血清胱抑素C在AU2700系统上测定的方法学评价

陈爱金 涂斐佩

摘要：目的：探討胶乳凝集法在奥林帕斯AU2700非原装试剂自建系统中测定血清胱抑素C的性能评价。方法：方法评价血清胱抑素C测定的精密度、回收率、检测限、干扰因素、线性范围。结果：胶乳凝集法测定血清Cys C批内变异系数为1.52 %（低值） 、1.25 %（高值） 日间变异系数为2.73 %（低值） 、1.77 %（高值）平均回收率为97.3 % 检测线性范围为0.1～ 6.00 mg/L。总胆红素正干扰在573 mol/L，血红蛋白负干扰6 g/L ，甘油三酯负干扰12 mmol/L以下对Cys C偏差﹤5 % 。基本不受溶血、黄疸和脂血干扰。结论：：胶乳凝集法测定血清Cys C快速、准确、精密度高，可作为肾脏功能损伤的指标。

关键词：胱抑素C肾小球滤过率肌酐清除率

【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0040-01为了评价该试剂盒的性能指标我们依据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁发的文件对该法测定CysC进行初步评价。

1 材料与方法

1.1 实验标本：对照组40例无心肝肾等病史男20例，女20例41～59岁。肾脏病组40例，男21例，女20例，年龄16～58岁。

1.2 仪器与方法：血清Cys C采用OLYMPUSAU2700测定血清Cys C试剂采用美国G.cell公司胶乳凝集法检测试剂盒。主要反应参数为血清3μl，？试剂1180μl，试剂260μl，测定波长570/800nm，固定时间法正反应读点13～27。

1.2.1 方法学评价：（1）精密度取高低值2个不同水平的混合血清Cys C样品每天测定2次（2次间隔不少于2h）每次测定均做双份连续测定20d按NCCLS EP-5A文件进行精密度评价；（2）线性分析取0.1mg/L和6.00mg/L的混合血清按0/4、1/3、2/2、3/1、4/0比例混合制备5个不同Cys C水平的标本，各测定4次按NCCLS EP-6A文件进行线性分析；（3）干扰试验将混合血清分成2份，1份加入1/10体积的含胆红素5730mol/L的高总胆红素血清，另一份不加。然后将两标本按照4/0、3/1、2/2、1/3、0/4比例混合成5个不同浓度，每份标本重复测定10次，计算平均干扰值。用同样方法加入含血红蛋白为12g/L的溶血物和含甘油三酯为18mmol/L的脂肪乳 重复测定10次计算各自的干扰值。干扰值=各组均值-未加干扰物的各组均值。按照NCCLS EP-7文件进行干扰试验评价；（4）最低检测浓度以9g/L NaCl溶液作标本测定21次，用x+3s计算最低检测浓度；（5）回收率取Cys C（0.68？mg/L）样本分别与标准Cys C溶液（0.524mg/L）等体积混合，测定混合液中Cys C含量，计算出样本中加入标准Cys C后的测得值（回收值）以求得回收率

1.2.2 试剂和标本的稳定性：试剂1和2分别放入AU2700中每5天测定1次试剂空白同时测定高低质控血清将混合血清标本分装后分别置于室温4℃、-20℃定期测定Cys C浓度。

2 结果

2.1 精密度评价：采用EP-5A可以对批内批间日间及总精密度进行计算高低混合血清批内精密度分别为1.25%、1.52%日间精密度分别为1.77%、2.73%

2.2 线性分析：线性范围内不同浓度的稀释水平重复4次取均值本法线性回归方程为Y=0.9966X+0.0183

r=0.9999，表明Cys C在0.1～6.0mg/L范围内线性良好

2.3 最低检测浓度：21次结果中11次为0.01mg/L，8次为0mg/L，2次为0.02mg/L。x=0.0071mg/L，s=0.00644。最低检测限为0.03mg/L。

2.4 回收率在血清：Cys C为0.68 mg/L时加入等体积浓度分别为0.5 mg/L、2 mg/L、4 mg/L。Cys C的标准液加入标准液的浓度分别为1/2原标准液浓度。回收率分别为（96%.97%、99%）

2.5 干扰试验：总胆红素正干扰在573mol/L血红蛋白负干扰6g/L，甘油三酯负干扰12mmol/L以内相对偏差﹤5%

2.6 试剂和样本的稳定性：试剂置4℃30d内试剂空白保持不变，高低质控血清变化值﹤1%，血清标本置于室温（25℃）6d，4℃ 12d及-20℃ 30d，血清Cys C变化≤5%

3 讨论

NCCLS文件对于检验医学的标准化具有重要的指导意义[1]，本研究全部试验过程使用单一批号试剂和校准品。试验结果显示该CysC试剂盒具有较好的精密度，批内日间及总变异系数均﹤5%，检测线性范围为0.1～6.00mg/L，基本不受溶血黄疸和脂血的影响，最低检测限0.03mg/L，平均回收率为97.3%。能够较好地满足临床需要试剂在仪器仓中开盖长达30d，无需定标，试剂吸光度几乎无变化。说明本试剂胶乳包被技术稳定液体试剂均匀一致，不会随着时间的延长出现胶乳沉淀的现象。血清标本置4℃冷藏12d血清Cys C值基本不变，说明样品易于保存。本研究的方法是临床实验室常规测定血清Cys C的首选方法近年来，国外对Cys C的临床应用报道较多，认为其血浓度能够较准确地反映GFR[2]，Cys C可以自由通过肾小球滤过，几乎完全在肾小管重吸收及分解代谢，因此Cys C是反映肾小球滤过率的一个非常好的标志物。

Cys C的浓度不受炎症反应、恶性肿瘤、肌肉、性别及年龄等多种外界因素的影响，更证明Cys C成为优于传统的血尿素、尿酸、肌酐和内生肌酐清除率检测的新的肾功能评价指标。

参考文献

[1]Laverdiere M， Restieri C， Habel F. Evaluation of the in vitro activity of caspofungin against bloodstream isolates of Candida speciesfrom cancer patients：comparison of Etest and NCCLS reference methods.Int J Antimicrob Agents，2002，20：468-471

[2]Le Bricon T，Thervet E，Froissart M，et al.Plasma cystatin C issuperior to 24 -h creatinine clearance and plasma creatinine for estimation of glomerular filtration rate 3 months after kidney transplantation.Clin Chem，2000， 46：1206-1207