子宫内膜异位症组织IL－17和FoxP－3的表达及意义

王福玲，林伟，冯春蝶，袁芳，张华玲，崔竹梅

（1 青岛大学医学院附属医院妇科，山东 青岛 266003； 2 漯河市中心医院妇产科）

子宫内膜异位症（EMs）是一种常见的妇科疾病，近来发病率有上升趋势，其发病机制不清。目前认为EMs的发病与免疫因素密切相关，EMs甚至被认为是一种自身免疫性疾病。Th17细胞、调节性T细胞（Treg细胞）是近年来发现的CD4＋T细胞新的亚群，它们在维护人体免疫平衡中发挥重要作用。Th17细胞的增多见于许多慢性自身免疫性疾病，而Treg细胞可以控制其他T细胞（包括Th17细胞）的增殖和活化［1］。白细胞介素17（IL－17）和转录因子FoxP－3分别是Th17和Treg细胞的标志性分子，在其各自分化发育及功能维持方面起着关键作用［2－3］。目前，IL－17和 FoxP－3在 EMs中的作用仍不清楚。本研究旨在探讨免疫因素在EMs发生发展中的作用，以期为临床治疗EMs提供依据。

1 资料与方法

1.1 标本来源

2012年1—6月，选取在我院妇科行手术治疗、病理诊断为EMs病人的异位内膜组织（巧克力囊肿的囊壁）35例，其中20例因不孕同时行宫腔镜检查术，术中取其在位内膜组织。病人年龄31～46岁（中位年龄38岁），均月经规律，处于月经第5～10天，术前3个月内无相关激素用药史。选取因妇科良性疾病在门诊行宫腔镜检查病人的内膜组织15例作为正常对照，病人年龄29～49岁（中位年龄35岁），术后病理证实子宫内膜均为增殖期。

1.2 染色方法

采用免疫组织化学Envision二步法，严格按照免疫组化试剂盒说明步骤进行操作。兔抗人IL－17、FoxP－3单克隆抗体（工作液）均购自北京博奥森生物技术有限公司，免疫组化通用型试剂盒为美国ZYMED公司产品。

1.3 结果判定

IL－17及FoxP－3表达以淋巴细胞的细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。在高倍镜下（200倍）每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个细胞。阳性细胞数＜5%为阴性（－），≥5%为阳性（＋）。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0软件进行统计学处理。组间率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 IL－17在不同内膜组织中的表达

在位内膜及正常内膜组织间质细胞中可见散在表达IL－17的细胞，阳性细胞密度远低于异位内膜组织。在位内膜及正常内膜组织中内膜腺体细胞亦表达IL－17，而且在位内膜腺体细胞阳性表达率明显高于正常内膜（图1A、B、C）。异位内膜、在位内膜及正常内膜组织IL－17阳性表达率分别为85.71%（30／35）、20.00%（4／20）和6.67%（1／15），各组差异均有统计学意义（χ2＝36.32，P＜0.05）。

2.2 FoxP－3在不同内膜组织中的表达

在位内膜及正常内膜间质细胞中可见散在分布FoxP－3阳性细胞，阳性细胞密度远低于异位内膜组织。在位内膜及正常内膜组织中内膜腺体细胞亦表达FoxP－3，但在位内膜与正常内膜腺体细胞的表达强度差别不明显（图1D、E、F）。异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中FoxP－3的阳性表达率分别为82.86%（29／35）、30.00%（6／20）和 46.67%（7／15），其中异位内膜组织FoxP－3的阳性表达率显著高于在位内膜及正常内膜组织（χ2＝16.23，P＜0.05），而在位内膜与正常内膜组织相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 IL－17与FoxP－3蛋白在不同内膜组织中的表达

3 讨 论

EMs是育龄妇女的常见病，育龄妇女其发病率约为5%～20%［4－6］。本病主要表现为痛经、月经失调和不孕，严重影响中青年妇女的健康和生活质量。EMs发病机制至今不明，经血逆流学说虽被广为接受，但多数妇女月经期都有经血反流现象，却只有少数妇女患病，因此，近年来已有越来越多的观点认为其发病与病人自身免疫及局部炎症因素有关。有研究表明，腹腔液中IL－17浓度与EMs病人临床分期及不孕有关［7］。国外有报道，异位妊娠病人蜕膜中表达FoxP－3的CD4＋T细胞比例明显低于EMs病人异位内膜及正常分泌期子宫内膜［8］。本文研究结果显示，异位内膜组织中IL－17和FoxP－3的阳性表达率均明显高于在位内膜及正常内膜组织，而在位内膜组织中IL－17的表达明显高于正常内膜组织，而FoxP－3在EMs病人在位内膜组织中的表达略低于正常内膜组织。

