依达拉奉联合尼卡地平对肝脏缺血再灌注影响的临床研究

杜学柯 黄 冰 彭丹晖 顾永辉 林 飞

（广西医科大学附属肿瘤医院，广西 南宁 530021）

依达拉奉联合尼卡地平对肝脏缺血再灌注影响的临床研究

杜学柯 黄 冰 彭丹晖 顾永辉 林 飞

（广西医科大学附属肿瘤医院，广西 南宁 530021）

目的探讨依达拉奉联合尼卡地平对肝癌患者肝脏缺血再灌注损伤的保护作用的临床研究。方法80例患者随机分为四组，A组：肝阻断前20 min恒速静脉输入生理盐水250 mL。B组：阻断前20 min输入尼卡地平。C组：阻断前20 min恒速静脉输入依达拉奉。D组：阻断前20 min静脉输入尼卡地平和依达拉奉。于手术前（T0）和肝切除后30 min（T1）、1 h（T2）、术后1 d（T3）和2 d（T4）取静脉血行丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）测定，取切下肝脏组织相对正常的肝组织测定丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果肝细胞匀浆中的MDA水平在C、D组比对照组A组比较低，差异有显著性（P＜0.05）。SOD含量C、D组比对照组A组比较高，差异有显著性（P＜0.05）。在肝切除后30 min（T1）、1 h（T2）、术后1 d（T3）和2 d（T4）各时间点血清中ALT、AST含量B、C组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），D组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论依达拉奉联合尼卡地平使用对肝脏缺血再灌注损伤有一定保护作用，且具有协同效果。

尼卡地平；依达拉奉；肝脏；缺血再灌注损伤

近年来对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用已是研究热点，而药物性预处理是其主要途径。肝脏缺血再灌注损伤的主要病理生理过程是钙超载及氧自由基增多等。尼卡地平是一种二羟吡啶类钙通道阻断药，有较高的脂溶性和较低的PKa，易于分布于缺血的细胞膜。依达拉奉（edaravone，MCI-186，ED）是一种新型的自由基清除剂，已有动物研究表明依达拉奉对缺血再灌注脏器损伤有保护作用[1]，但是对肝脏缺血再灌注损伤的研究和临床报道比较少。此两种药联合用于肝脏缺血再灌注损伤的临床效果尚未见报道。本研究探讨依达拉奉联合尼卡地平对肝脏缺血再灌注损伤是否有保护作用，是否有协同作用。总结分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究已获本院医学伦理委员会批准，并与患者或其家属签署知情同意书。选择2011年7月至2013年6月在我院行择期肝叶切除的原发性肝癌ASA分级Ⅰ～Ⅱ级，术前肝功能评估均为Child-Pugh A级排除肝硬化的患者80例，男57例，女23例，年龄35～68岁，随机分为对照组（A组），尼卡地平组（B组），依达拉奉组（C组）和尼卡地平联合依达拉奉组（D组）。病例排除标准：①术前合并贫血、糖尿病、原发性高血压、门静脉高压、心功能异常、肺部感染、肝肾功能异常、凝血功能障碍等者；②术中出血量超过800 mL。四组患者均为同一组外科医师和麻醉医师完成手术，肝切时均于Pringle手法阻断第一肝门。术后患者标本常规病理，确诊肝癌患者。

1.2 方法

所有患者常规气管插管静脉麻醉。A组：肝阻断前20 min恒速静脉输入生理盐水250 mL（30 min内完成）；B组：肝门阻断前20 min开始按照0.05～0.5 µg/（kg·min）静脉输注尼卡地平维持平均动脉压＞60 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），若MAP＜60 mm Hg，给予输液冲击治疗（30 min后结束）；C组：生理盐水250 mL内加入30 mg依达拉奉，肝门阻断前20 min恒速静脉输入（30 min内完成）；D组：肝门阻断前20 min开始按照0.5～1 µg/（kg·min）静脉输注尼卡地平维持平均动脉压＞60 mm Hg，同时恒速静脉输入依达拉奉（方法同C组）。手术方式为肝段切除或局部切除，患者术后入ICU观察复苏，术后使用相同的抗生素、护肝药及静脉营养支持治疗。

