标准，更好地控制该产品质量，本研究对松补力口服液中的总多酚及总多糖含量进行测定，建立测定方法，以控制其质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 U－3310紫外可见分光光度计（日本株式会社日立高新技术），KQ2200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），AL204电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）。

1.2 实验材料 原料：10批不同批号甘松制备的松补力口服液。试剂：5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、4%氢氧化钠溶液、钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、硫酸锂、双氧水、甲醇均为分析纯，实验用水为自制蒸馏水。没食子酸对照品（天津市光复精细化工研究所，含量99%），无水萄萄糖（上海实验试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 试剂的制备 福林酚试剂的制备［6］：称取钨酸钠100.0g、钼酸钠25.0g，用700mL蒸馏水溶解于圆底烧瓶中，加入磷酸（≥85%）50mL和100mL浓盐酸充分混匀，小火加热回流12h，放冷，再加入150g硫酸锂、50mL蒸馏水及0.2mL双氧水，开口继续沸腾15min，使得双氧水完全挥发，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，过滤，于棕色瓶中避光储存。试液应呈亮黄色，如放置后变为绿色，可加双氧水0.2mL，煮沸15min即可。

对照品储备溶液制备：精密称取葡萄糖标准品0.03004g置100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，制成浓度为0.3mg／mL总多糖对照品储备溶液。精密称取0.0101g没食子酸对照品于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，制成浓度为0.101mg／mL总多酚对照品储备溶液。

2.2 供试品制备

2.2.1 总多酚供试品溶液制备 取口服液3mL用水稀释到100mL并定容。取2.0mL加4.0mL水，然后加0.5mL福林酚试剂，最后加1.5mL的20%Na2CO3混匀，加水定容，75℃加热10min，备用。

2.2.2 总多糖供试品溶液制备 取口服液10mL加30mL无水乙醇过夜，离心。分别用无水乙醇、丙酮洗3次，每次10mL。滤渣加适量水溶解，并定容到100mL，取5.0mL定容到10mL，备用。

2.3 最大吸收波长的确定 准确吸取2mL总多酚对照品储备溶液于25mL容量瓶中，分别加入18mL蒸馏水、福林酚试剂1.5mL，用20%Na2CO3定容，于75℃水浴加热10min，以蒸馏水为空白，在600～800nm波长处扫描其吸光度，结果表明没食子酸在760nm处有强吸收峰，故选择760nm作为总多酚的测定波长。

准确吸取葡萄糖标准溶液5mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品稀释液。精密移取对照品稀释液1mL，置于具塞试管中，加入新鲜配制的0.2% 蒽酮－硫酸试液4mL，迅速浸于冰水浴中冷却后放入热水浴中，管口加盖玻璃塞，以防蒸发，准确煮沸10min取出，自来水冷却。室温放置10min，以试剂空白为参比，在400～800 nm波长范围内进行扫描。精密移取1mL供试品溶液置于10mL具塞试管中，按上法操作，在400～800nm波长范围内进行扫描。对照品溶液与供试品溶液均在610nm处有最大吸收。

2.4 绘制标准曲线

2.4.1 总多酚标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.5、1、2、3、4、5mL，分别置10mL容量瓶中，各加水稀释至刻度。分别取上述溶液各2mL，置10mL容量瓶中，分别加4mL水、0.5mL福林酚试剂，摇匀，加1.5mL20%Na2CO3溶液，摇匀，加水稀释至刻度，75℃水浴加热10min，取出放冷。照紫外－可见光分光光度法（中国药典2010年版一部附录ⅤA），在760nm波长处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程Y＝0.1181 X＋0.0208（r＝0.9991），在线性范围0.913～9.130μg／mL范围内吸收度呈良好的线性关系。

2.4.2 总多糖标准曲线的绘制 取葡萄糖对照品储备溶液0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5mL分别置于10mL量瓶中，加水至刻度。分别取上述溶液1mL置10mL具塞试管中，各加0.2%蒽酮－硫酸试液4mL，摇匀后迅速浸于冰水浴中冷却，各管冷却后一起置沸水浴中加热10min取出，自来水冷却。室温放置10min，以试剂空白为参比。照紫外－可见光分光光度法（中国药典2010年版一部附录ⅤA），在610nm波长处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程Y ＝7.2167 X＋0.0719（r＝0.999），在0.015～0.105mg／mL范围内吸收度呈良好的线性关系。

