加味四逆散分时给药对慢性应激大鼠生物节律的影响

2014-05-21吴丽丽陈权韩

中国药理学通报 2014年6期

吴丽丽，刘琰，陈权韩，严灿

（广州中医药大学中医基础理论教研室，广东广州 510060）

机体在维持内环境稳态和外环境适应的过程中，各种功能活动常按一定的时间顺序发生周而复始的节律变化，称为生物节律（biological rhythm）。生物节律是生物体广泛存在的生命活动的基本现象之一，目前常用于生物节律的检测指标包括：皮质醇、褪黑素和核心体温［1］。20世纪前，核心体温的维持和昼夜变化一直被认为是稳态内环境的应答反应。最近发现，核心体温在自由振荡条件下显示出自身的周期节律。一些研究者认为，周期节律和内环境稳定的过程是相互独立的，昼夜节律振荡是由生化和环境刺激或时序压力引发的［2］。大量研究表明，抑郁症患者存在着明显的生物节律尤其是昼夜节律的紊乱，如大多数患者表现为每天晨间症状最为严重［3］，下午和晚间减轻。研究发现，抑郁症患者体内激素、神经递质及细胞因子等的合成、分泌和代谢存在昼夜节律失调，如血浆皮质醇、去甲肾上腺素、泌乳素水平的时相改变［4］，以及皮质醇分泌的不稳定模式［5］。由此可见，生物节律的紊乱可能是抑郁症发病机制的一个重要组成部分。

我们以往的研究证实，中药复方加味四逆散（jiaweisinisan，JWSNS）具有确切的抗抑郁效应，其机制与调节下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamuspituitary-adrenal gland，HPA）轴兴奋性、拮抗兴奋性氨基酸毒性、影响5-羟色胺（5-hydroxy tryptamine，5-HT）合成、释放、保护海马神经元等有关［6-8］。在本研究中，针对抑郁症昼夜节律紊乱这一病理现象，我们建立慢性应激大鼠模型，结合中医时间医学分时给药的理论，通过观察大鼠昼夜体温、血清5-HT、皮质酮（corticosterone，CORT）、褪黑素（melatonin，MT）的变化，从调节机体昼夜节律角度，进一步探讨JWSNS分时给药抗抑郁的作用机制，并期望为今后临床合理有效用药提供实验依据。

1 材料

1.1 实验动物 SPF级Sprague-Dawley（SD）♂大鼠，体质量（180±20）g，广东省医学实验动物中心提供，实验动物合格证编号依次为：第1批 No.0054669、第2批 No.0055096、第 3批 No.0056806、第4批No.0059563。单笼饲养，自由摄食饮水，在光暗周期为12 h，温度为（23±2）℃的安静环境适应并训练共计2周后，根据糖水消耗实验结果和体重情况进行分组。

1.2 实验药物及试剂 JWSNS由柴胡、白芍、枳壳、枸杞子、生地黄、石决明组成。药材由广州致信药业有限公司提供，经广州中医药大学第一附属医院药剂科鉴定均为纯正药材。将中药煎煮两次，合并两次药液，4层纱布过滤，待稍冷却后，用旋转蒸发仪浓缩药液至含生药量1.69 g·ml-1（以1 ml／100 g体重的比例灌胃，相当于临床成人用药剂量的2倍），4℃冰箱内保存备用。大鼠5-HT、CORT、MT酶联免疫吸附试剂盒购自广州市励恒生物科技有限公司。蔗糖：分析纯，由广州化学试剂厂提供。

1.3 实验仪器电子秤（ES-2000E，长沙湘平科技发展有限公司）；电子分析天平（BS 124S，sartorius公司）；旋转蒸发仪（LABOROTA 4000，德国Heidolph公司）；冷却水循环器（CA-Ⅲ，日本 EYWLA公司）；超纯水器（Nexpower 1000，韩国 Human coporation公司）；数字式电子体温计（BT-A11CN，温度范围：32℃～43.9℃，深圳市瑞迪恩科技有限公司）；全自动酶联免疫分析仪（Model550，美国Bio-rad公司）。

1.4 实验分组 SD大鼠按体重和基础糖水消耗量分为5组：正常组（control）：每天7∶30灌胃双蒸水，3 ml／次，不施加任何刺激。模型组（model）：每天7∶30灌胃双蒸水，3 ml／次，施加刺激。JWSNS卯时给药组（MS group）：每天于7∶30灌胃中药JWSNS，3ml／次，施加刺激。JWSNS酉时给药组（YS group）：每天于 17∶30灌胃中药 JWSNS，3ml／次，施加刺激。JWSNS卯酉分时给药组（MS+YSgroup）：每天于7∶30、17∶30分别灌胃中药 JWSNS，1.5ml／次，施加刺激。模型组、正常组与其它各组分房饲养。