1.3 测定指标

于手术前（T0）和肝切除后30 min（T1）、1 h（T2）、术后1 d（T3）和2 d（T4）取静脉血行丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST），送本院检验科全自动生化分析仪测定；取切下肝脏组织相对正常的肝组织300 mg，剪碎后制备成10%肝组织匀浆10 mL，测定超氧化物歧化酶（SOD）（南京建成生物工程公司试剂盒）及丙二醛（MDA）（巴比妥酸法）的含量。

1.4 统计学处理

实验数据以均数±标准差表示，用SPSS14.0医用统计软件分析进行统计学处理，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般资料比较

四组患者一般情况，年龄、性别、肿瘤大小、阻断时间、出血量和手术时间均无明显统计学差异（P＞0.05）。见表1。

表1 各组一般情况比较

表3 各组不同时间点血清中ALT、AST含量的比较

2.2 各组术后肝组织内MDA、SOD含量的比较

MDA水平C、D组比A组低，差异有显著性（P＜0.05）。SOD含量C、D组比A组高，差异有显著性（P＜0.05）。见表2。

表2 各组肝组织内MDA、SOD含量的变化

2.3 各组血清不同时间点ALT、AST含量的变化

在T1、T2、T3、T4时间点血清中ALT、AST含量B、C组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），D组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01），见表3。

3 讨 论

肝脏缺血再灌注损伤是复杂的病理生理过程，其影响因素是多方面的，包括：细胞内钙超载；氧自由基；细胞因子；一氧化氮与内皮素；细胞凋亡；核因子κB；Kupffer细胞的激活；中性粒细胞的生成增加；内毒素；微循环障碍等[2-6]。其中细胞内钙超载和氧自由基是HIRI主要的病理生理机制，改变线粒体膜通透性，导致肝脏细胞缺氧再灌注损伤[7，8]。导致肝功能损害程度的血清酶指标AST和ALT增高。因此本研究通过测定血清中AST和ALT的活性来评价肝功能损伤程度。

目前，预防肝脏缺血再灌注的措施包括药物预处理、缺血预处理、局部热应预处理、热休克预处理、臭氧氧化预处理和缺氧预处理等。在这些措施中常用方法是药物预处理。对肝脏缺血再灌注损伤具有预处理效果的药物主要有钙通道阻断药、自由基清除剂，改善微循环或细胞能量代谢的药物等。由于肝脏缺血再灌注损伤是主要的病理生理过程是细胞内钙超载和氧自由基。本研究选用尼卡地平和依达拉奉这两种药物。尼卡地平可以抑制跨膜钙离子内流。有研究表明其对脑、心脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用[9]，尼卡地平选择性扩张动脉血管，保护心脑肾等靶器官，血流动力学平稳，在控制性降压中越来越受到关注，而在肝切除的手术过程中需要控制性降压和低中心静脉压。从本研究结果发现对肝脏缺血再灌注损伤是有一定的保护作用，此作用机制可能与抑制跨膜钙离子内流有关。依达拉奉是一种小分子量的自由基清除剂，穿透性比较强[10]。具有独特的清除自由基和抑制脂质过氧，减轻再灌注损伤的作用[11]。本研究结果显示对肝脏缺血再灌注损伤是有一定的保护作用，其机制可能是清除氧自由基，稳定肝细胞膜、线粒体膜以及溶酶体膜等，防止发生脂质过氧化反应，防止产生大量有毒的脂质过氧化产物。由于肝脏缺血再灌注损伤机制是一个层层递进，环环相扣、多因素参与的复杂过程，其防治应该采用针对性联合用药。

