鸡肠毒综合症病因研究报告(二)—细菌和原虫的分离鉴定

何雷堂 （河南省鹤壁市畜牧局 458030） 何丽丽 （河南省鹤壁市淇滨区动物疾病预防控制中心）朱拥军 （河南省浚县新镇镇畜牧兽医站） 张艳瑞 李淑沛 （河南省鹤壁市雨田兽药经营部）

鸡肠毒综合症病因研究报告(二)—细菌和原虫的分离鉴定

何雷堂 （河南省鹤壁市畜牧局 458030） 何丽丽 （河南省鹤壁市淇滨区动物疾病预防控制中心）朱拥军 （河南省浚县新镇镇畜牧兽医站） 张艳瑞 李淑沛 （河南省鹤壁市雨田兽药经营部）

选取18个发生肠毒综合症的鸡场进行细菌分离和球虫卵囊镜检。结果分离出大肠杆菌(16个场)、鸡白痢菌(1个场)、副伤寒菌(4个场)、禽霍乱菌(2个场)、魏氏梭菌(1个场)、球虫卵囊(1个场)。分离到的细菌和球虫通过消化道传播，呈现点发、散发规律，很少出区域性流行，与肠毒综合症流行规律不一致，据此推断细菌或球虫不是肠毒综合症的原发病因。

肠毒综合症 病因

鸡肠毒综合症自发现以来，在兽医临床上一直不间断的发生，以前呈现散发、点发现象，近年来呈现大面积流行。并呈现以下共性特征：（1）症状典型：料粪、肉便、采食量降低；（2）治疗特点明显：治疗有效、不去病根、反复发病；（3）发生率高。几乎90%以上的鸡场都不同程度的发生该病；（4）病因解释多种多样，计19种之多，囊括了细菌、病毒、寄生虫、营养、环境、毒素等能引起致病的各个方面，其中权威解释是“魏氏梭菌和小肠球虫混合感染”；（5）隐性损失大。表现在饲料转化率低，生长缓慢，后期往往与大肠杆菌、新城疫混合感染，造成死亡上升。这个病对养鸡业的健康发展已构成了重大威胁。笔者长年工作在兽医临诊一线，从2007年开始，对发生肠毒综合症的鸡群从细菌、病毒、寄生虫等方面进行了研究，最后弄清了肠毒综合症的病因。

1 材料和方法

1.1 细菌分离

1.1.1 病料 无菌取出的病死鸡肝脏、脾脏，涂抹于培养基表面，置于37℃培养，分别有有氧和厌氧条件下培养，之后挑出单个菌落进行划线纯培养。

1.1.2 培养基 麦康凯培养基、营养琼脂、血琼脂培养基。同时进行厌氧培养，以期发现厌氧菌。

1.1.3 镜检、生化试验、药敏试验 所有分离菌进行革兰氏染色镜检，悬滴镜检，纯培养后进行药敏试验和生化试验。药敏试验用纸片法，生化试验用生化微量管进行。

1.2 小肠球虫的检查

饱和盐水漂浮法：饱和盐水的配制方法：用500ml水加氯化钠约180g，使其充分搅匀溶化即成。取新鲜的鸡粪5～10g或小肠内容物，放入小玻璃杯内，然后加少量饱和盐水混匀，静置15～30min左右，此时球虫卵即飘浮至液面上，再用直径8mm左右的铂丝环，平行接触液面，沾取一层水膜，将此水膜抖在载玻片上，然后，加盖玻片进行镜检。

2 结果

4年内，先后对18个鸡场的病料进行细菌分离、鉴定情况汇总如表1。

表1 18个鸡场分离细菌情况汇总表

2.1 大肠杆菌的分离结果

2.1.1 培养特性 营养琼脂上，菌落形态是：圆形微凸起、表面光滑湿润、浅灰色、半透明。在麦康凯琼脂平板上，形成中等大小、表面光滑湿润的粉红色菌落。

2.1.2 镜检 分离菌呈革兰氏染色阴性，两端钝圆的短杆菌。用悬滴法做细菌运动性检查，可发现细菌快速移动、转动，证明有鞭毛。

2.1.3 生化试验

表2 大肠杆菌生化试验结果

由表2可知，这16株分离菌能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖产酸产气，M.R.阳性，V.P.阴性，蛋白胨水呈阳性，符合大肠杆菌的生化特征。鉴定该菌为大肠杆菌。

2.1.4 药敏试验 挑出4株分离菌，在麦康凯培养基进行药敏试验，结果如表3。

表3 大肠杆菌药敏试验结果(抑菌圈直径) (mm)

由表3可知，分离的大肠杆菌的耐药谱较广。试验所用4个菌株均对磷霉素钠高度敏感；对丁胺卡那霉素中度敏感；部分菌株对痢特灵中度敏感；对其它8种药物均不敏感。

2.2 鸡白痢沙门氏菌、鸡副伤寒沙门氏菌的分离、鉴定

2.2.1 培养特性 麦康凯培养基上菌落呈透明、无色、圆形凸起，直径为1～2mm。在普通琼脂上，菌落分散，光滑，闪光，透明，微隆起。

2.2.2 镜检 分离菌呈红色、两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌，单个、成对或成丛分布，形态均一。悬滴法检查，有的分离菌株能运动。凡是能运动的统认定为鸡副伤寒沙门氏菌。

2.2.3 生化试验 挑取以上麦康凯琼脂平板培养基上无色小菌落，作革兰氏染色，选择革兰氏阴性菌落，分别斜面上画线，于37℃培养24h。用接种针挑取纯培养物接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、肌醇、鼠李糖、H2S和木糖等生化试验管，各接种3管，37℃培养24h，观察反应情况。