2 方法

2.1 慢性应激大鼠模型的建立采用Willner P慢性不可预知轻度应激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）动物模型［9］，并加以修改。接受应激处理的大鼠置于一独立房间内，在21 d内接受不同应激源的刺激，应激源包括限制空间（束缚）、持续光照、45°斜笼、并笼、禁水、空瓶、湿笼（加水入垫料中，至湿透）、禁食禁水。造模前：d 1～7：所有大鼠单笼喂养，自由摄食饮水，在光暗条件12 h／12 h（8∶00开灯，20∶00关灯），温度为（23±2）℃的安静环境中适应性喂养。d 7～14：糖水训练（d 7 9∶30开始至d 14 9∶30结束）。d 14 9∶30开始禁食禁水至d15 8∶30。d15 8∶30～9∶30糖水消耗1 h，之后根据消耗结果分组，称量体重。造模期：自d16开始，进入造模程序，d16 9∶30～10∶30束缚1 h；20：00开始持续光照。d17持续光照中。d18 8∶30终止持续光照；9∶30～16∶30斜笼45°7 h。d19 9∶00开始并笼23 h。d20 8∶30结束并笼；9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30湿笼17 h。d21 8∶30结束湿笼；16∶00开始禁食禁水23 h。d22 15∶00结束禁食禁水。d23 8∶30持续光照36 h。d24 20∶30结束持续光照。d25 9∶30开始并笼23 h。d26 8∶30结束并笼；9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30～16∶30束缚。d27 9∶30～16∶30斜笼7 h；16∶30湿笼17 h。d28 9∶30开始禁食禁水23 h。d29 8∶30结束禁食禁水；15∶30～16∶30束缚1 h。d30 9∶30开始并笼23 h。d31 8∶30结束并笼，开始持续光照36 h。d32 20∶30结束持续光照。d33 9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30开始湿笼17 h。d34 8∶30结束湿笼；9∶30～16∶30斜笼7 h；16∶00开始禁食禁水23 h。d35 15∶00～16∶00糖水消耗实验，并称量体重。d36～d37测量24 h体温（时间点为10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、2∶00、6∶00）。d39～d40眶下静脉丛采血（时间点同上）。

2.2 体重检测及糖水消耗实验所有大鼠在完成1周的单笼饲养适应后，接受双瓶训练，一瓶是1%（W／V）蔗糖水（在笼左侧），一瓶是纯水（在笼右侧），水瓶位置固定，训练1周，每日清晨添加糖水或纯水。之后所有大鼠禁食禁水23h，进行1 h糖水消耗实验，测量基础糖水偏爱度和基础体重。经过禁食禁水23 h后，在整个实验进程的d35 15∶00～16∶00再次进行糖水消耗实验，测量造模后糖水偏爱度和体重。糖水偏爱度／%＝造模后糖水偏爱度／基础糖水偏爱度。

2.3 体温数据的采集与拟合

2.3.1 体温数据的采集在整个实验进程的d36～d37，自d36 10∶00开始，到d37 6∶00结束，每隔4h对所有实验组别的大鼠进行一次肛门-直肠温度的测量。共得六组体温数据，时间点为依次10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、2∶00、6∶00。

2.3.2 体温数据的拟合采用“余弦节律分析法”，简称余弦法。将所得的每只大鼠的6个时间点体温按照单一余弦法［1］进行处理，并将用以描绘生物节律的余弦数学模型：Y＝M+Acos（ωt-φ）转化为线性方程，应用SPSS15.0统计软件中线性回归的方法拟合出时间序列节律的特征值（中值M，振幅A，峰值相位φ），然后分别求出各组各特征值的平均值，依据此平均值拟合出各组对应的体温昼夜节律变化的余弦方程。之后依据方程，求出各组大鼠体温的峰值、谷值、峰值时间、谷值时间，并进行比较。

2.4 血清5-HT、CORT、MT含量的测定在整个实验进程的d39～d40，自d39 10∶00开始，到d40 6∶00结束，每隔4 h对所有实验组别的大鼠进行一次眶下静脉丛采血。酶联免疫吸附法测定血清5-HT、CORT、MT含量，操作按说明书要求进行。以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。按上述方法进行数据与曲线的拟合。

