TBX2基因和FEZ1基因在胃癌中的表达及其临床意义

牟时斌，崔 峰，王二数，王继红

（1.河北省临西县人民医院病理科，河北 临西 054900；2.邢台矿业集团总医院病理科，河北 邢台 054000；3.河北省邢台市第一医院急诊科，河北 邢台054000；4.河北省邢台市第三医院麻醉科，河北 邢台 054000）

TBX2基因和FEZ1基因在胃癌中的表达及其临床意义

牟时斌1，崔 峰2，王二数3，王继红4

（1.河北省临西县人民医院病理科，河北 临西 054900；2.邢台矿业集团总医院病理科，河北 邢台 054000；3.河北省邢台市第一医院急诊科，河北 邢台054000；4.河北省邢台市第三医院麻醉科，河北 邢台 054000）

目的 探讨TBX2、FEZ1在正常胃黏膜、上皮内肿瘤及胃腺癌中的表达及其临床病理意义。方法 采用免疫组织化学方法检测30例正常胃黏膜、30例上皮内肿瘤及80例胃腺癌中TBX、FEZ1蛋白质的表达。应用统计学软件SPSS15.0分析其与临床病理及预后的关系。结果 TBX2在低分化组织中的阳性表达高于高分化组织（P＜0.05），临床分期 Ⅳ期的表达高于Ⅰ期（P＜0.05），肌层浸润 ＞1／2的表达高于≤1／2的表达（P＜0.05）；FEZ1在低分化组织中的阳性表达低于高分化组织（P＜0.05），临床分期Ⅲ期的阳性率表达低于Ⅰ期的表达（P＜0.05），肿瘤直径＞4cm阳性表达低于≤4cm的表达（P＜0.05），肌层浸润 ＞1／2的表达低于≤1／2的表达（P＜0.05），有淋巴结转移的表达低于无淋巴结转移的表达（P＜0.05），年龄＞60岁的表达低于≤60岁的表达（P＜0.05）。结论TBX2和FEZ1在胃黏膜发生发展中发挥着重要作用，前者发挥着原癌基因的作用，后者发挥着抑癌基因的作用。

胃肿瘤；病理学，临床；免疫组织化学

胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，国内胃癌较为常见，且病死率高，居恶性肿瘤死亡的首位。胃癌的发生是一个多基因、多因素参与的多阶段过程，显性癌基因的异常激活与抑癌基因的失活在其中扮演着重要角色。目前对一些原癌基因和抑癌基因在胃癌中的表达已经有了一定的认识，而对大鼠T-框蛋白（T-box protein 2，TBX2）、抑癌蛋白（FEZ1）在胃癌中表达及相互作用还知之甚少，本研究运用免疫组织化学Envision两步法检测TBX2和FEZ1在正常胃黏膜、胃黏膜上皮内肿瘤与胃癌中的表达，并分析其与肿瘤临床参数的关系，进而探讨二者在胃癌发生、发展中的作用及可能的作用机制，旨在为胃癌的早期诊断及患者的预后提供新的依据。

1 资料与方法

1.1 标本来源：选取2006年10月—2012年7月临西县人民医院保存的经10%福尔马林固定，石蜡包埋的胃组织标本 110例，其中胃黏膜上皮内肿瘤标本30例，胃腺癌标本80例，另选取30例正常胃黏膜标本30例作为对照组。80例胃癌患者均为初治病例，年龄40～70岁，中位年龄55岁；手术分期按WHO胃癌TNM分期标准，Ⅰ期30例，Ⅱ期27例，Ⅲ期20例，Ⅳ期3例；病理类型全部为腺癌，病理分级高分化15例，中分化35例，低分化30例；淋巴结转移阳性25例，阴性55例；肌层浸润≤1／2者38例，＞1／2者42例。

1.2 主要试剂：即用型TBX2鼠抗人单克隆抗体、即用型FEZ1鼠抗人单克隆抗体及免疫组织化学试剂盒均购自北京中杉金桥公司，免疫组织化学采用Envision两步法，切片常规脱蜡至水，柠檬酸盐加热抗原修复，具体步骤参照试剂盒说明书进行，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木精复染细胞核。

1.3 结果判断：TBX2免疫组织化学染色以细胞核和（或）胞质中出现黄色至棕褐色颗粒视为阳性着色；FEZ1染色结果以细胞膜出现背景清晰的黄色或棕黄色颗粒为阳性。采用半定量积分法判断结果。根据染色强度分为4级，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；根据阳性细胞数所占百分比分为4级，阳性细胞数＜10%为 1分，11%～50%为1分，51%～75%为2分，＞76%为3分。两项得分相乘，0～3分为（－），4～5分为（＋），6～8分为（＋＋），＞9分为（＋＋＋）。

