HPLC-ELSD法测定复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云，徐国兵

（1.安徽中医药大学，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051）

HPLC-ELSD法测定复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云1，2，徐国兵1，2

（1.安徽中医药大学，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051）

目的 采用高效液相色谱—蒸发光散射法建立复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定。色谱柱：TSK GEL G2000SWxl色谱柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流动相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸铵溶液（8∶92），流速：0.8 mL·min-1，柱温：30℃，蒸发光散射检测器漂移管温度 103℃，载气为氮气，流量为 2.5 L·min-1。结果 聚山梨酯80进样量在 2.515～100.6 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 6；平均加样回收率为 100.87%（n＝6，RSD＝0.65%）。结论 试验表明，该方法操作简单、快速，重复性好，可以作为复方麝香注射液中聚山梨酯80的质量控制方法。

复方麝香注射液；聚山梨酯80；含量测定；HPLC；蒸发光散射

复方麝香注射液是由人工麝香、郁金、广藿香、石菖蒲、冰片和薄荷脑等六味中药制成的复方制剂，标准收载于国家食品药品监督管理局国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册［1］，具有豁痰开窍，醒脑安神的功效，用于痰热内闭所致的中风昏迷。辅料聚山梨酯 80又称吐温80，其对脂溶性成分有较好的助溶作用，是复方麝香注射液中的助溶剂，本身有很强的细胞膜破碎作用而导致刺激性、溶血性和组胺释放（过敏），如果用量不当可导致不良反应，为此，本次试验参考部分文献报道［2-11］，建立了复方麝香注射液中聚山梨酯 80的含量测定方法，该方法方便、快捷，方法学验证符合要求，可用于复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量测定。

1 仪器与试药

Agilent1200系 列 高 效液相 色 谱 仪，Alltech ELSD 2000ES检测器；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯；聚山梨酯80（BESTOWN-振翔公司提供，批号G0I359）；复方麝香注射液9批，分别由吉林省集安益盛药业股份有限公司（标为厂家1）和安徽金太阳生化药业有限公司（标为厂家2）提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：TSK GEL G2000SWxl色谱柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流动相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸铵溶液（8∶92），流速：0.8 mL· min-1，检测器：蒸发光散射检测器，柱温：30℃；进样量：10 μL。理论板数按聚山梨酯80峰计算不低于1 500，分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取聚山梨酯 80对照品0.251 5 g，置50 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中含5.03 mg聚山梨酯80的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取复方麝香注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方组成比例，将人工麝香、郁金、广藿香、石菖蒲加水蒸气蒸馏得初馏液，再进行重蒸馏，收集重蒸液，将冰片、薄荷脑共研，用上述蒸馏液分次溶解；再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察 分别精密量取上述对照品溶液0.5、1、2、4、8、16、20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，峰面积分别为：154.8、490.5、1 203.9、3 151.0、8 645.2、23 884.5、31 907.2。以峰面积的自然对数值（Y）为纵坐标，以聚山梨酯 80进样量的自然对数值（X）为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理，方程：Y＝1.430X+1.646，r＝0.999 6，结果表明，聚山梨酯80进样量在2.515～100.6 μg范围内线性关系良好。

图1 色谱图（1.聚山梨酯80）

2.4 精密度考察 精密吸取同一对照品溶液连续进样6次，每次4 μL，测定峰面积分别为：3 199.1、3 137.9、3 146.0、3 144.5、3 139.6、3 138.6。峰面积平均为 3 151.0，RSD为0.76%，表明精密度良好。

2.5 重复性试验 精密称取同一批号（13020713）样品6份按供试液制备方法制备，依法测定。结果聚山梨酯 80含量分别为（g·L-1）：14.55、14.68、14.62、14.54、14.37、14.41，平均含量是14.53 g· L-1，其 RSD为 0.84%，表明本品测定方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液分别在配制后 0、4、8、12、24 h进样 10 μL，测定峰面积分别为：2 057.7、2 125.8、2 097.4、2 055.7、2 069.9。RSD 为1.44%，结果显示，供试品溶液在 24 h内基本稳定。

