苦参苍术口服液急性毒性研究

高艳艳　周德刚　高富红

摘 要：为了考察苦参苍术口服液的安全性，按《兽药注册资料汇编》的要求，选用小白鼠进行了急性毒性试验。结果显示，苦参苍术口服液灌胃给药的LD50为20.51 mL/kg，相当于生药量68.91 mL/kg，可判断苦参苍术口服液为小毒。95%可信限（可信区间）范围为16.37～25.90 mL/kg，相当于禽临床用量的27.3～43.2倍，说明苦参苍术口服液临床使用安全。

关键词：苦参苍术口服液；急性毒性

苦参苍术口服液是洛阳惠中兽药有限公司依托“十一五”国家科技支撑计划项目“中兽药现代化技术研究与开发”研制出的三类新兽药，农业部于2012年3月26日颁发新兽药证书，证书号：（2012）新兽药证字11号。它由茅苍术、苦参按一定配比制成，具有较强的抗菌作用，对畜禽大肠杆菌等细菌病感染有很好的疗效，并能抑制耐药菌株的产生。为了考察其临床安全性，本试验通过小鼠灌胃给药，观察苦参苍术口服液的急性毒性，评价其安全性，为临床用药提供指导。

1 试验材料

1.1 供试药品 苦参苍术口服液：批号20080801，规格：100 mL∶366 g生药，洛阳惠中兽药有限公司。

1.2 受试动物 健康未交配的昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，购自河南省实验动物研究中心，许可证号：SYXK（豫）2005-0012。体重20±2 g。试验前小鼠雌雄分笼饲养，入舍后观察3 d使其适应环境。

2 试验方法

2.1 预试验

共设5个剂量组，每组4只动物（雌雄各半），5个组分别按40 mL/kg·bw、20 mL/kg·bw、10 mL/kg·bw、5 mL/kg·bw、2.5 mL/kg·bw灌胃苦参苍术口服液，相当于生药量146.4 g、83.2 g、46.7 g、23.4 g、11.7 g，灌胃前动物禁食12 h，自由饮水。

根据给药剂量将供试药物进行稀释，稀释后各组药液浓度与原液的比为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，各组每20 g体重灌胃0.4 mL/次，1 d2次，给药后观察各组动物的发病及死亡情况。具体给药情况见表1。得出100%死亡与0%死亡的剂量分别为40 mL/kg和10 mL/kg。

2.2 正式试验

2.2.1 给药方式

经口急性试验，给药前一天从20：00至次日8：00禁食，自由饮水，各组灌胃0.4 mL/次，1 d2次，总剂量作为1 d剂量。

2.2.2 给药剂量与分组

根据表2显示结果，给药剂量40 mL/kg为100%死亡剂量（b），10 mL/kg为0%死亡剂量（a），b/a=4，比值为4～10之间，正式试验分为5组，按下列公式求得相邻两组剂量比值（r）：

各剂量组给药剂量见表2，根据体重计算各组的给药量。

2.2.3 经口LD50测定

取健康小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，采取灌胃方式给药，各组的给药剂量分别为9.5 mL/kg、13.6 mL/kg、19.5 mL/kg、27.9 mL/kg、40 mL/kg，相当于生药含量31.8 g/kg、45.6 mg/kg、65.4 mg/kg、93.7 mg/kg、134.4 mg/kg。小鼠灌胃后观察7 d，观察动物的一般健康状况、中毒表现、死亡过程和死亡数量。

2.2.4 数据处理及毒性判定标准

采用改良寇氏法计算，公式如下：LD50及其95%可信限（FL）计算公式[1]：

式中：Xm——最大剂量的对数值；i ——相邻剂量比值的对数；p ——各组剂量的死亡率；q——各组剂量的存活率； ——各组死亡率之和；n ——各组动物数；Pm 最高死亡率；Pn 最低死亡率；

_lgLD50的标准差。

根据表3中药毒性分级标准，判断苦参苍术口服液毒性级别。

3 试验结果与分析

3.1 预试验

给药后1、2、3组均有部分动物出现明显中毒症状，灌胃后首先表现为不安，然后呆滞、静卧，对刺激反应减弱，给药后20 min出现异常兴奋，骚动、跳跃，最后卧地不起，呼吸困难，突然蹦跳，有的出现泳样运动，最终死亡。各组动物死亡情况见表4。

3.2 正式试验

灌胃后，50只小鼠全部出现中毒症状，症状为灌胃后不安到处走动，几分钟后表现为呆滞，对刺激反应迟钝，闭眼、卧地，大约给药后30 min小鼠出现异常兴奋，突然跳跃，倒地，艰难行走，呼吸困难，后肢蹬地，最后死亡，小鼠死亡情况见表5。剖检后除见肺脏有出血点外，其他脏器未见异常。

根据表5的结果，采用改良冦氏法计算苦参苍术口服液对小鼠0%和100%致死量组，按等比数级排列，如果出现相邻的重复0%或100%，应将靠边的组舍去不计，使大剂量组只有一组100%死亡[1]，计算LD50[2]：

LD50的95%可信限=lg-1（lgLD50±1.96×Sx50）=16.37～25.90

苦参苍术口服液100 mL含生药336 g，对小鼠的LD50为20.51 mg/kg，相当于生药68.91 g/kg，95%可信限为55～87.02 g/kg。

4 结论

根据表3中药毒性分级标准，经口给药后小鼠符合以下四项，脏器损伤：少见脏器损伤；用量较大时：不易死亡；LD50灌胃大于50 g/kg；有效量与中毒量距离为很远，判为小毒。鸡临床用量为1 L水添加苦参苍术口服液1 mL，通过体表面积及种间换算系数[3]换算成小鼠的用量为0.6 mL/kg，苦参苍术口服液对小鼠的安全范围为16.37～25.90 mL/kg，相当于禽临床用量的27.3～43.2倍，说明苦参苍术口服液临床使用安全。

（编辑：郭远）

参考文献：

[1] 沈建忠，王建华，王大菊，等.动物毒理学[M].北京：中国农业出版社，2002.92-93.

[2] 谢秀琼主编.中药新制剂开发与应用[M].北京：人民卫生出版社，2002.533-541.

[3] 赵伟，孙国志.不同种实验动物间用药量换算[J].畜牧兽医科技信息，2010（5）：52-53.