1.4 统计学方法：应用SPSS15.0统计软件进行数据处理，分别进行秩和检验、χ2检验、Spearman等级相关检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TBX2、FEZ1在胃黏膜病变组织中的表达：TBX2蛋白主要定位于癌细胞胞质，正常胃黏膜组、上皮内肿瘤组和胃腺癌组表达的阳性率呈逐渐升高趋势，胃腺癌组阳性表达率高于正常胃黏膜组和上皮内肿瘤组（P＜0.05或＜0.01）；FEZ1蛋白表达主要定位于细胞胞质，正常胃黏膜组、上皮内肿瘤组和胃腺癌组表达的阳性率呈逐渐降低趋势，胃腺癌组和上皮内肿瘤组阳性表达率均低于正常胃黏膜组（P＜0.01）。见表1。

2.2 不同病理参数TBX2、FEZ的表达：TBX2在低分化组织中的阳性表达高于高分化组织（P＜0.05）；临床分期 Ⅳ期的表达高于Ⅰ期（P＜0.05）；肌层浸润 ＞1／2的表达高于≤1／2的表达（P＜0.05）。FEZ1在低分化组织中的阳性表达低于高分化组织（P＜0.05）；临床分期Ⅲ期的阳性率表达低于Ⅰ期的表达（P＜0.05）；肿瘤直径＞4cm阳性表达低于≤4cm的表达（P＜0.05），肌层浸润 ＞1／2的表达低于≤1／2的表达（P＜0.05）；有淋巴结转移的表达低于无淋巴结转移的表达（P＜0.05）；年龄＞60岁的表达低于≤60岁的表达（P＜0.05）。见表2。

2.3 TBX2与FEZ1表达的相关性：Spearman等级相关分析显示，TBX2与 FEZ1的表达呈负相关（rs＝－0.430，P＜0.01）。

表1 3组TBX2和FEZ1在胃黏膜中表达的比较Table 1 Expression of TBX2 and FEZ1 in gastric muscosa （n，%）

表2 胃腺癌中TBX2、FEZ1的表达与临床病理参数的关系Table 2 Correlation between expression of TBX2，FEZ1 and clinic pathologic parameters （n，%）

3 讨 论

TBX2基因是 t-box基因家族成员之一。TBX2位于染色体17q23，其编码蛋白TBX2主要通过其C末端的转录抑制结构域发挥转录抑制作用，是一个指导胚胎、组织器官轴发育的重要转录因子［1］。TBX2在多种肿瘤中高表达，并且与细胞恶性转化、肿瘤细胞增殖以及细胞凋亡等有关，其促进肿瘤的发生发展的作用日益受到关注［2］。首先，TBX2可以协同RAS、MYC等基因使细胞向恶性转化；其次，它还可以抑制p19ARF-MDM-p53通路的关键蛋白p19ARF的表达，促使细胞绕过衰老途径，而使细胞周期停滞在G1／S和（或）G2／M期，从而抑制细胞的衰老与凋亡，当这种致病基因的异常表达积累达到时间和量的极限而使细胞突破这一临界值时，就可能最终导致细胞的恶性转化；最后，将组蛋白去乙酰化酶 1（HADC1）转运到p21基因的表达启动子位置，通过 HADC1抑制p21基因的表达而抑制细胞凋亡，参与p21WAF 1／CIP1突变的致瘤途径［3－4］。研究［5－6］表明 TBX2在恶性肿瘤如子宫内膜癌、胰腺癌、乳腺癌、肾上腺癌、子宫颈癌及黑色素瘤等恶性肿瘤中都有高表达和（或）扩增。本研究发现TBX2在胃腺癌中的表达明显高于正常胃黏膜。说明TBX2蛋白过表达在胃黏膜病变晚期发挥了明显的作用，TBX2基因活化是癌变过程中的晚期事件。本研究还显示随着胃癌的分化程度降低、临床分期增加、肌层浸润加深TBX2阳性率呈明显增高。说明TBX2可以促进癌变的进一步演进，使肿瘤的恶性程度增加。

FEZ1／LZTS1全长约1.5mb，位于人类染色体8p21.3的D8S261位点附近，具有 3个可能的转录本，分别含有4、5、2个外显子。免疫组织化学显示FEZ1蛋白主要存在于胞质中，少部分位于胞核内［7］。本研究结果表明，在正常胃黏膜、胃黏膜上皮内肿瘤变、胃腺癌中，FEZ1的表达逐渐降低，并且随着胃癌的分化程度降低、肌层浸润加深、肿瘤体积增大及出现淋巴结转移和年龄的增加，FEZ1蛋白的表达逐渐降低。说明FEZ1基因在胃癌的演进中起到了抑癌基因的作用。

作为抑癌基因，FEZ1在前列腺癌、食管癌、头颈部癌肝癌及胆管癌的研究中均显示该蛋白的表达缺失或下调［8－9］，Ishii等［10］对前列腺癌、食管癌和乳腺癌等多种上皮肿瘤进行分析后发现了在2个食管癌及1个前列腺癌细胞株中FEZ基因存在点突变。FEZ1的畸变和失活可能在包括胃癌在内的几种人类肿瘤中起作用。

本研究结果显示TBX2与FEZ1在胃癌中表达呈负相关，并且TBX2的异常表达和FEZ1的表达降低均与胃癌肿瘤分化程度、肌层浸润深度有关。提示在胃癌的发生发展过程中TBX2和FEZ1可能发挥了相对立的作用。总之，TBX2与FEZ1基因可能在胃癌的发生发展中密切相关，有望成为胃癌发生的生物学标记和肿瘤基因治疗的新靶点，可为胃癌的诊断和治疗提供新的手段。

［1］TENG H，PARKER MI，PRINCE S.Functional characterization of cis-acting elements involeved in basal transcription of the human TBX2 gene：a new insight into the role of Sp1 in transcriptional regulation［J］.Gene，2012，423（1）：8－13.

