不同方法炮制对杜仲中松脂醇二葡萄糖甙含量影响的实验

楼丽苹

摘要：用HPLC方法测定生杜仲及不同炮制品中松脂醇二葡萄糖甙含量的结果表明，杜仲经炮制后其含量均明显下降，其下降量与炮制时的温度具有相关性，其中以120℃恒温烘60min和120℃恒温烘30min后再蒸30min二种方法所得的样品中的所含松脂醇二葡萄糖甙较高，该二种炮制方法在减少杜仲在炮制过程中有效成分的损失和药材损耗方面优于传统炮制方法和其他炮制方法。通过本实验还提示杜仲经传统方法或其它高温处理的方法炮制使其断丝后，其降压作用有否提高值得进一步探讨。

关键词：杜仲；炮制；松脂醇二葡萄糖甙

【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0075-01杜仲具有补肾安胎、降血压等功效，临床应用较广、药材需要量大。杜仲入药多为炮制品，其炮制方法现行《药典》及各地炮制《规范》均按传统方法规定将杜仲刮去粗皮后用定量食盐水拌匀吸尽后，以武火炒至断丝表面焦黑色。按此方法炮制，其实质是将杜仲炙制成炭状，在炮制过程中药材损耗极大，质量难于控制，其有效成份是否受损亦还未知，且杜仲资源日趋减少，价格昂贵，传统炮制方法是否合理科学，有必要进行研究。

松脂醇二葡萄糖甙（Pinohesiol-di-β-0-glus）为杜仲中降压的有效成分，本实验用高效液相色谱法对杜仲及不同方法炮制品中松脂醇二葡萄糖甙含量进行测定比较，为改进杜仲的炮制方法提供一定的客观依据。

1 实验方法与结果

仪器与材料

仪器：Waters公司高效液相色谱仪

对照品及试剂：松脂醇二葡萄糖甙对照品由陕西省药检所提供。实验所用试剂均为分析纯。

供试样品炮制：

杜仲原药材购于本省临安县医药公司昌化批发部，经鉴定确认为杜仲科植物杜仲Eucommia uimoides oliv.的干燥树皮。将上述杜仲原药材括尽粗皮，切成2cm左右方块，混合均匀，随机分份，分别按以下方法炮制：

生杜仲

（盐炙法）将生杜仲与定量食盐水（每100g杜仲用食盐2g下同）拌匀待吸尽后，置铁锅内炒至一定程度，其中：

B1：用武火加热，翻炒至断丝，表面焦黑色、取出、放凉。

B2：用文火加热翻炒至表面具焦斑，取出放凉。

（炒烫法）：将净河沙加热翻炒至灵活状态，投入盐水拌过吸尽的杜仲，翻炒断丝时，立即取出，筛净河沙。

（恒温烘烤法）：将杜仲置恒温烘烤箱中，一定温度下烘烤一定时间，取出拌入食盐水，待吸尽，干燥。其中：

D1： 120℃烘60min。

D2： 160℃烘30min。

D3： 200℃烘15min。

E、（烘蒸法）：取生杜仲置恒温烘箱中120℃烘30min，取出，拌入食盐水，待吸尽后置蒸具内以流通蒸汽蒸30min（上气后开始计时）取出干燥。

（二）样品供测试液的制备

取杜仲试样品捣成絮状，取约2g，精密称定，置索式提取其中，加氯仿190ml，回流6小时，以除去所含杜仲胶等杂志，残留物挥去氯仿，加入甲醇190ml浸泡过夜，置索式提取器中回流提取6小时，回收甲醇后置10ml容量瓶中以甲醇定容，待测。

（三）HPLC测定方法与结果：

1、色谱条件：色谱柱：Waters公司8SI10径向加压柱；检测器UV280mm；流通相：氯仿-正乙烷-甲醇-乙酸（39：26：32：3）；流速：1ml/min。

2、线性考察：取对照品10mg，以甲醇为溶剂，配置成浓度为1mg/ml的标准溶液，按下述色谱条件在进样量为0.5-3ug时，峰面积与样品浓度呈良好的线性关系。回归方程为Y=0.0016×+0.0108t=0.9987

3、精密度试验：每次进标准品1.5ug，重复5次，求得变异系数C.V=0.35%。

4、回收率试验：分别取样品一定量，准确加入定量标准品，依上法测定，计算回收率为x=100.16%，n=4，s=0.9836，CV=0.98%。

5、样品测定：

取不同方法炮制的杜仲样品甲醇提取液，测定其松脂醇二葡萄糖甙的含量，结果见附表一。

附表一生杜仲及不同炮制品中松脂醇二葡萄糖甙含量

样品松脂醇二葡萄糖

甙含量 %

X±SOP值A0.578±0.072--B10.127±0.012P<0.01B20.255±0.038P<0.01P<0.01C*D10.422±0.026P<0.01P<0.01D20.200±0.011P<0.01P<0.01D30.097±0.023P<0.01P>0.05E0.427±0.025P<0.05P<0.01*样品C未能测出松脂醇二葡萄糖甙

2 讨论

（一）杜仲盐炙炒断丝的加工炮制方法是沿袭旧制的传统方法，现代对改进这一方法的研究有不少报导，入炒烫发，恒温烘烤发等，但如何评定炮制方法的优劣及炮制品内在质量的客观指标均较缺乏，本实验用HPLC法测定生杜仲及其不同炮制品的有效成分之一松脂醇二葡萄糖甙的含量，為杜仲炮制方法的研究提供了客观依据，对杜仲炮制品质量指标的建立具有一定的参考意义。

（二）实验结果表明，杜仲经炮制后，松脂醇二葡萄糖甙的含量均有不同程度的降低，其降低幅度与温度有相应关系。其中样品C（炒烫品）所含松脂醇二葡萄糖甙损失殆尽。B组中B2（炒微焦）含量高于B1（炒焦黑）D组中随着温度升高，其含量依次下降D1>D2>D3，样品E（120℃烘30min，流通蒸汽蒸30min）在炮制过程中松脂醇二葡萄糖甙损失最小。

（三）从以上实验结果得到启示，用传统方法及砂糖发，高温烘烤发炮制杜仲使其断丝，其中降压成分损失很大，所得炮制品是否能保证或提高杜仲的降压作用，应进一步研究探讨。从样品E盒D1所含松脂醇二葡萄糖甙含量高于其它炮制品以及生品含量高于炮制品这一结果中，可得到改革杜仲炮制方法具有可行性的理论依据。