乙肝病毒携带产妇血清标志物模式与血清及乳汁HBV-DNA相关性研究

朱珉之，杭双熊，申红玉

(常州市第三人民医院检验科，江苏 常州 213001)

·论著·

乙肝病毒携带产妇血清标志物模式与血清及乳汁HBV-DNA相关性研究

朱珉之，杭双熊，申红玉

(常州市第三人民医院检验科，江苏 常州 213001)

目的通过检测分析乙肝病毒携带产妇血清学标志物与血清、乳汁HBV-DNA阳性率的关系，以及产妇血清与乳汁中HBV-DNA含量之间的相关性，旨在指导母乳喂养。方法选取96例乙肝病毒携带产妇，将其分为大三阳组(54例)、小三阳组(25例)、HbsAg和HbeAg均阳性组（8例）及HbsAg和HbcAb均阳性组（9例）。另选取12例乙肝两对半全阴的产妇作为对照组。ELISA法检测乙肝病毒携带产妇乙肝免疫血清学标志物，实时荧光定量PCR法分别检测产妇血清与乳汁中HBV-DNA含量，并对所有检测指标进行相关性分析。结果大三阳组产妇血清和乳汁HBV-DNA阳性率明显高于其他三组(P＜0.05)。乳汁HBV-DNA在各组中检出的阳性率均小于血清HBV-DNA，但两者差异无统计学意义(P＞0.05)。根据乙型肝炎血清学标志物HBeAg是否阳性将96例产妇分为HBeAg阳性组(62例)和HBeAg阴性组(34例)，血清HBeAg阳性产妇的血清和乳汁中HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性产妇，差异具有统计学意义(P＜0.01)。但一部分血清HBeAg阴性产妇血清和乳汁中HBV-DNA亦为阳性。产妇血清与乳汁中HBV-DNA含量呈正相关(r=0.891，P＜0.05)。结论乙肝病毒携带产妇乳汁HBV-DNA检出的阳性率低于血清HBV-DNA，且乳汁HBV-DNA含量随血清HBV-DNA含量的升高而增大，因此定量双重检测产妇血清、乳汁中HBV-DNA来确定母婴乙肝病毒传播的风险性更为可靠，这将有利于阻断乙肝传播，确定哺乳方式，指导母乳喂养，从而降低乙肝新生儿感染率。

乙型肝炎病毒；HBV-DNA；血清；乳汁

乙型肝炎(Hepatitis B，HB)广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转换成肝硬化或肝癌，也是我国当前流行最为广泛、危害最为严重的一种疾病。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)主要经血液和体液传播。我国约有2～3千万人为慢性乙肝患者，30%～50%的慢性乙肝病毒是通过母婴传播的[1]，而母婴传播最为活跃的因素之一就是乳汁传播[2]。阻断母婴传播对控制下一代乙型肝炎及相关疾病具有重要意义。血液或乳汁中HBV-DNA阳性是乙型肝炎具有传染性的最直接、特异和灵敏的指标。因此，本文通过检测产妇血清和乳汁中HBV-DNA含量及乙型肝炎各种免疫血清学模式，对其相关性进行比较分析，将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2011年9月至2013年9月在我院产科住院分娩的96例乙肝病毒携带产妇作为研究对象，年龄21～33岁，乙肝诊断标准均符合2010版的《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。另选同期12例乙肝两对半全阴的产妇作为对照组。

1.2 标本采集抽取分娩前孕妇静脉血5 ml置于无抗凝剂试管，离心取血清分装成两管，分别进行乙肝血清学标志物和HBV-DNA检测；产妇分娩2～3 d分泌初乳后，用无菌盐水清洗乳头，收集初乳3～5 ml置于无菌干燥试管内，离心后取中层乳清进行HBV-DNA检测。

1.3 检测方法用酶联免疫吸附法(ELISA)对产妇乙肝血清学标志物进行检测，试剂由北京万泰生物药业有限公司提供，仪器为BIO-PAD3550型酶标仪；采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测产妇血清和乳汁中HBV-DNA含量，试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供，自动荧光PCR扩增仪采用美国ABI公司7500型定量PCR仪。

