戊二醛癸甲溴铵溶液对HP—PRRSV体外杀灭效果测定

李云 贾伟新

摘 要：针对高致病性蓝耳病病毒（PRRSV），农业部动物疫病防控重点开放实验室用戊二醛癸甲溴铵溶液对其进行了体外杀灭效果试验，结果显示大于或等于0.01%浓度的戊二醛癸甲溴铵溶液可体外完全杀灭PRRSV。根据结果建议该消毒剂对PRRSV临床使用浓度为≥0.01%，即1∶10 000稀释，但同时也要根据具体情况具体分析，适当提高使用浓度。

关键词：高致病性蓝耳病病毒；戊二醛癸甲溴铵溶液；体外杀灭效果

Killing Effect Determination of Glutaral and Deciquam Solution to High Pathogenic Porcinereproductive and Respiratory Syndrome Viruse（PRRSV）in Vitro

Li Yun1，2，Jia Weixin2

（1， Guangdong Galloper Veterinary Pharmaceutical Co，. Ltd. ， Zhongsan， Guangdong， 528437；

2. South China Agricultural University， Guangzhou， Guangdong， 510642）

Abstract：In view of high pathogenic porcinereproductive and respiratory syndrome viruse（PRRSV）， Key Laboratory of Animal Disease Control and Prevention of Ministry of Agriculture used glutaral and deciquam solution to test the killing effect in vitro. The result showed the concentration of glutaral and deciquam solution higher than or equal to 0.01% could completely kill the PRRSV in vitro. According to the result， the recommended concentration of this solution for PRRSV is 0.01%， namely 1∶10000 dilution. Higher concentration would be necessary according to different conditions.

Key words：high pathogenic porcinereproductive and respiratory syndrome viruse（PRRSV）； glutaral and deciquam solution； killing effect in vitro

隨着畜牧养殖业的迅速和集约化发展，各种动物疫病不断出现，消毒剂愈来愈受到人们的重视。在动物厩舍环境卫生中，消毒剂的作用更是十分重要，兽医临床上为防治各种传染病，使用消毒剂要比其他灭菌方法广泛得多。

消毒剂种类繁多，常用的有醛类、酚类、醇类、卤化物、氧化物、表面活性剂和金属化合物等。消毒剂所含成分和含量的不同决定了它对病原微生物是否有杀灭作用以及完全杀灭所需的剂量[1]。本文作者用戊二醛癸甲溴铵溶液对高致病性蓝耳病病毒进行体外杀灭效果测定以确定该消毒剂是否可以杀灭PRRSV以及完全杀灭PRRSV的最低剂量。

1 试验材料

1.1 受试样品

受试样品戊二醛癸甲溴铵溶液，无色澄清液体，含量规格：100 mL∶戊二醛5 g+癸甲溴铵5 g，由广东腾骏动物药业股份有限公司提供， 批号：11080401。

1.2病毒毒株

测定用病毒为高致病性蓝耳病病毒（PRRSV），由农业部动物疫病防控重点开放实验室保存提供[3，4]。

1.3 动物细胞

猴肾细胞（Marc-145），由农业部动物疫病防控重点开放实验室保存提供。

2 试验方法

2.1 Marc-145细胞对戊二醛癸甲溴铵溶液的感受性试验

将戊二醛癸甲溴铵溶液用3% FBS稀释成不同的浓度，将细胞培养板中培养液吸出，然后把每个浓度的消毒剂分别接种于细胞的相应孔内，接种四个孔， 每孔1 mL。对照组： 只加3% FBS。置37℃，5% CO2培养箱中培养，每天观察，连续5 d。本试验重复3次。

2.2消毒剂对PRRSV的杀灭试验

试验组：用DMEM将消毒剂稀释成不同浓度，PRRSV 原液（ TCID50 =104.2/ 0.1 mL）与等量不同浓度的消毒剂混合（病毒稀释2倍）；20℃作用20 min，再分别用3% FBS稀释103倍，使接种到细胞上的病毒含量能够导致细胞产生病变，消毒剂浓度小于或等于0.001%（不影响细胞正常生长）。然后将细胞培养板中培养液吸出，把上述稀释好的消毒剂与病毒混合液按消毒剂浓度大小分别依次加入相应孔中，即消毒剂PRRSV 混合液加入Marc-145 细胞培养板孔中； 每个浓度接四个孔，每孔1mL。对照组：阴性对照为3% FBS； 阳性对照为2×103 倍稀释的PRRSV液（3% FBS稀释）；消毒剂对照为0.001%的消毒液（3% FBS稀释）。对照组的每孔加入量为1mL。然后置37℃，5% CO2培养箱中培养，每天观察，连续5～7 d。本试验重复5次。

3 试验结果

3.1 Marc-145细胞对戊二醛癸甲溴铵溶液的感受性试验

结果见表1：

结果表明，试验组消毒剂浓度小于或等于0.001%时，对PK-15细胞的生长无明显影响，即细胞正常生长，消毒剂浓度大于或等于0.01%时，对细胞生长有不同程度的影响，即细胞生长异常，发生萎缩、脱落、死亡、崩解等，3% FBS对照组，细胞正常生长。

3.2 戊二醛癸甲溴銨溶液对PRRSV杀灭效果试验

结果见表2：

结果表明，大于或等于0.01%浓度的戊二醛、癸甲溴铵溶液可杀灭PRRSV， 使PK-15细胞不受病毒感染， 不产生细胞病变，而且细胞能正常生长；0.001%浓度的戊二醛癸甲溴铵溶液可杀灭病毒，但杀灭不完全，致使没被杀灭的病毒所在孔内产生较弱细胞病变或细胞生长异常；小于或等于0.0001% 浓度的戊二醛癸甲溴铵溶液不能杀灭病毒， 并产生细胞病变（圆缩、空泡、融合、脱落等） 。在3% FBS 及0.001% 戊二醛癸甲溴铵溶液对照组，细胞生长正常；在病毒对照组，细胞受相应病毒感染，产生典型细胞病变。

4分析与讨论

戊二醛为醛类消毒药，可杀灭细菌的繁殖体和芽孢、真菌、病毒等；癸甲溴铵为双长链阳离子表面活性剂，其季铵阳离子能主动吸引带负电荷的细菌和病毒并覆盖其表面，阻碍细菌代谢，导致膜的通透性改变，协同戊二醛更易进入细菌病毒内部，破坏蛋白质和酶活性，达到快速高效的消毒作用。

按照国家标准指导用量，戊二醛癸甲溴铵溶液需在临用前用水按0.025%～0.2%比例稀释后喷洒或浸泡消毒。喷洒：常规环境消毒，1∶2 000～4 000稀释，疫病发生时环境消毒，1∶500～1 000。浸泡：器械、设备等消毒，1∶1 500～3 000[2，3]。

本测定结果显示大于或等于0.01%浓度的戊二醛癸甲溴铵溶液可体外杀灭PRRSV，故建议该消毒剂对PRRSV临床使用浓度为≥0.01%，即1∶10000稀释，但同时也要根据具体情况具体分析，适当提高使用浓度。 （编辑：何芳）

参考文献：

[1] 陈杖榴主编. 兽医药理学（第二版）[M]. 中国农业出版社. 2002. 251-263.

[2] 农业部兽药评审中心编. 兽药国家标准汇编（第二册）[M]. 中国农业出版社. 2011.181.

[3] 中国兽药典委员会编. 中华人民共和国兽药典（2010年版）[M]. 中国农业出版社. 2011.附录

[4] 农业部兽药评审中心. 兽药研究技术指导原则[S]. 2010.127.