［2］DOBRZYCKA KM，KANG K，JIANG S，et al.Disruption of scaffold attachment factor B1 leads to TBX2 up-regulation，lack ofp19ARF induction，lack od senscence，and cell immortalization［J］.Cancer Res，2011，66（16）：7859－7863.

［3］VANCE KW，CARREIRA S，BROSCH G，et al.TBX2 is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senesene in melanoma［J］.Cancer Res，2013，65（6）：2260－2268.

［4］BILICAN B，GODING CR.Cell cycle regulation of the T-box transcription factor TBX 2［J］.Exp Cell Res，2011，312（12）：2358－2366.

［5］ABRAHAMS A，PARKERMI，PRINCES.TheT-box transcription facter TBX2：itsrolein developmentand possible implication in cancer［J］.IUBMB Life，2010，62（2）：92－102.

［6］JACOBS JJ，KEBLUSEK P，ROBANUS-MAANDAG E，et al.Senescene bypass screen identifies TBX2，which represses Cdkn2a（p19（ARF））and is amplified in a subset of human breast cancers［J］.Nat Genet，2012，26（3）：291－299.

［7］ISHII H，VECCHIONE A，MURAKUMO Y，et al.FEZ1／ZTS1 gene at 8p 22suppresses cancer cell growth and regulates mitosis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，98（18）：10374－10379.

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［9］KAWAKI L，MIYAZAKI M，ITO H，et al.Allelic loss in human intrahepatic cholangiocarcinoma：correlation between chromosoma 8p22 and tumor progression［J］.Int J Cancer，2000，88（2）：228－231.

［10］ISHII H，BAFFA，R，NUMATA SI，et al.The Fezl gene at chromosoma 8p22 encodes a leucine-zipper protein，and its expression is altered in multiple human tumors［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，96（7）：3928－3933.

（本文编辑：许卓文）

EXPRESSION OF TBX2 AND FEZ1 GENE IN GASTRIC ADENOCARCINOMA AND THEIR CLINIC PATHOLOGY ROLE

MU Shibin1，CUI Feng2，WANG Ershu3，WANG Jihong4
（1.Department of Pathology，the People＇s Hospital of Linxi，Hebei Province，Linxi054900，China；2.Department of Pathology，the General Hospital of Xingtai Mining（group）Co.ltd，Hebei Province，Xingtai054000，China；3.Department of Eemeryency，the First Hospital of Xingtai City，Hebei Province，Xingtai054000，China；4.Department of Aneshesiology，the Third People＇s Hospital of Xingtai，Hebei Province，Xingtai054000，China）

ObjectiveTo investigate the expression of T-box protein 2（TBX2）and antioncogene FEZ1 in normal gastric muscosa，intraepithelial tumor and gastric adenocarcinoma and the roles of their clinic pathology.MethodsThe exprssion of TBX2 and FEZ1 were detected by immunohistiochemistry in normal gatromucosa，intraepithelial tumor and gastric carcinoma.Statistic soft ware SPSS15.0 was used to analyze the clinicopathological significance and its relationship to prognosis.ResultsThe positive expression rate of TBX2 protein was higher in low differentiated group than in high differrentiated one（P＜0.05），and TBX2 in group with stageⅣwas also higher than in group with stageⅠ（P＜0.05），and also in group with over one half deeply muscle infiltration was significantly higher than in group with under one-half infiltration（P＜0.05）.The positive expression rate of FEZ1 protein was lower in low differentiated group than in high differrentiated one（P＜0.05），so was it in group with tumor diameter over 4cm than ingroup under 4cm （P＜0.05）；the expression rate of FEZ1 was lower in group with over 1／2 muscle infiltration than in group with under1／2 infiltrattion，so was it in group with lymph nodule metastasis than in group without lymph nodule metastasis（P＜0.05）；also it was higher in group with the age over 60 years old than in group under 60 years old（P＜0.05）.ConclusionTBX2 and FEZ1 were of great importance in the development and prognosis of gastric adenocarcinoma.The former played an important role of oncogene with the latter anti-oncogene.

stomach neoplasm；pathology，clinical；immunohistiochemistry

R735.2

A

1007-3205（2014）10-1159-04

2014－01－24；

2014－04－10

牟时斌（1977－），男，河北清河人，河北省临西县人民医院主治医师，医学学士，从事临床外科病理学研究。

10.3969／j.issn.1007-3205.2014.10.014