老年原发性高血压患者外周血淋巴细胞亚群及活化状态的研究

王珍妮 冯杜金 邱莲女

老年原发性高血压患者外周血淋巴细胞亚群及活化状态的研究

王珍妮 冯杜金 邱莲女

目的探讨老年原发性高血压患者外周血淋巴细胞亚群活化状态变化。方法采用流式细胞术检测65岁以上老年原发性高血压患者（观察组）170例和体检健康者（对照组）50例外周血淋巴细胞亚群以及活化状态。结果观察组B淋巴细胞表达的CD3-CD19+高于对照组，T淋巴细胞活化表达的CD3+CD8+CD38+高于对照组,CD3+HLA-DR+, CD3+CD8+HLA-DR+以及NK细胞表达的CD16+CD56+高于对照组（均P＜0.05）。T淋巴细胞表达的CD3+低于对照组（均P＜0.05）。T细胞亚群表达的CD3+CD4+、CD3+CD8+比例下降,调节性T细胞CD3+CD4+CD25+比例上升，但与对照组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论老年原发性高血压患者B淋巴细胞、NK淋巴细胞和CD8+T细胞的活化能力显著增加。

流式细胞术；活化淋巴细胞；原发性高血压

老年原发性高血压是一种常见病、多发病。临床病程长，对心、脑、肾等重要器官可造成严重损伤，长期血压增高可造成老年人脑血管意外的发生。其发病机制十分复杂，常常是多系统、多因素综合作用的结果，越来越多的研究表明高血压常伴随免疫功能的异常，高血压并发症常有免疫细胞的介入。为了进一步探讨老年原发性高血压患者免疫细胞的状态，本研究检测了老年原发性高血压Ⅰ期患者9项淋巴细胞亚群以及活化淋巴细胞的表型，为研究老年高血压的发生、发展及临床治疗提供参考依据。

1 对象和方法

1.1 对象选择2010年1月至2013年6月在浙江省人民医院望江疗养院疗养的65岁以上老年原发性高血压患者170例为观察组，其中男性90例，女性80例，年龄65～80（72±8）岁，参照WHO高血压分类标准，确诊为原发性高血压，且均为Ⅰ期。对照组为我院健康体检者50例，其中男性24例，女性26例，年龄63～82（72±10）岁，经临床检测无高血压，外周血细胞计数正常，无糖尿病、感染、肿瘤、自身免疫性疾病等，肝、肾功能检查亦无异常。两组均空腹8h以上于清晨采集血液直接送检。两组性别、年龄差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

1.2 仪器和试剂流式细胞仪为美国Beckton Dickinson公司FACSCantoⅡ，淋巴标记抗体CD3FITC/ CD16CD56PE/CD45PerCP-Cy/CD19-APC、CD4 FITC/CD25 PE/CD3 PerCP-Cy及CD8 FITC/ CD38 PE/CD3 PerCP/Anti-HLA-DR APC均购自美国Beckton Dickinson公司。

1.3 流式细胞仪检测方法测定管分别加入20μl-CD3FITC/CD16CD56PE/CD45PerCP-Cy/CD19-APC，CD4 FITC/CD25 PE/CD3 PerCP-Cy及20μl CD8 FITC/CD38 PE/CD3 PerCP/Anti-HLA-DR APC标记的鼠抗人单克隆抗体,加入100μl全血混匀,室温避光放置15min后加入BD溶血素，测定前用质控微球调校仪器，以保证其荧光检测的CV值＜2%，然后流式细胞仪检测。每个测定管收集10 000个以上细胞，记录CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，CD3-CD19+，CD16+CD56+，CD3+HLA-DR+，CD3+CD4+CD25+，CD3+-CD8+CD38+，CD3+CD8+HLA-DR+的表达，结果以占淋巴细胞百分率（%）表示。

1.4 统计学处理采用SPSS 13.0统计软件,计量资料以表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 两组外周血淋巴细胞亚群表达比较见表1。

表1 两组淋巴细胞亚群表达比较（%）

由表1可见，观察组T淋巴细胞表达的CD3+降低，NK细胞表达的CD16+CD56+、B淋巴细胞表达的CD3-CD19+升高，与正常组比较差异均有统计学意义意义（均P＜0.05），观察组T细胞表达的CD3+CD4+、CD3+CD8+较对照组降低，但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.2 两组外周血活化淋巴细胞及调节性T细胞表达比较见表2。