2.5 统计学方法实验结果以±s表示，应用SPSS15.0统计软件进行分析，多组间比较用One-Way ANOVA，LSD法。

3 结果

3.1 各组大鼠造模前后体重的变化与正常组比较，模型组体重增重明显下降（P＜0.01）；与正常组比较，MS组和YS组体重增重明显下降（P＜0.01）。与模型组比较，YS组体重增重明显下降（P＜0.01）。与MS+YS组比较，YS组体重增重明显降低（P＜0.01）；与MS组比较，YS组体重增重明显降低（P＜0.05）。见 Tab 1。

Tab 1 Body weight change of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs model；##P＜0.01 vs control；△△P＜0.01 vs MS+YS；▲P＜0.05 vs MS

Group Weight／g Weight gain／g Control 324.33±11.71 414.00±15.90 89.67±9.Pre-modeling Post-modeling 81 Model 252.33±8.48 319.00±24.21 66.67±17.96##MS 249.67±7.97 312.83±10.50 63.17±4.22##YS 323.33±11.71 369.33±14.88 46.00±3.79**##△△▲MS+YS 283.17±14.47 351.00±23.45 67.83±13.20

3.2 各组大鼠造模前后糖水偏爱度的变化与正常组比较，模型组、MS组、YS组糖水偏爱度明显下降（P＜0.01，P＜0.05）。与模型组比较，MS组、YS组、MS+YS组糖水偏爱度明显提高（P＜0.01）。见Fig 1。

3.3 各组大鼠各时间点体温概况、体温昼夜节律特征值、昼／夜体温均值以及体温峰值、谷值、峰值时间、谷值时间的比较与正常组相比，MS组体温中值明显下降（P＜0.01）。在体温振幅方面：与正常组相比，模型组、MS组体温振幅明显增大（P＜0.01）。与模型组相比，YS组、MS+YS组体温振幅明显减小（P＜0.01）。与MS+YS组相比，YS组体温振幅减小（P＜0.05）。与MS组相比，YS组体温振幅明显减小（P＜0.01）。

与正常组相比，模型组白昼体温均值明显下降（P＜0.01），夜间体温均值明显上升（P＜0.01）；MS组白昼体温均值明显下降（P＜0.01），YS组白昼体温均值下降（P＜0.05）。与模型组相比，YS组、MS+YS组白昼体温均值升高（P＜0.05），夜间体温均值降低（P＜0.05）。与MS组比较，YS组、MS+YS组白昼体温均值升高（P＜0.05）。

与正常组相比，模型组白昼体温谷值明显下降（P＜0.01），体温峰值上升（P＜0.05）；MS组体温谷值明显下降（P＜0.01）。与模型组相比，YS组、MS+YS组体温谷值明显升高，体温峰值明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。与 MS组相比，YS组、MS+YS组体温谷值明显升高（P＜0.01）。见 Tab 2、3、4，Fig 2。

Fig 1 Change of sucrose preference of each group（±s，n＝7）**P＜0.01 vs model；#P＜0.05，##P＜0.01 vs control

Fig 2 Core body temperature of each group

3.4 各组大鼠血清5-HT昼夜节律特征值、以及峰值、谷值、峰值时间、谷值时间的比较与正常组相比，模型组、MS组5-HT中值、峰值、谷值均明显下降（P＜0.01）。与模型组相比，YS组、MS+YS组5-HT中值、峰值、谷值均明显升高（P＜0.01）。与MS组相比，YS组、MS+YS组5-HT中值、峰值、谷值均明显升高（P＜0.01）。与YS组相比，MS+YS组5-HT中值、峰值、谷值均明显降低（P＜0.01）。

与正常组相比，模型组5-HT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前9.83 h；MS组5-HT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前8.18 h。与模型组相比，YS组、MS+YS组5-HT振幅明显增大（P＜0.01），YS组时相后推0.65 h，MS+YS组时相后推1.91 h。与MS组相比，YS组、MS+YS组5-HT振幅均明显增大（P＜0.01），YS组时相提前 1 h、MS+YS组时相提前 0.3 h。见 Tab 5、6。

3.5 各组大鼠血清MT昼夜节律特征值、以及峰值、谷值、峰值时间、谷值时间的比较与正常组相比，模型组、MS组、MS+YS组MT中值、峰值、谷值均明显下降（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组相比，JW酉时组中值、峰值、谷值均明显升高（P＜0.01）。与MS组相比，YS组MT中值、峰值、谷值均明显升高（P＜0.01）；MS+YS组 MT中值、峰值、谷值均明显降低（P＜0.01）。与 YS组相比，MS+YS组 MT中值、峰值、谷值均明显降低（P＜0.01）。