1.4 统计学方法应用SPSS19.0软件进行统计分析。计数资料以百分率表示，行χ2检验。产妇血清和乳汁中HBV-DNA含量相关性分析采用SPSS19.0软件进行相关性检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 产妇乙肝血清学模式及血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA结果分析由表1可见，乙肝病毒携带产妇的血清HBV-DNA阳性率为71.9%，乳汁HBV-DNA阳性率为60.4%，两者差异无统计学意义(P＞0.05)。96例乙肝病毒携带产妇根据其免疫血清学模式分为大三阳组(HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性)、小三阳组(HBsAg、HBeAb、HbcAb阳性)、HbsAg和HbeAg均阳性组及HbsAg和HbcAb均阳性组。大三阳组产妇血清和乳汁HBV-DNA阳性率明显高于其他三组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。大三阳组与小三阳组产妇血清、乳汁中HBV-DNA阳性率比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。大三阳组产妇血清和乳汁中HBV-DNA阳性率与HbsAg和HbcAb均阳性组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。同一组别中，乳汁HBV-DNA检出的阳性率均小于血清HBV-DNA，但两者差异无统计学意义(P＞0.05)。12例对照组产妇血清与乳汁HBV-DNA均无阳性结果。

表1 乙型肝炎血清学模式及血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA结果

2.2 血清HBeAg阳性组与HBeAg阴性组产妇乳汁HBV-DNA检测结果相关性分析根据乙型肝炎血清学标志物HBeAg是否阳性将96例产妇分为HBeAg阳性组(62例)和HBeAg阴性组(34例)，其中HBeAg阳性组产妇的乳汁HBV-DNA阳性数为49例，阳性率达79.0%；HBeAg阴性组产妇的乳汁HBV-DNA阳性数仅有9例，阳性率为26.5%。可知血清HBeAg阳性产妇的乳汁中HBV-DNA阳性率明显高于HBeAg阳性产妇，两者比较差异具有统计学意义(χ2=23.01，P＜0.01)。

2.3 产妇血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA定量检测结果由表2可知，乙肝病毒携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA均阳性者，血清乙肝病毒载量高于乳汁中病毒载量，且乳汁HBV-DNA含量随着血清HBV-DNA含量的升高而增大，呈正相关(r=0.891，P＜0.05)。

表2 血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA定量检测结果

3 讨论

母乳是婴儿成长最理想的天然食品，它是婴儿获取营养成分和免疫物质最直接和重要的方法。但是，对于携带乙肝病毒的乳母来说，母乳喂养会增加婴儿感染HBV的概率。我国是乙肝高发区，母婴垂直传播是其主要传染途径之一。乙肝病毒一般通过3种途径进行母婴传播：妊娠时经胎盘宫内感染；分娩时胎儿经过产道，因吞进羊水、血、阴道分泌物而引起感染；产后密切接触或母乳喂养获得感染[4-5]。由于新生儿的免疫功能尚不完善，当任何一处消化道黏膜发生炎性反应或者破损时，母乳中的HBV就可能通过毛细血管进入婴儿血液循环，导致乙肝病毒感染[6]。

HBV免疫血清学标志物中HBsAg、HBeAg阳性通常被认为是HBV感染的证据，其中HBeAg是HBV复制过程中产生的副产物，较HBsAg出现晚、消失早，HBeAg的存在说明传染性强，是HBV活跃复制的一个指标[7]。HBV-DNA是HBV的基因组成和复制模板，其检出与否和复制拷贝数是衡量乙肝传染性强弱和治疗有效与否最直接的指标。

本研究结果表明，乙肝病毒携带产妇血清HBV-DNA检测呈阳性者，其乳汁中亦可能存在HBV-DNA，且其含量与血清HBV-DNA含量呈正相关(r=0.891，P＜0.05)，但其检出的阳性率均小于血清HBV-DNA，虽然两者的检出率差异无统计学意义(P＞0.05)，但是定量双重检测产妇血清和乳汁中HBV-DNA，可以降低乙肝病毒母婴垂直传播的概率。血清HBeAg阳性产妇的血清和乳汁中HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性产妇，差异具有统计学意义(P＜0.01)，提示产妇血清和乳汁中HBV-DNA的表达与其血清HBeAg的表达存在一定相关性。然而一部分血清HBeAg阴性产妇的血清和乳汁中HBV-DNA亦为阳性，如果只单纯检测其免疫血清学标志物，就容易忽视乳汁的传播性。因此，联合检测产妇血清中的免疫血清学标志物、HBV-DNA和乳汁中的HBV-DNA对确定乙肝病毒母婴垂直传播的风险性更为可靠。