表2 两组活化淋巴细胞及调节性T细胞表达比较（%）

由表2可见，调节性T细胞CD3+CD4+CD25+表达阳性率与对照组差异无统计意义（P＜0.05），观察组T细胞表达的CD3+HLA-DR+、CD3+CD8+CD38+以及CD3+CD8+HLA-DR+表达均高于对照组（均P＜0.05）。

3 讨论

原发性高血压病是一种以动脉血压升高为主要特征，可并发心脏、血管、脑、肾脏与眼底视网膜等靶器官损害以及代谢改变的全身系统疾病。发病机制十分复杂，包括肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAS）及血管内皮功能的异常等[1-2]。越来越多的研究显示高血压伴随免疫功能的异常，免疫因素的介入加剧并发症的发生，而人体的正常免疫功能状态有赖于各种免疫细胞，特别是淋巴细胞亚群之间的相互协调，产生适度的免疫应答。CD3+是所有T细胞表面标志，是机体免疫的基础。T淋巴细胞根据表面分子表达不同，可分为辅助性T细胞（CD4+）和细胞毒性T细胞（CD8+），CD4+T淋巴细胞接受抗原刺激后分化为Th1和Th2细胞,分泌多种细胞因子辅助B细胞和效应T细胞活化上调免疫功能。CD4/ CD8可直接反映宿主T淋巴细胞亚群的紊乱状态，且在一定程度上可间接了解机体细胞免疫功能情况。而HLA-DR属于HLA-Ⅱ类抗原,它主要分布在外周血B细胞、单核细胞及激活的T淋巴细胞上，是淋巴细胞活化的标志，B淋巴细胞在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞，进而分化为浆细胞，合成和分泌各类免疫球蛋白[3-6]。许多研究发现自发性高血压大鼠（SHR）外周血中T淋巴细胞数量明显减少，T淋巴细胞亚类比例失调等免疫功能异常，血管内出现激活的T淋巴细胞。实验中将正常胸腺移植到SHR体内并重建其正常的免疫功能，能够显著降低SHR的动脉血压[7-8]。本研究结果发现原发性高血压患者CD3+T淋巴细胞显著下降，表型CD4+和CD8+比例没有显著改变，但T淋巴细胞活化状态CD3+HLA-DR+、CD8+CD38+、CD3+CD8+HLA-DR+明显增加，上述的免疫激活和B淋巴细胞功能的增加，进而可能分泌产生IgG、IgM等抗体，导致形成抗原-抗体复合物，并且激活补体引起血管内皮的损伤，而T淋巴细胞活化浸润加速了血管炎症反应，从而加速原发性高血压的产生[9]。同时在观察组中NK细胞也明显增加，NK细胞来源于骨髓淋巴样造血干细胞，是细胞免疫中非特异成分，被激活后执行效应功能，在机体免疫调控中释放淋巴因子如IFN-α、IL-2等，对机体免疫功能进行调节[10]。研究发现NK细胞参与了妊娠期高血压的发生，NK细胞主要作用在于胚胎的植入和母胎界面免疫平衡的维持，过度的激发影响胎盘的发育和功能成熟，导致妊娠期高血压的发生，因此提示NK细胞也可能参与老年性高血压的发生、发展[11]。调节性T细胞是一组免疫抑制性功能的T淋巴亚群，CD4+CD25+Treg是其家族中最主要的一群，Barhoumi等[12]发现调节性T细胞通过抗炎作用抑制血管紧张素Ⅱ所介导的血管损害。Kassan M等[13-14]通过注射调节性T细胞至SHR模型中，发现显著减少了巨噬细胞的活化和渗透，加强了冠状动脉内皮的缓和。本研究检测了老年原发性高血压Ⅰ期的调节性T细胞，发现调节性T细胞的数量没有明显的改变，而高血压是处于不断进展状态的心血管综合征，进一步发展可以导致心脏和血管功能与结构的改变。为降低高血压并发症及其发展，或许调节性T细胞可以提供一个新的思路。

本研究显示，老年原发性高血压患者存在细胞免疫与体液免疫功能紊乱，它们之间密切联系，免疫紊乱使得老年人更加容易感染，加剧了疾病的发生。通过免疫机制的研究或许可以为我们防止老年原发性高血压及并发症提供一些新的思路。

[1]Sasamura H,Azeqami T,Itoh H.Current status of vaccination therapy for hypertension[J].Nihon Rinsho，2012，70（9）：1627-1632.

