几种植物组织石蜡制片技术的探讨

陈海魁

摘要 [目的] 近年来植物切片技术出现多种方法，无论是在方法还是步骤的改进，都是以省工省时、节约药剂或减少环境污染以及安全为目的。 [方法]以常用的几种植物制片技术为理论依据，对这些方法及各步骤加以讨论，了解各种方法的利弊。[结果]使用蛋白甘油和铬钒明胶2种粘片剂，结果表明后者的效果较好。[结论]这为以往植物制片时脱片问题提供一个可靠的方法。

关键词植物组织；石蜡制片；技术

中图分类号S189文献标识码A文章编号0517-6611（2014）28-09677-01

Discussion on Several Plant Tissue Paraffin Section Technology

CHEN Haikui

（School of Life Science， Beifang Univesity of Nationalities， Yinchuan， Ningxia 750021）

Abstract[Objective] In recent years， there were a variety of plant slicing methods. At the aspects of the improvement in the methods or the steps， the purpose was laborsaving and timesaving， conservation agents and reduction of environmental pollution and security. [Method] Several plant production technologies were used as the theoretical basis. These methods and steps were discussed， and the advantages and disadvantages of various methods were clarified. [Result] Two clay tablets of protein glycerol and chrome vanadium gelatin were used. Results showed that the latter was better. [Conclusion] The research provided a reliable method for the past plant producers off problem.

Key wordsPlant tissue； Paraffin section； Technology

隨着生命科学的不断发展，组织制片成为生物学各个领域研究中必不可少的材料处理方法和前提，尤其是细胞组织化学、免疫细胞组织化学、细胞酶化学等学科的研究。制片的好坏直接影响试验的成败和结果的真实性。以植物石蜡切片为例，近年来报道主要有植物组织多重整体染色、未脱蜡植物组织染色和植物组织混合染液染色法等。不论是哪种方法，多是以传统的石蜡制片方法为基础，同时达到高效、成本低、污染少和安全的目的。以上述3种方法为依据，笔者采用番红-固绿双重染色对3种方法的染色效果加以论述。

1材料与方法

1.1材料

供试材料有宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）幼茎和叶、橡皮树（Ficus elastica）叶片、榆（Ulmus pumila）茎、核桃（Jugians regia L.）幼茎、红叶李（Prunus cerasifera）幼茎、垂柳（Salix babylonica）茎。将材料茎切成5 mm以下适当长度的小段，将叶片切成1 cm2小片，并且投入FAA固定液中固定24 h，备用。

1.2方法

1.2.1

多重整体染色法[1]。浓度70%酒精浸泡2 h；浓度50%酒精浸泡2 h；浓度1%番红（浓度50%酒精配置）40 ℃下染48 h，达到过染；浓度70%、80%酒精脱水0.5～1.0 h；浓度1%固绿（浓度90%酒精配置）染色1～4 h（叶片时间在0.5 h以下）；切下一薄片镜检；浓度95%酒精脱水、分色1.0 h（叶片时间0.5 h以下）；浓度100%酒精脱水2次，每次2 h（叶片时间1 h以下）；2次二甲苯透明，每次1～2 h（叶片时间1 h以下）；切片、展片及粘片；脱蜡与封片。

1.2.2

未脱蜡组织切片染色法[2]。常规制片，切片厚度8 μm，水面展片后粘片，在56～58 ℃温箱烤片12～24 h；将未脱蜡切片放入浓度1%番红（浓度70%酒精配置）中，38 ℃温箱内染1 h以上；将切片取出后，以浓度70%酒精稍洗，除去多余染液，晾干后放入浓度1%固绿（浓度95%酒精配置）中，室温染色10～20 min ，叶片等幼嫩组织时间稍短；最后，切片以浓度95%酒精冲洗，除去浮色，烘干后直接用二甲苯脱蜡封片即可。

1.2.3

混合染液染色方法[3]。

1.2.3.1

番红-固绿混合染液的配制。浓度1%番红（浓度70%酒精配置）、浓度0.25%固绿（浓度95%酒精配置）两者以1∶1比例混合均匀，储瓶备用。

1.2.3.2

石蜡切片常规方法复水至浓度80%酒精中1～2 min，移入混合染液中，染色1～2 h后再放入浓度95%、100%酒精中脱水、分色，每级5 min，最后透明封片。

2 结果与分析

使用以上3种方法制作植物石蜡切片，取得理想的结果。木质化细胞壁染成红色，纤维素细胞壁和细胞质染成绿色；叶片中海绵细胞、栅栏细胞及纤维素细胞壁染成绿色，叶脉中木质化细胞壁染成红色。由表1可知，虽然3种方法都取得相似的效果，但是所用时间、染色用量、适用材料条件及步骤的复杂程度等不同。