依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究

2014-05-18金培彧关敬之袁少飞

中国医药指南 2014年24期

关键词：达拉脑缺血含水量

金培彧关敬之* 袁少飞

（1 内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院药剂科，内蒙古包头 014030；2 内蒙古自治区国际蒙医医院药剂科，内蒙古呼和浩特 010065）

依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究

金培彧1关敬之2* 袁少飞1

（1 内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院药剂科，内蒙古包头 014030；2 内蒙古自治区国际蒙医医院药剂科，内蒙古呼和浩特 010065）

目的探讨分析采用依达拉奉药物对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用机制。方法对12只大鼠，随机平分为假手术组、脑缺血再灌注组以及依达拉奉组，分别于再灌注后3 d、7 d，测定与对比丙二醛（MDA）含量、脑组织含水量、水通道蛋白4（AQP-4）的表达水平以及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果再灌注后3 d脑缺血再灌注组MDA含量、脑组织含水量、AQP-4的表达水平与NOS活性，均高于假手术组，差异具有统计学意义（均P＜0.05），而依达拉奉组与脑缺血再灌注组相比，差异具有统计学意义（均P＜0.05）；再灌注后7 d，三组在MDA含量、脑组织含水量与NOS活性等指标对比，差异无统计学意义（均P＞0.05），而依达拉奉组AQP-4的表达水平显著低于脑缺血再灌注组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论依达拉奉药物能够降低脑缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、脑组织含水量，抑制AQP-4的表达，从而起到减轻脑水肿，保护大鼠神经的作用。

依达拉奉；脑缺血-再灌注；神经保护

依达拉奉对治疗急性脑梗死具有较好的效果，同时它也是一种新型的脑神经保护药物，在诸多的动物模型试验结果中发现，依达拉奉能够有效清除自由基，进一步抑制大脑神经细胞的死亡[1]，从而改善神经缺损症状，而AQP-4与脑水肿症状具有十分密切的关系。因此，本研究通过对脑缺血-再灌注大鼠模型的相关指标测定，观察AQP-4的表达水平以及脑含水量等的变化情况，旨在探讨分析依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用机制，具体过程汇报如下。

1 材料与方法

1.1 动物分组与模型制备

①选取12只远交群（SD）雄性大鼠，随机平分为假手术组、脑缺血再灌注组以及依达拉奉注射组等3组，每组均3只。②采用线栓法，制备局灶性脑脑缺血-再灌注大鼠试验模型，当动物麻醉清醒后，剔除神经功能缺陷评分为0分与4分的，并补充1～3分的大鼠，其中神经功能缺陷评分标准韩秋等[2]的评定方法进行。

1.2 试验药品与试剂

依达拉奉注射液规格为30 mg/20mL（国瑞药业公司生产）；采用南京建成生物工程所究所提供的检测试剂盒，包括丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）等；采用武汉博士德生物工程公司生产的SP免疫组织化学检测试剂盒、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒；兔抗大鼠抗体（美国ADI公司生产）。

1.3 试验方法

①对依达拉奉组大鼠于腹腔部位注射依达拉奉5 mg/kg，每12 h，行同法、同量给药，假手术组大鼠不行药物给予，脑缺血再灌注组与依达拉奉同样剂量，同法注射生理盐水。②分离3组大鼠脑组织标本，制备脑组织匀浆，并行离心后，取上清液，分别于再灌注后3 d、7 d后，采用化学比色法与测定NOS活性，按照李高义等[3]的方法，测定MDA含量，采用干、湿重测定法测定脑水含量，对脑组织切片进行常规步骤制备后，采用免疫组化法以及光学显微镜图像分析法，检测AQP-4的表达水平。

表1 再灌注后3 d三组大鼠测定指标对比

注：与假手术组相比，*P＜0.05，与脑缺血再灌注组相比，#P＜0.05

表2 再灌注后7 d三组大鼠测定指标对比（

注：与假手术组相比，*P＜0.05，与脑缺血再灌注组相比，#P＜0.05

1.4 数据处理

本文研究所收集到的相关资料以及其他记录数据，采用统计软件SPSS17.0单因素方差分析进行分析处理，组间差异采用t检验，实验结果采用（x¯±s）表示，P＜0.05表示对比差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 再灌注后3 d三组大鼠测定指标对比

