野菊花水提物对小鼠的镇痛作用

吴琼，马宏达，孙学惠，胡北，贾辉，陈宇峰

(沈阳军区总医院药剂科，沈阳 110840)

野菊花水提物对小鼠的镇痛作用

吴琼，马宏达，孙学惠，胡北，贾辉，陈宇峰

(沈阳军区总医院药剂科，沈阳 110840)

目的 观察野菊花水相萃取物(AF)对小鼠的镇痛作用。方法采用辣椒素致痛小鼠模型,以小鼠舔足时间为指标,观察小鼠5 min内舔足总时间;采用小鼠热水甩尾法疼痛模型,记录甩尾潜伏期;进行开场实验,考察AF对小鼠自主活动和探索行为的影响;对阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的作用,以翻正反射消失和恢复为指标,记录小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间。结果AF可显著减少小鼠舔足时间,使热水所致小鼠甩尾潜伏期明显延长,对小鼠自主活动无影响,对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠无影响。结论AF对小鼠有明显的镇痛作用,这种镇痛作用与自主活动和镇静作用无关。

野菊花；戊巴比妥钠；镇痛作用；甩尾实验；开场实验

野菊花为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥头状花序,其性凉,味苦、辛,归肝、心经,具有清热解毒、泻火平肝之功效,用于疔疮痈肿、目赤肿痛、头痛眩晕[1-3],药用历史悠久。研究证明:野菊花具有抗病毒、降压、清除氧自由基等作用[2],文献报道野菊花水相萃取物(AF)在实验中表现出潜在的镇痛活性[3]。笔者在本研究中通过辣椒素致痛小鼠模型、小鼠热水甩尾法疼痛模型,开场实验及阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠实验考察野菊花镇痛作用,为探讨其药理作用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级昆明种小鼠[合格证号:SCXK(辽) 2010-0001,辽宁长生生物技术有限公司提供],体质量(20±2)g,雌雄兼用。自由饮食饮水,适应性饲养3 d后用于实验。

1.2 药物及样品制备 野菊花购自河北省安国市健仁药材有限公司,产地:湖北,批号:090103,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥头状花序。药材标本保存于沈阳军区总医院药剂科实验室。AF的制备:将野菊花的干花和花蕾(3 kg)用75%乙醇在80℃回流提取,将提取液减压浓缩回收乙醇,得到浓缩稠膏459.4 g,将稠膏先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取。将水相萃取液减压浓缩,得到残渣100.1 g,用于镇痛活性测定,即每克水相萃取物相当于野菊花生药29.97 g。

1.3 试剂 辣椒素(美国SIGMA CHEMICAL公司,批号:123H78341)；地西泮注射液(上海旭东海普药业有限公司,规格:2 mg∶10 mL,批号:AH111101,临用前用0.9%氯化钠溶液配成所需浓度)；盐酸吗啡注射液(青海制药厂,规格:每支0.5 mg,批号:2004-02-19,临用前溶解在0.9%氯化钠溶液中)；戊巴比妥钠(上海西悦生物科技有限公司,批号:20110826)；水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

1.4 仪器 HH-2数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)。

1.5 对辣椒素致痛小鼠的镇痛作用 取小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分组依次灌胃给予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白对照组给予等体积的溶媒。于给药1 h后(阳性药组于皮下注射吗啡30 min后,10 mg·kg-1),右足足底注射辣椒素(1.6 μg,25 μL)。记录每只小鼠在给予足底注射辣椒素后5 min内的舔足总时间[4]。

1.6 对小鼠热水甩尾法疼痛模型的镇痛作用 在室温26℃条件下,取小鼠,雌雄兼用,将小鼠尾端3 cm浸入(54±1)℃恒温水浴中,以甩尾潜伏期为指标,给药前潜伏期测3次,间隔为25 min。求其平均值,取潜伏期≤4 s为合格鼠。取合格小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分组依次灌胃给予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白对照组给予等体积的溶媒。于给药1 h后(吗啡阳性药组于皮下注射30 min后, 10 mg·kg-1)进行正式测试,记录甩尾潜伏期,为了尽量减少组织损伤截止时间为8 s[5-8]。

1.7 开场实验 考察AF对自主活动和探索行为的影响,进行开场实验,参照TSUDA等[9]方法,记录动物5 min内直立次数,由底面中心开始走动的穿越格数,及不动的总时间。取小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分别给予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白对照组给予等体积的溶媒。于给药1 h后(阳性药组于腹腔注射地西泮30 min后, 1 mg·kg-1)进行实验[5,9-10]。

1.8 对阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的作用 取小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分组依次灌胃给予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白对照组给予等体积的溶媒。于给药1 h后(阳性药组于腹腔注射地西泮30 min后,1 mg·kg-1)腹腔注射戊巴比妥钠45 mg·kg-1,以翻正反射消失和恢复为指标,记录小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间(翻正反射消失达1 min以上者确定为阳性,即已入睡)[5,11-12]。

1.9 统计学方法 实验数据采用SPSS17.0版软件统计分析,各组数据以均数±标准差(±s)表示,组间均数比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 AF对辣椒素致痛小鼠的镇痛作用 结果显示,对辣椒素引起的伤害性刺激,AF各剂量组及吗啡组均可显著减少小鼠舔足时间。说明AF对辣椒素致痛小鼠有一定的镇痛作用。见表1。

