慢性乙型肝炎患者乙肝病毒大蛋白检测分析

张丹

【摘要】目的：通过检测乙肝患者血清中乙肝病毒表面抗原大蛋白（LHBs）、HBV DNA以及HBeAg，探讨LHBs与HBV DNA的关系，研究LHBs反映HBV复制情况的可靠性，揭示HBeAg阴性乙肝患者检测HBeAg的临床意义。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对LHBs和HBeAg进行检测；采用荧光定量PCR方法对HBV DNA进行检测。结果 171份乙肝患者HBV DNA、LHBs的检测结果显示：LHBs的检测结果与HBV DNA的检出结果差异无统计学意义（P>0.05）。不同HBV M模式的HBV DNA与LHBs的检出结果差异无统计学意义（P>0.05）。HBV DNA拷贝数的对数值与LHBs含量具有相关关系，相关系数r=0.917。结论 LHBs能够反映出乙肝病毒的复制情况，血清中的LHBs与HBV DNA具有较好的相关性，是反映HBeAg阴性乙肝患者病毒复制情况的新的血清免疫学指标。

【关鍵词】 慢性；乙型 ；肝炎

【中图分类号】R512.62 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0197-01

乙肝病毒S基因编码的表面大蛋白（Hepatitis B Virus Large Surface Protein，LHBs）在空间上具有2种不同的跨膜构象，作为HBV的包膜蛋白，内侧可以和HBV核壳体膜结合，外侧可与病毒受体结合，是HBV颗粒成熟包装的关键。近年来，随着对LHBs中PreS抗原的研究，发现PreS区的特有拓扑结构在乙肝病毒感染与复制等过程中起重要作用。我国慢性HBV感染患者，尤其是肝硬化患者中HBeAg阴性者高达60%以上，评估HBV复制的指标主要有HBV DNA和HBeAg，但是HBeAg阴性的乙肝患者除HBV DNA外，无其他标志物可反映HBV复制程度。本研究旨在探讨将LHBs用于反映HBeAg阴性乙肝患者HBV复制程度的可靠性。

1 对象与方法

1.1 对象 乙肝患者血清标本来自我院2010年8月～2012年9月门诊或住院乙肝患者171例，其中男92例，女79例。年龄18～68，平均41.3岁。

1.2 检测方法 乙型肝炎血清标志物检测试剂盒（河南华美生物工程有限公司）；LHBs定量检测试剂盒（北京热景生物技术有限公司）；HBV DNA实时荧光聚合酶反应（PCR）定量检测试剂盒（深圳匹基生物工程有限公司）。

1.3 统计分析 采用SPSS 12.0软件进行统计，计量资料组间差异采用χ2检验，计数资料组间差异采用方差分析。

2 结果

2.1 HBeAg阴性和阳性组中LHBs及HBV DNA的阳性率 检测171例慢性乙肝患者血清标本，LHBs和HBV DNA的总阳性率均为74.9%。在46例HBeAg阳性乙肝患者中LHBs和HBV DNA的阳性率分别为97.8%和100%，二者的检出率无明显差异；在125例HBeAg阴性的乙肝患者中LHBs和HBV DNA的阳性率分别为66.4%和65.6%，二者的检出率差异无统计学意义（χ2=0.02，P>0.05）。

2.2 HBeAg阴性乙肝患者中LHBs和HBV DNA检出符合率 在HBeAg阴性但是HBV DNA阳性的82份标本中，LHBs阳性率为82.2%（68+82），在HBeAg阴性乙肝患者中LHBs与HBV DNA的检出符合率为（68/28）/125=76.8%。

2.3 LHBs阳性率及含量与HBV DNA拷贝数之间的比较 HBV DNA拷贝数对数值与LHBs含量（ng）的相关系数r=0.917，回归方程为Y=10822X，P<0001，R Square=0.841，表明HBV DNA拷贝数的对数值与LHBs含量（ng）具有相关关系（表1）。 表1 LHBs阳性率以及含量与HBV DNA拷贝数比较（略）

3 讨论

HBV形成包膜过程中，LHBs起着关键作用，LHBs前S区具有拓扑结构，并具有反式激活病毒复制作用，检测LHBs具有重要意义。以往是通过检测LHBs独有片段PreS1实现，但其PreS区具有复杂拓扑结构，导致PreS1多肽为免疫源的单抗检出率较低，不能很好地反映HBV复制。本研究使用包被针对构象型前S区的单抗的试剂检测LHBs。结果表明，LHBs能反映HBV复制情况，171例患者中LHBs阳性率和HBV DNA阳性率无统计学差异（P>0.05）。LHBs含量与HBV DNA拷贝数具有较好相关关系（r=0.917）。在HBeAg阴性但HBV DNA阳性患者中，LHBs阳性率为82.2%（68/82）。在HBeAg阴性患者中有12%（15/125）的患者为LHBs阳性而HBV DNA阴性，分析有3个原因：（1）由于HBV具有变异性倾向，导致基因变异频繁；（2）含有LHBs的管状颗粒的数量是Dane颗粒的10000倍，血液中消退时间也晚于HBV DNA；（3）抗病毒药物只抑制病毒cccDNA再复制，并不抑制已形成的病毒表达蛋白，即以DNA为模板的转录和病毒蛋白的转译表达不受影响。如果肝内cccDNA仍然较多存在，则LHBs仍在一段时间内存在，而血液中DNA可能是阴性。由于LHBs具有反式激活作用，LHBs的残留是否与病毒持续复制或乙肝病毒慢性持续性感染相关，需要进行深入的研究。

参考文献

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