表4 鸡白痢、鸡副伤寒沙门氏菌生化试验

由表4中可以看到S1为鸡白痢沙门氏菌，S2～S5为鸡副伤寒沙门氏菌。生化试验结果符合沙门氏菌的特性，从而证明分离菌均为沙门氏菌，命名为S1、S2、S3、S4、S5。

2.2.4 药敏试验

表5 鸡白痢、鸡副伤寒沙门氏菌的药敏试验(抑菌圈直径) (mm)

卡那霉素 8 N 9 N 12 M 10 N庆大霉素 7 N 8 N 7 N 8 N氟哌酸 6 N 6 N 6 N 6 N丁胺卡那霉素 22.5 G 21.7 G 22.3 G 21.1 G磷霉素 16 G 17 G 15 M 13 M痢特灵 12 M 13 M 11 M 16 G

从药敏试验结果来看，四株沙门氏菌对丁胺卡那霉素高敏，部分菌株对磷霉素、痢特灵高敏，其它药物大多数为不敏感，少部分为中敏。

2.3 禽霍乱(巴氏杆菌)的鉴定试验

2.3.1 培养特性 菌落圆形，光滑，半透明，在鲜血琼脂平板上无溶血现象，在普通平板上生长贫瘠，形成细小的菌落，在麦康凯琼脂平板上不生长。

2.3.2 镜检 将细菌纯培养物制片，革兰氏染色，为阴性细菌，用美蓝或瑞氏染色法染色，显微镜检查，可见两极着色的卵圆形短杆菌。悬滴检查，无运动性。

2.3.3 生化试验

表6 禽霍乱(巴氏杆菌)的生化试验结果

挑取单个菌落进行生化试验，结果如上，生化试验结果符合巴氏杆菌的特性，从而证明分离菌为巴氏杆菌，命名为B1、B2。

2.3.4 药敏试验

表7 禽霍乱(巴氏杆菌)的药敏试验结果 (mm)

可见两株巴氏杆菌均对氟苯尼考、环丙沙星、卡那霉素、庆大霉素、磷霉素高度敏感，对痢特灵、红霉素、氟哌酸、青霉素不敏感。而对链霉素呈现不同的敏感性。

2.4 魏氏梭菌的分离和鉴定

2.4.1 培养特性 鲜血琼脂上可见灰白色、圆形、光滑、边缘呈锯齿状的直径2～4mm的大菌落，周围可见溶血环。无菌采集肠内容物直接接种于厌氧肉汤培养基中，37℃厌氧培养24h，产生大量恶臭气体，培养物混浊。挑一铂金耳培养液涂片镜检，可见大量较纯的魏氏梭菌。

2.4.2 病料镜检 用无菌术取病死鸡的肠壁刮取物抹片革兰氏染色镜检，见大量两端稍钝圆粗短和部份有芽胞的革兰氏阳性梭菌，单独或成双排列，亦有呈短链者。

2.4.3 生化鉴定 可见分离出的细菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖，不发酵甘露醇。

2.4.4 药敏试验 用常规纸片法将分离的细菌做6种药敏感性试验，其抑菌圈直径分别为：青霉素17mm、庆大霉素16mm属于高敏；林可霉素9mm属于低敏；氟哌酸、链霉素与磺胺嘧啶为6mm，不敏感。

2.5 小肠球虫卵囊

在检验的18个鸡场中，只有浚县小河乡梨园村郑良庆鸡场检出了球虫卵囊，而其它17个鸡场未检出。

3 讨论

（1）18个鸡群中分离出了16株大肠杆菌，1株鸡白痢菌，4株副伤寒菌，2株禽霍乱菌，1株魏氏梭菌，1株小肠球虫。这些细菌性或原虫性疾病单独发生时，不会出现本文中所述的肠毒综合症的症状，说明肠毒综合症的发生另有病因，这些细菌性疾病或原虫疾病只是以并发病或继发病的身份出现。（2）肠毒综合症有一个十分明显的特点：发生率高。有时在一个村、乡或县域内，几乎90%以上的鸡场都不同程度的发生该病。细菌和小肠球虫是通过饮水和饲料，而非空气进行传播，因此，上述分离到的细菌和小肠球虫在一个地方不会造成大面积流行，而只是呈现点发病例。从这一点上看，分离的细菌或原虫也不会是肠毒综合症的原发病因。

[1] 王新华. 禽病检验[M]. 成都∶ 四川科学技术出版社. 1996.

[2] 美国禽病学家协会编辑委员会. 禽病原分离鉴定实验室手册[M](第3版). 北京∶ 北京农业大学出版社. 1993.

[3] [美]Y.M.Saif.禽病学[M](第11版). 北京∶ 中国农业出版社. 2005.

[4] 杨树华. 鸡肠毒综合症的综合防制[J]. 现代畜牧兽医, 2008(2)∶ 32-33.

[5] 陈东. 鸡肠毒综合征的再认识[J]. 养禽与禽病防治, 2011, 5∶ 39-41.

[6] 王凯. 一起蛋鸡球虫病并发肠毒综合症的诊治报告[J]. 家禽科学, 2013(5)∶ 39-40.

[7] 李春花. 一例肉鸡肠毒综合症的诊治与分析[J]. 吉林畜牧兽医, 2010 (2)∶ 31-32.

S858.31

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1007-1733(2014)11-0006-03

2014–07–08）