表1 AF对辣椒素致痛小鼠的镇痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

表1 AF对辣椒素致痛小鼠的镇痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

与空白对照组比较,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

组别小鼠/只剂量/(mg·kg-1)舔足时间/s AF低剂量组107569.9±11.8*1中剂量组1015066.7±5.4*1高剂量组1030045.3±4.7*1吗啡组1010 2.9±1.2*1空白对照组100105.8±12.3

2.2 AF对小鼠热水甩尾法疼痛模型的镇痛作用 结果显示,与空白对照组比较,AF中、高剂量组及吗啡组可延长伤害性刺激小鼠的甩尾反应时间(P＜0.01)。说明AF对小鼠热水甩尾法疼痛模型有镇痛作用。见表2。

表2 AF对小鼠热水甩尾法疼痛的影响Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

表2 AF对小鼠热水甩尾法疼痛的影响Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

与空白对照组比较,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

组别小鼠/只剂量/(mg·kg-1)甩尾潜伏期/s AF低剂量组10753.35±0.18中剂量组101506.19±0.22*1高剂量组103004.32±0.27*1吗啡组10106.98±0.21*1空白对照组1003.17±0.30

2.3 AF对小鼠开场实验的影响 结果显示,AF各剂量组小鼠自主活动未受影响,5 min内直立次数,由底面中心开始走动的穿越格数,及不动的总时间与空白对照组比较差异无统计学意义。阳性药地西泮(1 mg·kg-1)组与空白对照组比较,显著影响小鼠自主活动。说明AF对小鼠自主活动无影响。

2.4 AF对阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的作用 结果表明,AF各剂量组对阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的睡眠潜伏期和睡眠时间与空白对照组比较无统计学意义,仅地西泮组睡眠潜伏期明显短于空白对照组,且睡眠时间显著延长(P＜0.001)。说明AF对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠无影响。见表3。

表3 AF对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

表3 AF对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

与空白对照组比较,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

组别小鼠/只剂量/(mg·kg-1)睡眠潜伏期睡眠时间min AF低剂量组10755.48±0.6059.36±7.34中剂量组101505.46±0.5059.97±9.00高剂量组103005.58±0.4655.00±4.39地西泮组1013.44±0.22*1142.17±11.65*1空白对照组1005.38±0.7553.81±4.94

3 讨论

野菊花作为一种传统的抗炎中药已被许多古代医书记载。现代药理研究表明,野菊花的乙醇提取物可以减少一氧化氮(NO)和前列腺素在炎性组织中的合成[13]。野菊花的抗炎特性已被广泛研究,但其镇痛活性可能被忽视了,因此,笔者研究野菊花的乙醇提取物的镇痛活性,并先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取,收集萃取液,分别研究其镇痛活性。

本研究通过两种经典的疼痛模型观察AF的镇痛作用。其中热水浴甩尾致痛为中枢镇痛模型,辣椒素致痛为外周镇痛模型。中枢镇痛模型实验结果表明, AF在150,300 mg·kg-1剂量可延长伤害性刺激小鼠的甩尾反应时间。在外周镇痛模型实验中,AF75, 150,300 mg·kg-1组可显著减少小鼠舔足时间。提示AF的镇痛作用可能通过中枢及外周发挥镇痛作用。开场实验和戊巴比妥钠诱导的睡眠时间的测试表明, AF对小鼠的自主活动等行为没有显着影响。

研究表明,从野菊花的乙醇提取物中分离出来的大量的类黄酮苷和酚苷类有显著的抗炎特性[14],这些化学物很容易地分布在野菊花的水相萃取物中。野菊花的水相萃取物能抑制炎性因子的释放和增强痛阈值,这可能与抗炎和镇痛作用有关。因此,该研究表明,镇痛活性可能与黄酮苷类化合物和酚苷有关。

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DOI 10.3870/yydb.2014.04.009

Analgesic Effect of Water Extract from Chrysanthemum Indicum on Mice

WU Qiong,MA Hong-da,SUN Xue-hui,HU Bei,JIA Hui,CHEN Yu-feng
(Department of Pharmacy, General Hospital of Shenyang Military Area Command,Shenyang 110840,China)

Objective To study the analgesic effect of the water extract fromChrysanthemum indicumon mice.MethodsAlgogenic model of mice was induced by injection of capsaicine in the paws.Total time of paws-licking in 5 min after injection of capsaicin was observed from the mice.The analgesic effects of the extract were respectively observed by subplantar capsaicin injection and tail-flick test.The open-field test and pentobarbital sodium-induced sleeping time test were observed.ResultsGiven orally,the extract produced significant inhibition on chemical nociception induced by subplantar capsaicin injection and on thermal nociception in the tail-flick test.In the pentobarbital sodium-induced sleeping time test and the open-field test,the extract neither significantly enhanced the pentobarbital sodium-induced sleeping time nor impaired the motor performance.ConclusionChrysanthemum indicumhas analgesic effects that are unlikely related to sedation or motor abnormality.

Chrysanthemum indicum;Pentobarbital sodium;Analgesic effect;Tail-flick test;Open-field test

R282.71;R285.5

A

1004-0781(2014)04-0446-03

2013-03-29

2013-11-20

吴琼(1984-),女,黑龙江人,药师,硕士,研究方向:中药新药研发及中药药理。电话:024-28851751,E-mail：wuqiongbaby@gmail.com。

陈宇峰(1978-),男,黑龙江人,主管药师,博士,研究方向:中药新药研发及中药药理。电话:024-28851750,E-mail：yufengchen1978@163.com。