与正常组相比，模型组MT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前10.86 h；MS组MT振幅明显减小（P＜0.01），时相后推 2.02 h；YS组 MT振幅减小（P＜0.05），时相提前10.32 h。与模型组相比，JW酉时组 MT振幅明显增大（P＜0.01），时相后推0.54 h。与MS组相比，YS组MT振幅明显增大（P＜0.01），时相后推11.66 h。YS组与MS+YS组相比，振幅明显增大（P＜0.01），时相提前11.39 h。见 Tab 7、8。

Tab 2 Characteristic value of core body temperature rhythm of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△P＜0.05 vs MS+YS；▲▲P＜0.01 vs MS

Group Characteristic value M︱A︱ φ 0.48±0.81 Control 38.11±0.15 0.40±0.22 -0.67±0.97 Model 37.96±0.21 0.89±0.23**0.09±0.26 MS 37.80±0.17**0.77±0.24**-0.20±0.41 YS 37.99±0.15 0.30±0.17##△▲▲ 0.25±0.55 MS+YS 37.94±0.30 0.53±0.20##

Tab 3 Day／night core body temperature of each group（±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；#P＜0.05 vs model；△P＜0.05 vs MS

Group Day Night Control 38.22±0.28 38.00±0.22 Model 37.38±0.30** 38.54±0.32**MS 37.37±0.20** 38.23±0.34 YS 37.79±0.21*# 38.18±0.12#△MS+YS 37.78±0.40# 38.11±0.28#△

Tab 4 Peak／valley time and peak／valley value of core body temperature of each group（±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；#P＜0.05，##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS

Group Peak value／℃Valley value／℃Peak time／h Valley time／h 25.85 13.85 Control 38.48±0.27 37.75±0.24 21.43 9.43 Model 38.85±0.31* 37.07±0.31**24.34 12.34 MS 38.57±0.31 37.03±0.28**23.24 11.24 YS 38.28±0.19## 37.70±0.27##△△ 24.96 12.96 MS+YS 38.25±0.26# 37.63±0.42#△△

Tab 5 Characteristic value of serum 5-HT rhythm of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△ P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ Control 424.61±37.97 64.21±27.57-0.60±0.31 0.32±0.89 Model 156.68±43.16** 13.04±3.98**-0.04±0.50 MS 148.94±33.51** 11.05±7.28**0.40±0.41 YS 434.03±39.73##△△ 51.09±24.92##0.13±0.77 MS+YS 233.39±20.62##△△▲▲ 36.28±18.38##

Tab 6 Peak／valley time and peak／valley value of serum 5-HT of each group±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Peak value／μg·L-1 Valley time／h Control 488.82±51.92 360.41±41.33 21.69 9.6 Valley value／μg·L-1 Peak time／h 9 13.21 25.21 Model 169.71±45.55** 143.64±41.02** 11.86 23.86 MS 159.99±35.08** 137.89±33.49** 13.51 25.51 YS 485.12±46.96##△△ 382.95±46.85##△△ 12.51 24.51 MS+YS 269.67±25.79##△△▲▲ 197.11±29.34##△△▲▲

Tab 7 Characteristic value of serum MT rhythm of each group±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ-0.07±0.88 Control 76.93±4.34 9.57±2.41 -0.35±0.25 Model 25.08±3.68** 2.25±1.39** -0.05±0.60 MS 24.81±2.67** 2.34±1.12** 0.18±0.90 YS 76.63±8.13## 7.17±3.14*##△△ 0.09±0.60 MS+YS 19.42±2.23**▲▲ 2.27±0.89**▲▲

Tab 8 Peak／valley time and peak／valley value of serum MT of each group（x¯±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Peak value／ng·L-1 Valley value／ng·L-1 Peak time／h Valley time／h Control 86.50±5.04 67.36±4.90 22.66 10.66 Model 27.33±4.57** 22.82±3.17** 11.80 23.80 MS 27.14±2.99** 22.47±2.79** 24.68 12.68 YS 83.81±6.73##△△ 69.46±10.33##△△ 12.34 24.34 MS+YS 21.69±2.51**△△▲▲ 17.15±2.29**△△▲▲23.73 11.73

