高效液相色谱法测定藤梨根中大黄素的含量*

滕 坤，于思文

（通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化 134002）

高效液相色谱法测定藤梨根中大黄素的含量*

滕 坤，于思文

（通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化 134002）

目的:建立测定藤梨根中大黄素含量的高效液相色谱方法.方法:采用高效液相色谱法测定.选用Agilent－C18色谱柱（250mm ×4.6mm，5μm）;流动相:甲醇 －0.1%磷酸水溶液（85:15）;检测波长:254nm;流速:1.00mL·min－1;柱温:室温.结果:大黄素在0.0417～0.2088μg范围内线性关系良好，r=0.9992，平均加样回收率为101.4%.结论:高效液相色谱法操作简便，快速，准确，重现性好，适合藤梨根中大黄素含量的测定.

高效液相色谱法;藤梨根;大黄素

藤梨根为猕猴桃科猕猴桃的根.我国是主产区，主要分布于我国东北地区及河北、山西、山东、安徽、浙江、江西、河南、湖北、云南等地，朝鲜和日本也有分布.含熊果酸（ursolic acid）、齐墩果酸（oleanolic acid）、琥珀酸（succinicacid）、胡萝卜甙（daucosterol）以及精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸等，并富含 Fe、Cu、Mn、Se 等元素.具有清热解毒，清热利湿，祛风除湿，利尿止血，解毒消肿，止血的功效，适用于多种疾病的治疗.藤梨根常被用于主治黄疸，消化不良，呕吐，风湿痹痛，消化道癌肿，痈疡疮疖，跌打损伤，外伤出血，乳汁不下等.

大黄素，化学名称为6－甲基－1，3，8－三羟基蒽醌，是从大黄属、蓼属、鼠李属和番泻叶等中药中分离得到的活性成分.大黄素具有广泛的药理作用，如具有抗肿瘤活性，解痉、止咳作用，对心血管系统的作用，利尿作用，对组胺的作用，对LTB4的合成作用，泻下作用等.近年来，对大黄素药理作用机制进行的大量深入研究发现，大黄素药理作用主要集中在抑制细胞增殖、抗炎、抑制肝脏和肾脏纤维化等方面.本文用高效液相色谱法测定藤梨根中大黄素的含量，为藤梨根的进一步研究奠定基础.

1 仪器与试药

1.1 仪器

Aglient 1100型高效液相色谱仪（Aglient公司）;MP21001型电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）;超声波提取仪（昆山市超声仪器有限公司）;容量瓶（5mL，10mL，50mL）;电热套;量筒;蒸发皿;0.45μm 微孔滤膜;漏斗;滤纸.

1.2 试药

藤梨根（购置于通化百泉中药饮片有限公司，经于俊林教授鉴定为软枣猕猴桃的根）;0.1%磷酸水溶液;甲醇（分析纯）;大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号:0756－200805）.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Hypersil－C18色谱柱（250mm ×4.6mm，5μm）;流动相:甲醇－0.1%磷酸水溶液（85:15）;检测波长:254nm;流速:1.00mL·min－1;柱温:室温.

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品5.22mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取大黄素对照品2mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含20.88μg的大黄素对照品溶液.

2.3 供试品溶液的制备

精密称定藤梨根粉末6.0332g，精密加入甲醇50mL，称定重量，放超声波提取仪中超声30min，放冷后补足重量，滤过，精密吸取续滤液25mL致蒸发皿中蒸干，蒸干后的残渣用少量甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液.

2.4 线性关系的考察

精密吸取大黄素对照品溶液 2、4、6、8、10μL，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件分别进行分析，测定其峰面积积分值（表1），以峰面积积分值（A）与进样量（X）进行线性回归，得回归方程为:A=2806.6X－1.4318，r=0.9992，结果表明，大黄素在0.0417 ～0.2088μg范围内与其色谱峰峰面积呈良好的线性关系（图1）.

表1 大黄素的浓度、峰面积

图1 大黄素标准曲线图

2.5 精密度实验

精密吸取对照品溶液15μL，按“2.1”项中的色谱条件进样，连续进样5次，测定峰面积，大黄素峰面积RSD=1.0%，说明精密度良好.

2.6 稳定性试验

精密吸取对照品溶液 15μL，分别在 0、1、2、3、4h进样，测定大黄素峰面积并记录峰面积，结果显示，样品在4h内基本稳定，其RSD为0.9%.

2.7 重复性试验

精密称取已知含量的供试品溶液15μL，按“2.1”项中的色谱条件连续测定5次，计算大黄素含量，测得其RSD值为1.2%，表明本方法重现性良好.

表2 加样回收率试验结果

2.8 加样回收率试验

精密称定已知含量的供试品5份，每份3g，适量加入对照品溶液，按照“供试品溶液的制备”项下方法处理，依照其方法测定，计算回收率（表2），大黄素的平均回收率为101.4%，RSD为1.3%.

2.9 样品的测定

取购置于通化百泉中药饮片有限公司的藤梨根样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备溶液，并取对照品溶液，分别进样测定，结果如图2、图3所示.计算样品中大黄素的含量，结果测得，藤梨根中大黄素的含量为 6.30μg·g－1.

图2 对照品溶液色谱图

图3 藤梨根大黄素样品色谱图

3 结论与讨论

根据文献报道的含大黄素制剂中大黄素的含量测定条件，单纯甲醇与水作用为流动相，尽管也能得到较好地分离，但大黄素表现不稳定.用0.1%的磷酸水溶液代替水可增强大黄素的稳定性.本文对流动相比例进行了调整，选择甲醇－0.1%磷酸水溶液（85:15）为流动相，检测波长为 254nm，流速为1.00mL·min－1，柱温为室温，大黄素色谱峰分离良好.

本文建立了藤梨根中大黄素的含量测定方法，该法简便，快速、准确，重现性好，为藤梨根及其复方的质量标准研究提供一定的科学依据，对藤梨根中其他化合物的定量也提供了一定的参考.

［1］朱海涛，陈吉炎，安志斌，等.藤梨根的生药鉴定［J］.中药材，2008，31（8）:1131 －1134.

［2］陈德轩，潘立群.抗肿瘤植物药藤梨根［J］.中药材，2004，27（2）:86－87.

［3］张强，李曼玲，王谦，等.中药藤梨根研究概况［J］.中药中医学信息杂志，2008，15（11）:101 －102.

［4］李杰，张陆勇，江振洲.大黄素的药理学研究近况［J］.药学进展，2005，29（12）:540－544.

R931

A

1008－7974（2014）03－0042－02

2014－03－25

滕坤（1975－），女，硕士，副教授，制药与食品科学学院副院长.

国家自然基金青年基金项目（31100254）.

（责任编辑:陈衍峰）