本实验探讨联合应用尼卡地平和依达拉奉对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。结果显示联合应用尼卡地平和依达拉奉能更好的明显降低血清中ALT、AST水平。此外联合应用可以降低肝组织内MDA、水平，增加SOD含量。因此，我们认为尼卡地平和依达拉奉预处理可以对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，联合起来应用具有协同作用。

[1] Erqenoqlu M,Erbas O,Akdemir A,et al.Attenuation of Ischemia/ Reperfusion-Induced Ovarian Damage in Rats: Does Edaravone Offer Protection?[J].Eur Surq Res,2013,51(1/2):21-32.

[2] Liu XH,Aksan A,Menze MA,et al.Trehalose loading through the mitochondrial permeability transition pore enhances desiccation tolerance in rat liver mitochondria[J].Biochim Biophys Acta,2005,1717(1): 21-26.

[3] Demirbilek S,Karaman A,Gürünlüoğlu K,et al.Polyenylphosp hatidylcholine pretreatment protects rat liver from ischemia/ reperfusion injury[J].Hepatol Res,2006,34(2): 84-91.

[4] Sun K,Liu ZS,Sun Q,et al.Role of mitochondria in cell apoptosis during hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effect of ischemic postconditioning[J].Gastroenterol,2004,10(13):1934-1938.

[5] Crow MT,Mani K,Nam YJ,et al.The mitochondrial death pathway and cardiac myocyte apoptosis[J].Circ Res,2004,95(10):957-970.

[6] Lisa FD,Bernardi P.Mitochondria and ischemia-reperfusion injury of the heart: fixing a hole[J].Cardiovasc Res,2006,70(2):191-199.

[7] Sasaki M,Joh T.Oxidative stress and ischemia-reperfusion injury in gastronintestinal tract and antioxidant,protective agents[J].J Clin Biochem Nutr,2007,40(1):1-12.

[8] Lichtman SN,Lemasters JJ.Role of cytokines and cytokineproducing cells in reperfusion injury to the liver[J].Semin Liver Dis,1999,19(3):171-187.

[9] 王天龙,于德水,张京范.小剂量尼卡地平对心脏外科围术期心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中华麻醉学杂志,2002,22(4):203-206.

[10] Tomatsuri N,Yoshida N,Takagi T,et al.Edaravone,a newly developed radical scavenger,protects against ischemia-reperfusion injury of the small intestine in rats[J].Int J Mol Med,2004,13(1):105.

[11] 宋德静,孔连宝,卢思聪,等.依达拉奉对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J].南京医科大学学报(自然科学版),2008, 28(7):881-884.

Clinical Study of the Protective Effect of Thenicardipine Combined with Edaravone on Hepatic Ischemia-reperfusion Injury

DU Xue-ke, HUANG Bing, PENG Dan-hui, GU Yong-hui, LIN Fei
(Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China)

ObjectiveTo investigate the protective effects of nicardipine combined with edaravone on hepatic ischemia-reperfusion injury.MethodsSelected 80 patients, and they were randomly divided into four groups, pretreatment with saline (A); pretreatment with nicardipine (B); pretreatment with edaravone (C); pretreatment with nicardipine combined with edaravone (D). The concentrations of alanine transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) in serum were measured. Hepatic cell homogenate levels of MDA, SOD were measured.ResultsHepatic cell homogenate levels of MDA were lower in C, D than that in group A(P＜0.05), and SOD were higher (P＜0.05). In the T1, T2, T3and T4, the plasma levers of ALT, AST were lower in group B, C than that in group A (P＜0.05), those were remarkably lower group D than that in group A (P＜0.01).ConclusionThe nicardipine combined with edaravone in the treatment for hepatic ischemia-reperfusion injury has protective effects, and has obvious synergies.

Nicardipine; Edaravone; Liver; Ischemia-reperfusion injury

R333.4

B

1671-8194（2014）24-0016-02