再灌注后3 d脑缺血再灌注组MDA含量、脑组织含水量、AQP-4的表达水平与NOS活性，均高于假手术组，差异具有统计学意义（均P＜0.05），而依达拉奉组与脑缺血再灌注组相比，差异具有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

2.2 再灌注后7d三组大鼠测定指标对比

再灌注后7 d，三组在MDA含量、脑组织含水量与NOS活性等指标对比，差异无统计学意义（均P＞0.05），而依达拉奉组AQP-4的表达水平显著低于脑缺血再灌注组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

3 讨论

进行脑缺血-再灌注后，往往容易产生大量的氧自由基，进而损伤细胞膜，使得细胞膜的通透性功能异常[4]，最终导致细胞发生毒性水肿。而丙二醛（MDA）是氧自由基通过引发脂质过氧化反应后，形成的一种降解产物[5]，有研究[6]指出，通过测定MDA的变化，可以反映出脑组织中氧自由基含量的改变情况；一氧化氮合酶（NOS）在调节一氧化氮含量的环节中，具有十分重要的地位，而一旦发生脑缺氧，则可增强NOS的活性，生产出大量的一氧化氮，进而导致细胞线粒体受到损伤，所以测定NOS的活性，可以在一定程度上评估脑组织损伤程度；水通道蛋白4（AQP-4）是脑组织中含量最丰富的水孔蛋白物质，据相关[7]研究资料表明，AQP-4的表达水平的高低，与脑梗死等疾病引起的脑水肿症状有关。而临床上使用的依达拉奉，正好是治疗脑水肿症状的药物，因此，在临床试验研究中，我们通过测定动物模型的以上相关指标，以寻找出依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用机制。

已经有研究[8]证实，依达拉奉可以抑制AQP-4的表达，降低丙二醛（MDA）含量、大鼠脑组织含水量以及一氧化氮合酶（NOS）活性，而在本次研究中，再灌注后3 d对依达拉奉组大鼠的相关指标，进行测定后发现，MDA含量、NOS活性、脑组织含水量与AQP-4表达水平分别为：（5.18±0.13）nmol/mg、（40.12±2.12）U/mg、（76.87 ±1.11）%与（86.71±1.17），与脑缺血再灌注组相比，均显著降低，与相关研究报道[9]结果相似，充分说明，依达拉奉对降低MDA含量、NOS活性、组织含水量以及抑制AQP-4的表达，具有显著性效果。而在再灌注后7 d测定发现，以上相关指标的数值，均在不同程度上恢复至正常水平，但从AQP-4方面分析，依达拉奉组的AQP-4表达水平，仍然显著低于脑缺血再灌注组，再次证明，依达拉奉对抑制AQP-4的表达的有效性。此外，有研究[10]指出，于再灌注后的6 h、1 d、3 d分别对以上指标进行测定，可以发现指标值在升高，这需要本文进一步分次测定时间，并扩大研究样本的容量，为临床试验结论提供更可靠依据。

综上所述，依达拉奉药物能够降低脑缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、脑组织含水量，抑制AQP-4的表达，从而起到减轻脑水肿，保护大鼠神经的作用。

[1] 侯晞,梁枫,李爱剑,等.银杏叶提取物联合依达拉奉对气虚血瘀型脑缺血/再灌注大鼠血液学的影响[J].中国药理学通报,2010,26 (8):1049-1053.

[2] 韩秋,沈丽华,张翠,等.依达拉奉对脑缺血大鼠内源性神经干细胞的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(32):5962-5966.

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[5] 邓洪波,胡信群,李友元,等.依达拉奉合用尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用[J].中国新药与临床杂志,2006, 25(1):36-38.

[6] 谢惠芳,徐如祥,魏继鹏,等.依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响[J].中华神经医学杂志,2008,7(10):1009-1012.

[7] 雷立芳,涂秋云,资晓宏,等.依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响[J].广东医学,2008,29(7):1128-1130.

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[10] 薛晶,韩冬,邓方,等.依达拉奉对脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究[J].中风与神经疾病杂志,2009,26(1):18-20.

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