2.7 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按本文条件各进样10 μL，色谱图见图1，在本文条件下，阴性对照无干扰。

2.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的同一批（批号：13020713，含量：14.53 g·L-1）的样品 6份，每份0.5 mL，分别精密加入聚山梨酯80对照品溶液（浓度为5.03 g·L-1）1.5 mL，置10 mL量瓶中，按上述含量测定方法测定，结果平均回收率为100.9%，RSD＝0.65%，具体结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定 取不同厂家的 9批复方麝香注射液样品，按供试品溶液的配制项下制备供试品溶液，每个批次的样品平行制备 2份，测定复方麝香注射液中辅料聚山梨酯80的含量，结果见表2。

表2 复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量（n＝2）

3 讨论

3.1 检测器的选择 聚山梨酯80本身没有紫外吸收，故不能选择紫外检测器，而蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有化合物均有相应，故此次试验采用蒸发光散射检测器，进行复方麝香注射液中聚山梨酯80的含量检测。

3.2 色谱柱的选择 聚山梨酯 80为极性化合物，在常规的C18柱上几乎无保留，无法测定。此次试验采用的凝胶色谱柱TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm ×300 mm，5 μm）为排阻色谱柱，其键合相能与聚山梨酯80选择性作用，达到分离检测的结果。

3.3 流动相与流速的选择 此次试验分别比较了乙腈—水（8∶92）、乙腈—0.02 mol·L-1乙酸铵溶液（8∶92）和乙腈—0.01 mol·L-1乙酸铵溶液（8∶92）三种不同的流动相，结果显示以乙腈—0.01 mol· L-1乙酸铵溶液（8∶92）为流动相时，聚山梨酯 80得到较好的分离及较高的理论塔板数。同时此次试验还比较了0.6、0.8和1.0 mL·min-1三种不同流速，结果显示 0.6 mL·min-1的流速出峰时间晚且峰较宽，1.0 mL·min-1的流速出峰时间较早且柱压增大，采用 0.8 mL·min-1的流速时峰型较好，出峰时间适中，故选用 0.8 mL·min-1的流速。

4 小结

本研究首次建立复方麝香注射液中聚山梨酯80的HPLC-ELSD测定方法，方法可靠，重现性好，考虑到聚山梨酯80的特殊生理作用且易诱发临床不良反应，建议在现行标准中增加聚山梨酯 80的含量测定检查项目。

［1］ 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编中成药地方标准上升国家标准部分经络肢体脑分册［S］，2002：240-244.

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［5］ 尹利辉，范可青，朱 俐，等.凝胶色谱-蒸发光散射检测法测定中药注射液中聚山梨酯 80的含量［J］.药物分析杂志，2012，32（9）：1686-1689.

［6］ 吴 燕，李华龙，米亚娴.中药注射剂中吐温80的定性定量测定研究［J］.天津药学，2011，23（6）：3-5.

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Determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD

CHENG Shi-yun1，2，XU Guo-bing1，2
（1.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China；2.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei，Anhui 230051，China）

Objective To establish the method for determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD.Methods It was performed by HPLC-ELSD with TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm×300 mm，5 μm）column.Acetonitrile and 0.01 mol ·L-1ammonium acetate（8∶92）was used as mobile phase，the flow rate was 0.8ml·min-1，and the temperature was set at 30℃.The evaporated light scattering detector was adopted.The drift tube temperature was 103℃，and the gas flow rate was 2.5 L·min-1.Results The calibration cueve showed good linearity of polysorbate 80 in the test range from 2.515 to 100.6 μg（r＝0.999 9），and average recovety was 100.87% （n＝6，RSD＝0.65%）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable，and it can be applied to control the quality of polysorbate 80 in compound shexiang injection.

Compound shexiang injection；polysorbate 80；determination；HPLC；ELSD

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.016

2013-11-11，

2014-01-06）

国家药典委员会中药注射剂标准提高项目

程世云，女，硕士研究生

徐国兵，男，主任药师，硕士生导师，研究方向：中药质量控制，Email：xgb119＠163.com