2.5 方法学考察

2.5.1 稳定性试验 精密取同一份供试品溶液，分别在0、10、20、40、80、160min按照“2.4.1”方法显色后测定吸光度值。计算得到松补力口服液总多酚的RSD为0.68%，表明供试品溶液在160min内显色稳定。精密取同一份供试品溶液，分别在0、10、20、40、80、160min按照“2.4.2”方法显色后测定吸光度值。计算得到松补力口服液总多糖的RSD为0.14%，表明供试品溶液在160min内显色稳定。

2.5.2 精密度试验 取6份总多酚对照品溶液，每份2mL，按照“2.4.1”方法显色后测定吸光度值，计算得到松补力口服液总多酚的RSD为0.76%，说明该方法测定松补力口服液总多酚精密度良好。取6份总多糖对照品溶液，每份1mL，按照“2.4.2”方法显色后测定吸光度值，计算得到松补力口服液总多糖的RSD为0.72%，说明该方法测定松补力口服液总多糖精密度良好。

2.5.3 重现性试验 取同一批松补力口服液样品6份，分别按照“2.2.1”方法制成总多酚供试品溶液，每份精密吸取2mL，按照“2.4.1”方法显色后测定吸光度值，计算得到RSD为1.05%，表明该方法测定松补力口服液中总多酚的含量重现性良好。取同一批松补力口服液样品6份，分别按照“2.2.2”方法制成总多糖供试品溶液，每份精密吸取1mL，按照“2.4.2”方法显色后测定吸光度值，计算得到RSD为1.28%，表明该方法测定松补力口服液中总多糖的含量重现性良好。

2.5.4 加样回收率试验 测定已知总多酚含量的松补力口服液6份，加没食子酸标准品适量，各取2mL，按照“2.4.1”方法显色后测定吸光度值，并计算平均回收率。平均加样回收率为98.2%，RSD为1.64%，结果见表1。测定已知总多糖含量的松补力口服液6份，加葡萄糖标准品适量，各取1mL，按照“2.4.2”方法显色后测定吸光度值，并计算平均回收率。平均回收率为96.62%，RSD为1.0%，结果见表2。

表1 松补力口服液中总多酚的回收率

表2 松补力口服液中总多糖的回收率

2.6 样品测定

2.6.1 松补力口服液10批总多酚的含量测定 取松补力口服液各3份，每份取3mL用水稀释到

100mL并定容。按照“2.4.1”方法显色后在760 nm波长处测定吸光度值，计算松补力口服液中总多酚含量。10批松补力口服液总多酚的平均含量为0.617mg／mL。结果见表3。

2.6.2 松补力口服液10批总多糖的含量测定 取松补力口服液各3份，每份取10mL加30mL无水乙醇过夜，离心。分别用无水乙醇、丙酮洗3次，每次10mL。滤渣加适量水溶解，并定容到100mL，取5.0mL定容到10mL。按照“2.4.2”方法显色后在610nm波长处测定吸光度值，计算松补力口服液中总多酚含量。10批松补力口服液总多糖的平均含量为1.216mg／mL结果见表4。

表3 10批不同批次药材制成口服液总多酚含量（n＝3）

表4 10批不同批次药材制成口服液总多糖含量

3 结论

本研究结果表明松补力口服液中总多酚、总多糖的含量较高。经查阅文献［6－12］确定采用本实验方法，简单易行，重现性好，结果可靠稳定，可作为松补力口服液总多酚和总多糖的检测方法。

本研究收集10批松补力口服液进行测定，总多糖含量相对于总多酚含量较高，但是总多糖含量测定方法没有总多酚的测定方法稳定，对于松补力口服液质量标准检测的提高还需进行相关的实验测定，以便建立科学的松补力口服液质量检测标准。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999，WS3－BW－0151－98.

［2］ Zi X，Grasso A W，Kung HJ，et al.A flavonoid antioxidant，silymarin，inhibits activation of erbB1signling and induces cyclin－dependent Kinase inhibitors，G1arrest，and anticarcinogenic effects in human prostate carcinoma DU145cells［J］.Cancer Res，1998，58（9）：1920－1929.

［3］ 陈敏，刘晓芳，李秋娟，等.白黎芦醇对乳腺癌 MCF－7细胞的抗增殖作用［J］.中国公共卫生，2004，20（11）：1341－1342.

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［5］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：79.

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［7］ 李鹏，魏晓霞，许建华，等.灵芝康葆胶囊中多糖的测定［J］.西北药学杂 志，2008，24（4）：249－250.

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［9］ 刘硕谦，刘仲华，黄建安.紫外分光光度法检测水皂角总多酚的含量［J］.食品工业科技，2003，（6）：76－77.

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［11］ 李繁荣.至灵胶囊中多糖测定［J］.中草药，2006，37（5）：709－710.

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