综上所述，采用荧光定量聚合酶链反应PCR法检测HBV-DNA具有灵敏度高和特异性强的优点。乙肝病毒携带产妇无论其免疫血清学为何种模式，均应做血清和乳汁HBV-DNA定量检测，从而更准确地反应乙肝病毒在体内的复制情况和宿主的传染性强弱，进而正确的指导母乳喂养，减少婴儿感染乙肝病毒的几率。

[1]殷继明,严艳,李卓,等.HBsAg阳性产妇血清、乳汁和新生儿血清中乙肝病毒DNA检测结果分析[J].中国妇幼保健,2012,27 (1):35-36.

[2]杨红樱,王敏,庄豪.96例乙肝产妇血清及乳汁中HBV DNA检测及临床分析[J].中国实用医药,2011,6(4):71-72.

[3]贾继东,李兰娟.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].临床肝胆病杂志,2011,27(1)113-128.

[4]倪语星.临床微生物学与检验[M].4版.北京:人民卫生出版社, 2007:445.

[5]Hill JB,Sheffield JS,Ki MJ,et al.Risk of hepatitis B transmission in breast-fed infants of chronic hepatitis B carriers[J].Obstet Gynecol,2002,99(6):1049-1051.

[6]陈铭,艾彪,何瀚,等.乙型肝炎产妇血清与乳汁HBV标志物检测意义[J].检验医学与临床,2010,7(6):517-518,521.

[7]王奕芳,顾春美.乙肝病毒携带产妇乳汁乙肝病毒标志物检测及分析[J].中国实用医药,2011,6(17):12-13.

Study on the hepatitis B serum markers and the correlation between serum and milk HBV-DNA in HBV-infectious pregnant women.

ZHU Min-zhi,HANG Shuang-xiong,SHEN Hong-yu.Department of Clinical Laboratory,the Third People's Hospital of Changzhou,Changzhou 213001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveThrough analysis of the relationship between the hepatitis B serum markers in HBV-infectious pregnant women and the HBV-DNA positive rate in serum and milk,and the correlation serum and milk HBV-DNA in HBV-infectious pregnant woman,we aimed to explore some instructions on breast-feeding.MethodsNinety-six HBV-infectious pregnant women were divided into four groups,including large three-positivegroup,small three-positive group,HbsAg and HbeAg positive group,and HbsAg and HbcAb positive group.Another 12 women with hepatitis B two pairs of semi-five indicators all negative were chosen as control group.The hepatitis B virus immune markers in serum were detected by ELISA while HBV-DNA level in serum and milk was determined by real time RT-PCR,and the correlation between the detectingResultswere analyzed.ResultsThe positive rates of HBV-DNA in serum and milk of large three positive group were significantly higher than those in the other three groups(P＜0.05).Among all groups,the positive rates of HBV-DNA in milk were less than those in serum with no significant difference(P＞0.05).The HBV-DNA positive rates in serum and milk in HBeAg positive groups were obviously higher than that in HBeAg-negative group(P＜0.01).However,HBV-DNA in serum and milk were also detected in part of the HBeAg-negative pregnancy women.The HBV-DNA content in serum had positive relation with HBVDNA content in milk(r=0.891,P＜0.05).ConclusionIn HBV-infectious pregnant women,it is found that the HBV-DNA positive rate in milk was less than that in serum,and the content of HBV-DNA in milk was increased along with that increased in serum.Therefore,it is more reliable to determine the risk of hepatitis B virus transmission from mother to infant by quantitative measurement of HBV-DNA in serum and milk.It is helpful in interrupting HBV transmission,deciding the mode of breast-feeding,and guiding breast-feeding,so as to decrease the infectious rate of baby.

Hepatitis B virus;HBV-DNA;Serum;Milk

R714.251

A

1003—6350（2014）13—1958—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0759

2013-11-06)

申红玉。E-mail:shenhongyu_2004@126.com