Th17细胞是除Th1／Th2之外发现的一种新型CD4＋T细胞，IL－17则是Th17细胞特异性分泌的细胞因子，IL－17包括IL－17A、IL－17B、IL－17C、IL－17D、IL－17E（IL－25）和IL－17F，其中IL－17A 起主要作用，它是由155个氨基酸残基组成的糖蛋白。HIRATA 等［9］研究显示，IL－17A 及其受体表达于EMs病人的异位内膜组织及腹腔液细胞中，推测Th17细胞渗透入EMs病人病灶部位特异性表达IL－17A，通过IL－17A促进基质细胞分泌IL－8、环氧合酶－2，最终促进基质细胞增殖、EMs病灶发展。HIRATA等［10］的研究结果还显示，异位内膜组织中Th17细胞表达CCR6，而CCR6以病灶中基质细胞分泌的CCL20为配体，可能正是由于这种配体受体的结合，吸引并募集血液中表达CCR6的Th17细胞向异位病灶聚集，而Th17细胞分泌的IL－17刺激基质细胞进一步表达CCL20，这种循环有可能是EMs进一步发展的机制之一。

Treg细胞是2003年由RUDENSKY和SAKAGUCHI发现的一种特殊CD4＋T细胞。Treg细胞来自于胸腺，这些细胞离开胸腺后到达外周循环，正常情况下处于失能状态，一旦出现炎症－免疫反应则发挥其抑制功能。该细胞活化后可抑制CD4＋T细胞和CD8＋T细胞的活化、增殖；同时，还可抑制B细胞的免疫应答，从而抑制自身免疫疾病的发生。FoxP－3在Treg细胞发育及功能维持方面起着关键的作用，是Treg细胞的标志性分子。本研究结果显示，异位内膜组织中FoxP－3蛋白表达明显高于在位内膜及正常内膜组织，这与CHEN等［11］的研究结果一致，说明异位病灶的发展与Treg细胞的增多有一定关联。除FoxP－3外，Treg细胞还表达细胞毒 T 淋巴细胞相关抗原－4（CTLA－4）、CD40、CD28、IL－4、IL－10和 TGF－β，这些细胞因子抑制效应T淋巴细胞，在抑制自身免疫、免疫耐受方面起至关重要的作用。在器官移植病人中Treg细胞对抑制排异反应有重要贡献，此外在正常妊娠中Treg细胞能有效抑制母体对胎儿的排异反应，保护正常妊娠进行。有研究结果表明，妊娠妇女外周血及妊娠组织中Treg细胞数量增多，而习惯性流产妇女外周血中Treg细胞数量减少，Treg细胞数量与人绒毛膜促性腺激素水平高低有关［12］。鉴于此，考虑Treg细胞在异位内膜组织中的数量多少能影响局部免疫平衡，推测增多的Treg细胞在异位内膜组织局部间接或直接抑制效应T淋巴细胞对异位内膜的识别、清除，使异位内膜得以存活并促进异位病灶的发展。

本文的研究结果表明，不仅异位内膜组织IL－17及FoxP－3蛋白表达增高，在位内膜组织IL－17及FoxP－3蛋白表达也出现一定程度改变。这与郎景和［13］关于EMs的发病与病人在位内膜的特性有关这一论断相一致。推测可能是异位内膜刺激各种免疫细胞聚集于病灶的同时，部分免疫细胞同时侵入在位内膜组织所致。

综上所述，IL－17及FoxP－3在异位内膜组织中的过度表达，提示Th17和Treg细胞可能在EMs的发生发展过程中起一定的促进作用，鉴于Th17及Treg细胞均为CD4＋T细胞，以分析CD4＋T细胞内部比例的失调为出发点，可为探讨EMs的发病机制，寻找治疗的新靶点及进一步提高治疗效果提供理论依据。

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