3.6 各组大鼠血清CORT昼夜节律特征值、以及峰值、谷值、峰值时间、谷值时间的比较与正常组相比，模型组、MS组CORT中值、峰值、谷值均明显升高（P＜0.01）。与模型组相比，YS组、MS+YS组CORT中值、峰值、谷值均明显降低（P＜0.01）。与MS组相比，YS组、MS+YS组CORT中值、峰值、谷值均明显降低（P＜0.01）。与YS组相比，MS+YS组CORT中值、峰值、谷值明显降低（P＜0.01）。

与正常组相比，模型组CORT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前8.16 h；MS组CORT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前9.45 h；YS组 CORT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前9.35 h；MS+YS组CORT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前9.32 h。与MS组比较，MS+YS组CORT振幅明显减小（P＜0.01），时相提前 0.75 h；YS组与 MS+YS组相比，振幅明显增大（P＜0.01），时相推后1.85 h。见Tab 9、10。

Tab 9 Characteristic value of serum CORT rhythm of each group±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ 0.37±0.88 Control 240.94±10.64 32.20±8.55 -0.54±0.34 Model 311.55±45.20** 19.48±6.74** 0.47±0.51 MS 310.96±36.84** 19.37±8.59** 0.13±0.93 YS 248.97±18.33##△△ 22.20±13.17** 0.42±0.96 MS+YS 267.57±25.23##△△▲▲ 21.23±12.89**△△▲▲

Tab 10 Peak／valley time and peak／valley value of serum CORT of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Valley time／h Control 273.15±15.94 208.74±10.87 21.96 9.9 Peak value／ng·L-1 Valley value／ng·L-1 Peak time／h 6 25.08 13.08 Model 331.03±50.81** 292.07±39.94** 13.80 25.80 MS 330.33±32.79** 291.59±42.27** 12.51 24.51 YS 271.18±28.87##△△ 226.77±13.60##△△ 13.61 25.61 MS+YS 273.69±28.51##△△▲▲ 221.65±12.89##△△▲▲

4 讨论

CUMS模型的原理是模拟抑郁症的环境诱因以及核心症状快感缺失，该模型不仅可用于抗抑郁药效学的研究，而且更适合抗抑郁剂作用机制的研究［6］。本实验观察到，CUMS可引起大鼠体重增长缓慢和糖水偏爱度的明显下降。JWSNS 3个给药组对模型大鼠体重增长缓慢现象没有抑制作用。在改善大鼠由慢性应激带来的糖水偏爱度下降方面，JWSNS3个给药组均表现出抑制作用，表明JWSNS具有抗抑郁效应。

正常情况下，大鼠体温峰值时间出现在暗时相（21.43，相当于24 h制的21∶21），谷值时间出现在光时相（9.43，相当于24 h制的9∶09）。为了进一步明确慢性应激对体温的影响以及JWSNS分时给药的效果，将24h体温分为昼体温（8∶00～20∶00）和夜体温（20∶00～8∶00），分别进行观察研究。结果表明，慢性应激可造成大鼠体温昼夜波动加剧，使白昼体温更低，夜间体温更高（体温谷值降低，峰值升高），并且这种现象在谷值方面表现得更为明显。JWSNS酉时、卯酉分时给药对昼夜体温波动加剧具有抑制作用，且酉时给药表现为对峰值、谷值的双相调节作用，而卯酉分时给药则主要是作用于光时相，即对谷值（白昼）进行调节。在慢性应激状态下，大鼠的体温节律出现延迟现象，表现为时相的推后，只有JWSNS卯时给药可以对体温节律延迟有抑制作用。慢性应激使大鼠昼夜体温中值出现下降的趋势，但没有统计学意义，需做进一步的观察研究。

在抑郁症发病机制许多不同的观点和假说里，单胺假说被大多数人所推崇［10］，抑郁症的神经生化基础主要是5-HT和去甲肾上腺素水平或功能的低下［11］。正常情况下，大鼠血清 5-HT、MT、CORT含量均存在着昼夜波动，本实验结果表明，大鼠血清5-HT含量昼夜波动的幅度在（36.64～91.78）μg·L-1之间，其峰值时间出现在暗时相（21.69，相当于24 h制的21∶21），谷值时间出现在光时相（9.69，相当于24 h制的9∶09）。慢性应激状态下，大鼠昼夜血清5-HT含量波动变化不明显，即振幅减小；分泌节律紊乱，表现为时相的大幅提前。慢性应激大鼠血清5-HT的中值、峰值、谷值均降低，JWSNS酉时和卯酉分时给药对大鼠血清5-HT整体水平的低下具有抑制作用，其中JWSNS酉时给药效果最佳。JWSNS卯酉分时给药对大鼠昼夜血清5-HT振幅减小具有抑制作用；JWSNS卯时给药和卯酉分时给药则对大鼠血清5-HT分泌节律的紊乱有一定的抑制作用。