[2]Zeymer U,Dechend R,Deeq E，et al.Aliskiren for the treatment of essential hypertension under real-life practice conditions:design and baseline data of the prospective 3A registry[J].Int J Clin Pract，2012，66（3）：251-261.

[3]Eyerich,K.&Novak,N.Immunology of atopic eczema:overcoming the Th1/Th2 paradigm[J].Allergy,2013,68（8）：974-982.

[4]Collado J A,Alvarez I,Ciudad M T,et al.Composition of the HLA-DR-associated human thymus peptidome[J].Eur J Immunol, 2013,43（9）：2273-2282.

[5]Tanaka H,Taniuchi I.The CD4/CD8 Lineages:Central Decisions and Peripheral Modifications for T Lymphocytes[J].Curr Top Microbiol Immunol,2013,Epub ahead of print.

[6]Hong J J,Amancha P K,Rogers K，et al.Spatial alterations between CD4（+）T follicular helper,B,and CD8（+）T cells during simian immunodeficiency virus infection:T/B cell homeostasis,activation, and potential mechanism for viral escape[J].J Immunol,2012,188（7）：3247-3256.

[7]Collett J A,Hart A K,Patterson E，et al.renal angiotensin II type 1 receptor expression and associated hypertension in rats with minima SHR nuclear genome[J].Physiol Rep,2013，1（5）：e00104.

[8]Blagonravov M L,Frolov V A,Azova M M，et al.Characteristics of Circadian Rhythm of Blood Pressure during Long-Term Hypertension Development in SHR Rats[J].Bull Exp Biol Med,2013，155（5）：612-614.

[9]Rosskopf D,Hartung K,Hense J，et al.Enhanced immunoglobulin formation of immortalized B cells from hypertensive patients[J]. Hypertension，1995，26（3）：432-435.

[10]Sun H,Sun C,Tian Z.NK cells in immunotolerant organs[J].Cell Mol Immunol,2013,10（3）：202-212.

[11]Ashkar A A,Di Santo J P,Croy B A，et al.Interferon gamma contributes to initiation of uterine vascular modification,decidual integrity,and uterine natural killer cell maturation during normal murine pregnancy[J].J Exp Med,2000,192：259-270.

[12]Kasal D A,Barhoumi T,Li M W，et al,T regulatory lymphocytes prevent aldosterone-induced vascular injury[J].Hypertenison,2012, 59（2）：324-330.

[13]Kassan M,Galan M,Partyka M,et al,Interleukin-10 released by CD4（+）CD25（+）natural regulatory T cells improves microvascular endothelial function through inhibition of NADPH oxidase activity in hypertensive mice[J].arteroscler Thromb Vasc Biol,2011,31（11）：2534-2542.

[14]Kassan M,Wecker A,Kadowitz P,et al.CD4+CD25+Foxp3 regulatory T cells and vascular dysfunction in hypertension[J].J Hypertens, 2013,31（10）:1939-1943.

The study of activation state of peripheral lymphocyte subsets in elder with essential hypertension

WANG Zhenni,FENG Dujin,QIU Liannv.Department of Clinical Laboratory,Zhejiang Provincial People′s Hospital,Hangzhou 310014,China

QIU Liannv,E-mail:lab_qln@126.com

Objective To investigate the activation state of peripheral lymphocyte subsets in elder with essential hypertension.Methods Peripheral lymphocyte subsets and activation state were analyzed by flow cytometry in 170 elder with essential hypertension and 50 healthy people.Results The expressions of CD3-CD19+of B lymphocyte, CD3+CD8+CD38+of T lymphocyte,CD3+HLA-DR+,CD3+CD8+HLA-DR+and CD16+CD56+of NK cell were significantly higher in elder with hypertension than in healthy person(all P＜0.05).The CD3+CD8+，CD3+CD4+and CD3+CD4+CD25+of T lymphocyte were not different between them(all P＞0.05).Conclusion The activation of B lymphocyte cell,NK cell and CD8+T lymphocyte increases in elder with hypertension.

Lymphocyte subset;Activated lymphocyte;Essentialhypertension

2013-12-09）

（本文编辑：马雯娜）

浙江省自然基金资助项目（项目编号：LH12H16019）

310014杭州市浙江省人民医院检验中心

邱莲女，E-mail:lab_qln@126.com