牛奶中硫氰酸根的检测方法优化

刘洋　葛怀礼　于和水

摘 要：建立离子色谱法检测牛奶中硫氰酸根的检测方法，解决了杂峰对样品峰的干扰。样品经乙腈沉淀蛋白，冷冻离心，取上清液过RP柱待测。优化了色谱条件，以5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸钠为缓冲液，保留时间为12.5 min，回收率在94.51%～104.21%之间，RSD为1.95%。定量范围为0.1～2.0 μg/mL，检出限为0.02 μg/mL，本方法简单快速，重现性好，灵敏度、准确度高，适用于牛奶中硫氰酸根的检测。

关键词：离子色谱；牛奶；硫氰酸根

Abstract：Detection method of thiocyanate by ion chromatography was established in milk， solve the interference peak to peak. Samples were first deproteined with acetonitrile， deproteinized by high-speed frozen centrifugation， purified with the RP column. Under the optimal conditions， with 5% of acetone and 5.0 mmol/L of sodium carbonate as the running buffer. Retention time was 12.5 min. The recoveries ranged from 94.51% to 104.21%， and average relative standard deviation was 1.95%. The liner range is 0.1～ 2.0 μg/mL with the detection limit of 0.02 μg/mL. The method is simple and rapid， reproducible， sensitive， accurate， suitable for the detection of thiocyanate in milk.

Key word：ion chromatography； milk； thiocyanate

我国1995年发布了GB/T15550—1995《活化乳中乳过氧化物酶体系保存生鲜牛乳实施规范》[1]，添加硫氰酸钠15 mg/kg利用乳过氧化物酶、硫氰酸根和过氧化氢组成了生鲜乳保存体系，防止牛奶变质。但由于硫氰酸钠的毒副作用及其滥用，2008年12月15日，卫生部印发《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用食品添加剂品种名单（第一批）》。名单明确指出：硫氰酸钠严禁用于乳与乳制品中。硫氰酸根的检测方法有分光光度法[2]、点位滴定法[3]和离子色谱-质谱分析法[4]，但是没有形成统一的国家标准。本人在硫氰酸根的日常检测中，对检测方法的一些细节进行了调整和优化，从而达到适应本单位仪器设备的目的。

1 材料方法

1.1仪器和试剂

瑞士万通离子色谱883型；超纯水；乙腈（色谱纯）；硫氰酸钾标准品，纯度99%，天津元力化工有限公司；冷冻离心机；固相萃取小柱（RP柱 3mL）电子天平；鼓风干燥箱。

1.2上机条件

色谱柱：Metrosep A supp 4 250/4.0

保护住：Metrosep RP 2 Guard/3.5

流动相：5 mmol/L Na2CO3以及5%的丙酮

流速：1.0 mL/min

定量环体积：100 μL

1.3标准品的制备

将硫氰酸标准品于80℃烘箱内烘干2 h。准确称取干燥后的硫氰酸钾1.673 2 g于1 000 mL容量瓶中，定容，混匀。即得1 mg/mL硫氰酸根标准储备液。

标准使用液浓度：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL。

1.4样品的制备

移取8.0 mL生鲜乳样品，加入10.0 mL乙腈沉淀蛋白5 min，冷冻离心，移取上清液过RP柱上机待测。

1.5计算公式

C —样品中硫氰酸根的浓度（μg/mL）

C1—上机液体中硫氰酸根的浓度（μg/mL）

2 结果与分析

2.1碳酸钠和碳酸氢钠比例

缓冲液中碳酸钠和碳酸氢钠的浓度主要由所用色谱柱的型号决定，Metrosep A supp 4 250/4.0型色谱柱的通用的流动相比例为1.7 mmol/L 碳酸钠，1.8 mmol/L碳酸氢钠，然而在实际检测过程中会有杂峰的干扰，分离度不好，通过配置不浓度配比的碳酸钠和碳酸氢钠，检测同一有杂峰的牛奶样品，其对分离度结果见表1。可见碳酸钠和碳酸氢钠的浓度配比是分离度主要影响因素，当只加5.0 mmol/L碳酸钠时分离度最好，R=5.57。

2.2有机相的选择

有机相文本选用5%丙酮，丙酮主要作用是改善峰型，提高了准确性，缩短出峰时间，提高工作效率。图1 为检测不同浓度5个标准样品的峰型图，观察保留时间，结果见表2，平均保留时间为12.64 min。

2.3标准曲线线性

测定标准系列为y = 0.195 1x - 0.000 7； y：峰面积，x：浓度；相关系数为0.999 86。

2.4加标回收

按样品处理方法制备了0.75、0.52和0.80 μg/mL 三种不同牛奶样品溶液，用优化后的方法分别测定样品中的硫氰酸钠根的含量回收率结果见表4，加标回收在94.51%～104.21%之间。

2.5精密度

对硫氰酸根浓度为1.15μg/mL的样品进行精密度的测定，9次测定结果见表7精密度为1.99%。

2.6检出限

依据仪器设定的检出限程序，连续测定空白溶液20次，选用3倍的空白样品噪音的响应值计算仪器的检出限，计算出本方法的检出限为0.02 μg/mL。

3 小结

本文优化了缓冲液中丙酮、碳酸钠和碳酸氢钠的浓度配比，解决了当有杂峰分离不清的问题，缓冲液成分为5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸钠时，分离度和保留时间为最佳，分离度为5.36，保留时间为12.5 min左右，提高了检测效率，回收率在94.51%～104.21%之间，RSD为1.95%，检出限为0.02 μg/mL，其结果表明方法准确可靠，适用于碳酸体系离子色谱检测牛奶中的硫氰酸根。（编辑：何芳）

参考文献：

[1] GB/T 15550-1995 活化乳中乳过氧化物酶体系保存生鲜牛乳实施规范.

[2] 李卫群，单胜艳，朱慧 分光光度法测定乳与乳制品中硫氰酸钠的含量[J].中国食品添加剂，2010（03），240-243.

[3] 曾云龙，唐春然 直接电位法测定工业废水的硫氰酸根的含量[J].分析测试实验室，2001，20（3）：66-68.

[4] Martinelango P K， Gumus G， Dasgupta P K. Matrix interference free determination of perchlorate in urine by ion association–ion chromatography–mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta， 2006， 567（ 1 ）： 79-86.