MT是人体内的一种能够影响睡眠规律、觉醒类型和体温，并与情绪调节、失眠等密切相关的物质［12］。MT主要是由松果体分泌，其前身物质是5-HT，5-HT经 N-乙酰基转移酶（N-acetyltransferase，NAT）作用转变为N-乙酰基-5-羟色胺，再经羟基吲哚氧位甲基转移酶的作用生成MT。MT的节律成分为内源性节律，是机体重要的标志节律［13］。研究人员发现MT与抑郁症密切相关，抑郁症发作时会呈现MT分泌量、分泌节律位相及幅度的异常［14］。目前一般认为，抑郁症患者发作期间MT分泌下降，缓解后MT分泌再度上升［15］，MT水平的高低对抑郁症具有诊断价值。本实验结果表明，大鼠血清MT含量昼夜波动的幅度在（7.16～11.98）ng·L-1之间，其峰值时间出现在暗时相（22.66，相当于24 h制的22∶22），谷值时间出现在光时相（10.66，相当于24 h制的10∶10）。慢性应激可使大鼠昼夜血清MT中值、峰值、谷值降低，与5-HT的改变规律相一致。JWSNS酉时给药对此种改变具有抑制作用。慢性应激大鼠昼夜血清MT含量波动幅度减小，分泌节律紊乱，表现为时相的大幅提前，甚至表现为昼夜节律的颠倒。JWSNS酉时给药对波动幅度的减小具有抑制作用，而JWSNS卯时给药和卯酉分时给药则对 MT分泌节律紊乱具有抑制作用，其中JWSNS卯酉分时给药效果最佳。

抑郁症患者多有HPA轴活动亢进［16］，皮质醇水平会在夜间升高［17］。Kentarou等［18］明确提出慢性应激的过程引起昼夜节律紊乱，表现在体温过高和皮质醇增多症的观点。本实验结果表明，大鼠血清CORT含量昼夜波动的幅度在（23.65～40.55）μg·L-1之间，其峰值时间出现在暗时相（21.96，相当于24 h制的21∶21），谷值时间出现在光时相（9.96，相当于24 h制的9∶09）。慢性应激可导致大鼠昼夜血清CORT含量升高，JWSNS酉时和卯酉时给药可抑制CORT的升高。慢性应激大鼠昼夜血清CORT含量波动幅度减小，分泌节律紊乱，表现为时相的大幅提前，甚至表现为昼夜节律的颠倒。JWSNS酉时和卯酉时给药对波动幅度的减小具有一定的抑制作用。

中医认为，正常人体应该处于一个阴阳平衡的状态，人体的体温和各种激素分泌也应该在一个既定范围内波动，若波动加剧或消失，则说明人体的阴阳平衡状态遭到了破坏。抑郁症的发生与昼夜节律的紊乱之间存在着密切的联系，而重新构建正常的昼夜节律可能具有抗抑郁的作用。JWSNS在组成上主要包含两部分药物，一部分是以疏肝、柔肝为主的柴胡、枳壳、白芍，一部分是以镇肝、清肝为主的石决明、栀子、干地黄和枸杞子，两部分相互配合，一升一降，一阳一阴，恰恰包含有阴阳并用、调节阴阳的思想。从中医时间医学角度而言，卯时为肝旺之时，酉时为肝衰之时，在这两个时间点分别给药，正好可以顺应肝气的盛衰变化，达到调肝，进而调节机体阴阳的作用。时间节律在中医表现为阳气周而复始地运行，在肝气升发正旺的卯时给药，有助于阳气的生发，同时也有助于对伴随阳气生发而波动的人体各种时间节律的调节；而各种激素和神经递质在中医归属于阴津范畴，在阴气渐盛、阳气渐衰的酉时给药，正好可以顺应阴阳变化，调养肝血，使阴液中的各种物质恢复到正常状态。本研究的实验结果表明，JWSNS对慢性应激大鼠具有明显抗抑郁作用，卯时（7∶30）给药可能主要与调节体温、激素以及神经递质分泌节律有关；酉时（17∶30）给药可能主要与调节激素和神经递质有关；而卯酉分时给药则与以上两方面神经内分泌节律综合调节密切相关。这一结论与中医时间医学理论和调节阴阳的思想是相契合的。

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